尼康A1R共聚焦操作说明
第一章 A1R共聚焦使用总则
第一条共聚焦操作人在自主上机前需提交培训申请，经过导师培训，通过考核
第二条使用共聚焦需至少提前1天向仪器负责人提交申请使用仪器时间段并严
格按照规范使用仪器。
第三条严格按照规范进行开关机，在拍摄过程中如出现任何异常请及时联系仪 器负责人并说明情况，特别注意仪器使用完毕按规范关闭仪器所有开关，清理
好镜头，做好登记，保持房间和台面整洁，出门时关好房灯和房门。
第二章 A1R共聚焦开关机操作说明
共聚焦主要包括：显微镜部分、共聚焦部分和计算机部分，请按照以下顺序进
保心包行开关机。
第一条 A1R-si 开机顺序
1. 打开 UPS 或接线板总电源开关（一般都处于一直开机状态）； 2. 打开需要使用的激光器，不使用的激光器可以不打开（具体见后面）；
七五期间3. 依次打开显微镜的长寿命汞灯电源，卤素灯电源，电动载物台控制电源；
4. 打开显微镜底座右后端的 HUB 控制部件电源；
5. 打开共聚焦控制器左侧面板右上角的控制器开关；
6. 待确认控制器打开的状态下，打开电脑，双击桌面 NIS-Elements快捷图标，
选择confocal 选项进入软件，开始共聚焦操作。
第二条 A1R-si 关机顺序
1. 请先确认关闭软件，再关闭共聚焦控制器（此条请特别注意）；
2. 依次关闭显微镜各个控制部件电源；
3. 依次关闭各个激光器之后，关闭激光器电源总开关；
4. 关掉 UPS 或接线板总开关（遇到如停电等特殊情况时进行此步骤）。
第三条激光器的开关机顺序
各个激光器的开关是独立的。下面分别加以介绍：
首先要打开激光器电源盒前面钥匙旋钮，然后根据需要打开相应的激光器。（1）405nm 激光器
开机：电源开关拨到 ON 位置-- 钥匙开关拨到 I 位置;
关机：钥匙开关拨到 O 位置-- 电源开关拨到 OFF 位置
（2）488nm 多线 Ar离子激光器
开机：确认开关 “标记1”处于 Stand by 位置，钥匙开关“标记2”处于 on 位置，
这时风扇开始转动，打开开关“3”，液晶面板会有数字显示 17 左右-- 将开
关“标记4”由 standby 拨到 operate，液晶面板显示数值 40 左右，打开完成；
关机：将开关“标记4”由 run 拨到 stand by，液晶面板会有数字显示 17 左右时关掉开关“3”即可，488钥匙一直处于开机状态。
（3）561nm 激光器（开关内置在激光底座电源中）：将开关1打开（在后侧）；显示屏上显示100% ，stand by后旋开钥匙开关；关机则顺序相反
（4）647nm激光器
开机：打开开关1，橙灯变绿后打开开关2，然后到电脑界面上打开647光源软件，在界面上com：1为默认，Key打到on，再将功率从20mW逐步调节到200 mW。关机顺序相反。
第三章 A1R显微镜操作与观察说明
第一条认识显微镜主体各部件如下：
显微镜主体示意图：
1.滤光片：“D”: 毛玻璃,
“NCB”: 温平衡片,
“GIF”: 红外滤光片，用于PFS
嗜血dna2.视场光阑；
3.聚光器升降旋钮；
4.起偏器（DIC用）；
5.聚光器对中旋钮；
6.孔径光阑；
7.聚光器模块（包括明视场，DIC）；
8.滤块转盘（包括DIC检偏片）；
9.手动荧光光闸；
10.电动焦距调节旋钮；
11.ND减光片；
12.遥控器；
13.透射光电源；
14.汞灯荧光光源；
15.HUB控制器
第二条认识主机上的控制部件如下，包括前面板控制，侧面板控制和电动载物台控制：
前面板控制
1.状态显示屏；
3.光路端口切换按钮；
4.中间变倍旋纽；
侧面板控制
1. 调焦旋钮
2. 粗微调切换按钮
3. 物镜切换按钮；
4. 滤光块，DIC 检偏器切换按钮
5. 透射光光源开关（当遥控器透射光
源控制按钮打开时，此按钮无效）；
