茚三酮显分光光度法测定食品中α-氨基酸含量的方法探讨 丁永霞
【摘 要】采用茚三酮显分光光度法测定食品中α-氨基酸的总含量,通过试验摸索,确定了以甘氨酸为标准品、茚三酮为显剂的测定方法.试验结果表明,该方法的最佳反应条件为:pH值5.5,在沸水浴中加热显20 min,常温条件下的最大吸收波长566 nm.用甘氨酸配制系列标准溶液,通过标准曲线法对待测溶液进行定量分析,其相关系数为0.999 5,回收率在95.5％～104.3％范围内,表明该方法具有操作简便、结果准确、重现性良好的特点. 【期刊名称】《食品工程》
【年(卷),期】网友世界2017(000)001
【总页数】3页(P55-57)
【关键词】茚三酮;分光光度法;α-氨基酸;甘氨酸
【作 者】丁永霞
焦菊隐
【作者单位】菏泽市疾病预防控制中心,山东菏泽274010
【正文语种】中 文
【中图分类】TS207.4
UV—2550紫外可见分光光度计，日本岛津公司；FA2004N电子分析天平，上海精密科学仪器公司；石英比皿（1cm）；玻璃比皿；容量瓶；移液管；吸管；蒸馏烧瓶；加热套；pH试纸。
盐酸溶液，浓度6 mol/L，分析纯；甘氨酸，优级纯；茚三酮试剂，分析纯；乙酸，分析纯；乙酸钠，分析纯；NaOH溶液，浓度1 mol/L，分析纯；酚酞指示剂。
乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH=5.5）：精确称取50 g乙酸钠 （CH3COONa·3H20） 于烧杯中，加入150mL蒸馏水，用移液管移取2.50mL冰醋酸，加热溶解，冷却后转移到250mL容量瓶中，用馏水定容至刻度。
茚三酮乙二醇溶液（质量浓度3%）：精确称取3 g水合茚三酮，加入50mL乙二醇，低温加
热溶解后，转移至100mL容量瓶中，用乙二醇定容至刻度，转移到试剂瓶后置于0℃～5℃冰箱中保存备用（临用时配）。
else的用法甘氨酸标准储备液：准确称取0.1000 g甘氨酸标准品，加馏水溶解定容到100mL容量瓶中，摇匀，转移到玻璃试剂瓶后置于0℃～5℃冰箱中备用，此溶液质量浓度为1000 μg/mL。
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精确称取5 g样品于蒸馏烧瓶中，加入30mL 6 mol/L的盐酸溶液，在100℃的沸水浴中加热水解10 h。冷却后过滤，并用少量的水冲洗过滤漏斗中的残渣，将溶液定容至100mL容量瓶中。取1.00mL样品溶液于烧杯中，加入20mL蒸馏水、2滴酚酞试剂，用1 mol/L的NaOH溶液滴定，使其pH值在5～7之间，记录所需NaOH溶液的体积。取出1.00mL样品溶液于50mL容量瓶中，加入所需体积的NaOH溶液，配置pH值在5～7之间的样品稀释溶液，备测。分别吸取样品稀释液 2.00mL和0.0 μg/mL、10.0 μg/mL、25.0 μg/mL、50.0 μg/mL、75.0 μg/mL 的甘氨酸系列标准溶液2.0mL置于20mL比管中，加入乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH=5.5） 5.0mL，充分摇匀后，加2.0mL质量浓度3%的茚三酮乙二醇溶液，摇匀，于沸
水浴中加热，颜变化后计时20min，计时结束后取出试管，冷却至室温，倒入比皿中，以0.0 μg/mL的甘氨酸溶液为参比，在566nm波长处测定吸光度，并绘制标准曲线，计算出样品含量，同时做试剂空白。样品及标准溶液的吸光度值见表1。
根据测定结果求得其回归方程为y=0.0137x+0.0035，相关系数R2=0.9996。结果表明，标准溶液的浓度在 0 μg/mL～100 μg/mL 范围内有良好的线性关系。
用紫外分光光度计（1cm石英比皿）对样品显溶液进行比（范围190nm～700nm），发现最高峰值在可见区566nm处，换玻璃比皿对溶液进行验证（范围400nm～700nm），最高峰值仍在566nm处，故选取566nm为最大吸收波长。吸收光谱见图1和图2。
取6.0mL质量浓度为100 μg/mL的甘氨酸标准工作液于50mL比管中，加入15.0mL乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=5.5） 和6.0mL质量浓度3%的茚三酮乙二醇溶液，摇匀，于沸水浴中加热，当溶液有颜变化时开始计时，每过5min取出约5mL溶液，冷却，测定其吸光度，结果见表2、图3。由图3可知，加热20min时吸光度数值基本稳定，因此选择20min时为最佳加热时间。
英格兰申办世界杯取2.0mL质量浓度为100 μg/mL的甘氨酸标准工作液于试管中，各加入5.0mL乙酸-乙酸钠缓冲液 （pH=5.5），分别加入 1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL质量浓度3%茚三酮乙二醇溶液，在沸水中水浴加热，待显20min时取出测吸光度。测定的各显体系的吸光度见表3、图4。
由图4可知，随着显剂用量的增加，吸光度不断增大，当显剂用量超过3.0mL时吸光度开始下降，显剂用量为2.0mL时的显稳定度好、显速度较快，因此选择显剂用量为2.0mL。
取2.00mL样品稀释液进行多次测定（n=5），计算其α-氨基酸总含量，结果见表4。
由表4可以看出，样品稀释液的α-氨基酸含量为78.53 μg/mL，标准偏差为0.33，相对标准偏差为0.42%。
为了确定测量的准确度，取一定量的样品液，测定其α-氨基酸总量作为本底量，以5 μg/mL、10 μg/mL的甘氨酸分别作为加标量，测定回收率,结果见表5。
由表5数据可知，回收率在97.4%～103.4%范围内，表明该方法测定结果准确可靠。
本研究采用茚三酮显分光光度法测定食品中的α-氨基酸总含量，该方法具有操作简单、快速和重现性较好等优点，通过试验得出最佳试验条件为：pH值5.5，沸水浴加热20min，最佳吸收波长566nm。此试验条件下，该方法的变异系数0.42%，平均加标回收率为100.02%。
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