膜片钳电生理记录技术

工作要求
上海化工设计院膜⽚钳电⽣理记录技术
第⼀节:膜⽚钳技术的基本原理
膜⽚钳技术⽤特制的玻璃微吸管吸附于细胞表⾯,使之形成10~100MΩ的⾼阻封接,被孤⽴的⼩膜⽚⾯积为微⽶数量级,因此封接范围内细胞膜仅有少数离⼦通道。然后对该膜⽚实⾏电压钳位,测量单个离⼦通道开放产⽣的微⼩电流,这种通道的开放是⼀种随机过程。通过观测单个通道开放的电流幅值分布、开放概率、开放寿命分布等功能参数,并分析它们与膜电位、离⼦浓度等之间的关系。将该部分细胞采⽤负压吸破,可以形成最常见的全细胞记录模式,可以研究整个细胞的⽣理功能和离⼦通道电⽣理功能。更进⼀步,还可以把吸管吸附放膜⽚从细胞膜上分离出来,以膜的外侧向外或膜的内侧向外等⽅式进⾏实验研究。这种技术对膜内外溶液成分及施加药物操作都很⽅便。
⼀、记录⽅式:变量间的相关关系
全细胞记录法,膜穿孔记录法(perforated patch clamp),巨膜⽚钳记录法(giant membrane patch clamp),松散封接记录法(loose patch clamp)等
⼆、技术应⽤:
1.为了更换电极内液和从电极内施加药物,发展了微电极内灌技术(micropipette perfusion technique)
2.在研究细胞间的缝隙连接(gap junction)通路时,发展了双膜⽚钳记录法(double patch recording)
3.将富含神经递质受体的游离膜⽚钳靠近突触部位,可检测递质释放和突触活动,这⼀技术称为膜⽚钳探针技术(detector-patch technique)
4.将特异的膜⽚探针插⼊卵母细胞,可检测细胞内第⼆信使含量,此为膜⽚填塞技术(patch cramming technique)
新冠疫苗生产临时性应急标准出台东方莱特5.为研究细胞的胞吞与胞吐机制,发展了膜电容测定法(membrane capacitance measurement)
三、样本种类
tree lang
从最早的肌细胞、神经元和内分泌细胞发展到⾎细胞、肝细胞、⽿蜗⽑细胞、胃壁细胞、上⽪细胞、内⽪细胞、免疫细胞、精母细胞等多种细胞;从急性分散细胞和培养细胞发展到组织⽚乃⾄整体动物;从蜗⽜、青蛙、蝾螈、⽖蟾母细胞发展到鸡细胞、⼤⿏细胞、⼈细胞等;从动物细胞发展到细菌、真菌及植物细胞。此外,膜⽚钳技术还⼴泛地应⽤到平⾯双分⼦层(planar bilayer)、脂质体(liposome)等⼈⼯标本上。
四、研究对象
从对离⼦通道(配体门控性离⼦通道、电压门控性离⼦通道、第⼆信使介导的离⼦通道、机械敏感性离⼦通道及缝隙连接通道等)的研究发展到对离⼦泵、交换体及可兴奋细胞的胞吞、胞吐机制的研究等。
五、膜⽚钳电极已不单单是传统意义上的电信号记录电极,它还可作为其他研究⽅法的⼯具使⽤,如⽤于进⾏单细胞PCR技术时的细胞内容物抽吸。

本文发布于:2024-09-26 02:25:11,感谢您对本站的认可!

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