6. 透射光量度调节旋钮（当遥控器透
射光源控制按钮打开时，此旋按钮无效）；
7. 物镜复位
8. 物镜向下移动2毫米
载物台控制面板
第三条其它组件包括：长寿命汞灯遥控器（shutter 按钮进行汞灯开关切换）、载物台遥控器（可通过摇杆进行样品与载物台位置移动，并通过XY 速度控制按钮进行速度调节）
第四条“OC”的使用，使用OC （Optical Configurations ）可快捷控制显微镜状态。（随显微镜设置不同，具体OC 名称与功能细节以工程师说明为准）
第五条所有控制也可在计算机软件中进行操作，调出面板可通过在软件灰空白处鼠标右键菜单选择[Acquisition Controls] -> [Ti Pad]
第六条 Ti-E 物镜，DIC 插片，DIC 棱镜对照表
1. 镜切换按钮
2. 滤光块，DIC 检偏器切换按钮
3. DIC 检偏器快速切换按钮
4. 光路端口切换按钮
合理情绪疗法
5. PFS ON/OFF
报刊征订
6. 聚光器转盘切换按钮
7. 透射光源控制按钮
8. 荧光光强控制
Objective DIC Slider N1/N2
Plan flour10× 10× N1
Plan Apo20× 20× N2
Plan Apo 40× 40×I N2
Plan Apo VC60× 60×I N2
Apo TIRF 100× 100× N2
第七条显微镜常规观察流程如下：
（1）按照顺序正常开机，并打开“NIS-Elements”软件；
（2）在载物台控制界面上选择适当的镜头并进行镜头安装，在油镜和空气镜、水镜切换时应注意镜头擦拭干净；
（3）将样品放置到载物台上，通过遥控器和显微镜的上下焦距调节旋钮将样
品区域放置到镜头的大致位置，然后通过选择明场或者是荧光场在显微镜下到所需要拍摄的区域；
（4）到拍摄目标后，通过光路切换或者OC快捷切换转换到L200显微镜拍摄模式，并在软件中根据自己的需要进行各种参数的设置，获取自己需要的图像和结果（具体调节在后续进行了详细描述）；
（5）将拍摄结果保存到各老师或实验室下的以姓名为文件名的文件中，并用CD或者VCD光盘进行拷贝，禁止使用U盘。
第四章图片拍摄操作详情
第一条 XY图像拍摄
1. 界面调出方式：软件灰空白处，鼠标右击菜单中选择[Acquisition Controls] -> [A1plus Settings]
2. 拍摄流程：
（1）点击 [Laser InterLocked]按钮，解除闪烁状态，使激光可以通
过软件起振。
（2）选择要使用的激光/通道。
（3）要同时获取共聚焦图像和透射图像时，点击TD [IN]按钮，并勾选TD的
勾选框。
遗传学实验（4）在Pinhole的项目中选择要使用的激光波长。
点击[▲Home]按钮，选择与物镜最匹配的针孔尺寸。
（5）点击 [Live]按钮，边观察图像边调节激光功率和检测器的灵敏度HV。
（6）将像素数调整为所需要的分辨率。图像较暗时，请降低扫描速度。
（7）根据需要进行Average。
（8）点击 [XY]按钮以获取图像。激活要保存的图像，从菜单栏中选
择[File] -> [Save As]以进行保存。
3. 图像显示调节
点击按钮调出LUTs窗口进行细致的图像显示调节
4. 扫描区域调节：
（1）点击Scan Area窗口按钮，用鼠标拖动绿边框，以缩小扫描区域。
（2）在鼠标变为十字箭头的状态下移动边框，鼠标右击以决定扫描的位置。可在Zoom中确认缩放倍率。
（3）在绿边框的旋转用点上拖动鼠标，可以进行扫描区域的旋转。
（4）软件灰空白处，鼠标右击菜单中选择[Acquisition Controls] -> [A1plus Scan Area]
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