萎缩性胃炎胃粘膜组织细胞p53及PCNA蛋白表达

中外医疗

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2008NO .19

CHI NA FO REI GN M EDI CAL TREATM ENT

基础医学

研究表明，长期热咸饮食可以导致慢性萎缩性胃炎[1]。慢性萎缩性胃炎与胃癌发生密切相关，其被列为胃癌前状态[5]。现已公认胃粘膜细胞癌变常需经历萎缩性胃炎/伴肠化-不典型增生-胃癌的过程[6]，此过程中癌基因、抑癌基因的作用意义重大。p53蛋白是53kD 的核磷酸蛋白质，参与细胞周期和细胞增殖的调节。正常细胞中p53蛋白含量较低，半衰期短，用一般的免疫组化方法很难检测。当p53基因发生突变时，所表达的p53蛋白构型发生变化，在细胞内半衰期延长，导致细胞恶性增殖，此时组织中可检测出p53蛋白[4～5]。本研究利用激光扫描共聚焦显微镜(l as er sc anni ng conf oca l m i c r oscope ,LSC M )的高分辨性及同屏显示不同发射波长荧光的特性，观察p53及PCN A 蛋白在大鼠萎缩性胃炎胃粘膜组织细胞中的表达情况。1材料与方法1.1

材料

7周龄健康、性成熟的雄性SD 大鼠(由第四军医动物实验中心提供)64只，体质量200～250g，按随机化原则分为3组，即正常喂养组、正常对照组和热盐水组。每组各20只。采用架式笼养，恒温(24±1)℃，湿度50%～60%。1.2干式煤气柜

方法

重建人类社会>电视剧大祠堂大鼠萎缩性胃炎模型的制作：正常喂养组为正常喂养，饮白开水；正常对照组为25℃白开水灌胃，每次2.5m L ,1次d -1；热盐水

组为55℃15%氯化钠灌胃，每次2.5m L,1次

d -1。实验开始，先

处死4只正常组大鼠，并留取胃大体标本作为对照。以后各组分别于4周、8周、12周、24周、32周、65周各随机取4只，以观察粘膜萎缩情况，具体方法参见文献[6]。

免疫荧光及激光扫描共聚焦显微镜检测技术：按身体质量与给药容积比值为0.5%腹腔注射麻醉，取出鼠胃，沿大鼠胃小弯条状取材，包括胃窦及部分胃体，做组织切片。胃粘膜组织p53及PCN

A 蛋白表达采用激光共聚焦免疫荧光双标方法。所需仪器(荧光显微镜、恒温箱、荧光分光光度仪、电镜、共焦镜等)由第四军医大学提供，免疫荧光双标记检测试剂盒由武汉博士德公司提供。

具体步骤:⑴将组织切片在二甲苯中浸3次，每次10m i n；脱蜡后切片依次浸入L L -1、5L

L -1、L

L -1梯度乙醇中脱二甲苯，每次；至蒸馏水中浸5,L 的B S

振洗3次，每次5m i n；正常山羊血清封闭,37℃,30m i n;⑵分别滴加50m ol /L 的1∶1混合的兔抗大鼠p53(1∶100)和小鼠抗大鼠PCN A (1∶200)，设空白对照(无一抗，加PB S)和抗体特异性对照(加一抗不加二抗，加二抗不加一抗)，所有切片同时染。切片一抗加入后，置于湿盒内,4℃，过夜;⑶取出后37℃复温60m i n,0.01m ol

L -1的

PB S 振洗3次，每次5m i n；免疫荧光双标记分别滴加50m oL/l 的1∶1混合的FI TC 标记的羊抗小鼠I gG 和罗丹明标记羊抗兔I gG ,37℃,40m i n;0.01m ol

L -1的PBS 振洗3次，每次5m i n;10%的缓冲甘油

封片;⑷激光扫描共聚焦显微镜观察：所用L SCM 的型号为M RC-1024，装有Z e i s100显微镜，用于FI T C 的激发波长为488nm ,568nm 用于激发Te xa s

Re d，用于图像采集的显微镜物镜为Pl a n -N e of l ua r 40×油浸镜，数值孔径(N A )为1.3，图像存为512×512像素类型，焦距值设为1.0，若需要更大的放大倍数时，可以选择更大的焦距值范围，扫描所用的激光值依据样本不同可以在共聚焦系统提供的梯值中选择。2

结果

光镜结果显示，正常对照组于灌胃8、12、32周时粘膜表面光滑，无糜烂，固有层无炎细胞浸润，粘膜下层无水肿，肌层无炎细胞浸润。正常对照组于灌胃65周时可见粘膜肌层平滑肌轻度增生，呈钉突状向粘膜肌层插入，粘膜出现轻度萎缩改变。热盐水组于热盐水灌胃后第12周大鼠胃粘膜出现腺体明显缩小，粘膜肌层的平滑肌呈束状增

萎缩性胃炎胃粘膜组织细胞

p 53

及

P CNA 蛋白表达

张沥古诗文阅读大赛

张玲霞

复合材料学报

陶梅

宋瑛曹广周

(陕西省西安市中心医院消化科

陕西西安

710003)

【摘要】目的研究热盐水灌胃导致的大鼠萎缩性胃炎(CA G )胃粘膜组织细胞p53及PC N A 表达状态，以探讨长期热咸饮食与慢性萎缩

同度量因素性胃炎发生的关系。方法采用热盐水灌胃建立大鼠萎缩性胃炎动物模型，选取大鼠腺胃胃窦组织行激光扫描共聚焦显微镜标本制备并对组织细胞结构的变化进行动态观察。结果正常组胃粘膜组织细胞未见阳性表达，热盐水组在第12周在细胞核中可见p53及PC N A 阳性表达，到24周、32周及65周时表

达更加明显。双标记中可见两者共同表达。结论热盐水长期灌胃可导致胃粘膜出现萎缩,p53及PCN A 表达增加，在萎缩性胃炎形成过程中,p53及PC N A 蛋白起着重要的调节作用。【关键词】热盐水胃粘膜p53PC N A 激光扫描共聚焦显微镜【中图分类号】R573.4【文献标识码】A 【文章编号】1674-0742(2008)07(a )-0023-

图1

大鼠胃粘膜病理变化(×200)

A ：正常对照组，粘膜表面光滑，无糜烂，固有层无炎细胞浸润，粘膜下层无水肿，肌层无炎细胞浸润;

B ：正常对照组65周时可见粘膜肌层平滑肌轻度增生，呈钉突状向粘膜肌层插入，粘膜出现轻度萎缩改变;C：热盐水组12周，腺体明显缩小，粘膜肌层的平滑肌呈束状增生插入粘膜固有层中。腺体上1/3～2/3腺上皮萎缩，腺管腔变大，胃小凹颈部粘膜宽度变窄。

2CH A E E CA E A E 1000m 90m 700m 2m i n m i n 0.01m ol

-1P

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