山町中医茁大学学湫7"8JW实验中医药学2021Vol.22No.1
•“实验”虽然是现代科学研究常用的方法，然在我国却自古有之。古代学者王冲说“等类众多，行事比肩，略举较著，以定实验也”，颜之推说“昔在江南，不信有干H人帐，及来河北，不信有二万斛船，皆实验也”，大凡此义均与现代科学意义上的experiment相通。照此，传统中医药学并非只是经验之学，而更充满实验的思想和方法。实验中医药学，将现代实验科学的方法和传统中医药学的实验方法融合起来，开拓现代实验生物学、医学和药物科学的新领域。
曹韵茗，姜会真，李佳茹，杨郁鹏，司佳弘，任华山，赵季宇，金晓飞，燕平
（山西中医药大学，山西晋中030619）
摘要目的：探究秩边透水道技术对大鼠少弱精症精液密度、活力及血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、睾酮（T）水平的影响。方法：将40只雄性大鼠分成空白组、模型组、肾俞组、秩边透水道组，腺嘌吟灌胃建立大鼠少弱精症模型，肾俞组与秩边透水道组施行针刺，取材后镜下观测记录精子总数与精子活力，计算密度；酶联免疫法检测血清中激素含量。结果：各组间FSH含量比较，差异无统计学意义（Q0.05）。与模型组比较，肾俞组、秩边透水道组LH水平降低，T水平、精子密度及活力均升高，差 异具有统计学意义（P<0.01）。秩边透水道组较肾俞组精子密度及活力升高幅度更大（P<0.05），但两组LH、T水平比较差异无统计学意义。结论：针刺肾俞、针刺秩边透水道对大鼠少弱精症均有疗效，能够显著改善精液的质量，且秩边透水道组的效果更明显。
关键词秩边透水道；针灸疗法；少精症；弱精症；激素
中图分类号:R285.5文献标识码：A DOI：10.19763/jki.2096-7403.2021.01.07
Experimental study on1Zhibian(BL54)through Shuidao(ST28)'acupuncture therapy for rats with asthenospermia and oligospermia
Cao Yunming,Jiang Huizhen,Li Jiaru,Yang Yupeng,Si Jiahong,Ren Huashan,Zhao Jiyu,Jin Xiaofei,Yan Ping
(Shanxi University of Chinese Medicine,Jinzhong Shanxi030619)
Abstract Objective:To explore the effects of Zhibian through Shuidao acupuncture technology on contents of follicle-stimulating hormone(FSH)-^luteinizing hormone(LH/testosterone(T)in serum and sperm density and motility of rats with oligozoospermia and asthenospermia.Methods: 40male rats were divided into blank group,model group,Shenshu group and Zhibian through Shuidao group.The m
odels were established by intragastric administration of adenine.Rats in Shenshu group and Zhibian through Shuidao group were treated with acupuncture.The total number of sperm and sperm motility were observed and recorded under microscope,and the density was calculated.Contents of FSH,LH and T in serum of rats were detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA/.Results: There was no significant difference in FSH content among different groups(P〉0.05).Compared with the model group,T content was decreased,but LH content,sperm density and motility of rats were increased in Shenshu group and Zhibian through Shuidao group(P<0.01).For the above indicators,there was no significant difference in LH and T level between Shenshu group and Zhibian through Shuidao group(P>0.05/,but the improvement in sperm density and motility in Zhibian through Shuidao group was greater than those in Shenshu group(P<0.05/.Conclusion:Acupuncture at Shenshu and Zhibian through Shuidao have curative effect on oligospermia and asthenospermia in rats,and the effect of Zhibian toushui group is more obvious.
Key words Zhibian(BL54/through Shuidao(ST28);acupuncture therapy;oligozoospermia;asthenozoospermia;hormones
男子不育的原因多为少弱精症，少弱精症是指男性精液中精子数量低于正常参考值范围（20x106/mL），或精子运动能力差，甚至不运动［1］。
“秩边透水道”是长针疗法中的特殊刺法，由山西名医冀来喜教授提出并规范了其操作方法，后又通过多年的临床实践和科学研究，逐渐建立起较为成熟的针法体系［2］。基于该针法能够有效泌尿生殖系统疾病，并且普通常规针刺能够对
［基金项目］山西省科技创新团队建设项目（201705D15111332）
［作者简介］曹韵茗，在读硕士,Email: 407*************
［通讯作者］金晓飞，博士，副教授，硕上研究生导师,Etmiil:***************
QJW J曲中医茁大学学叔
2021年第22卷第1期实验中医药学
少弱精症患者的精液质量有所改善［3-4］，本研究欲探究“秩边透水道”针法对腺嘌呤诱导下少弱精症大鼠的精液质量及激素卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、睾酮(testosterone,T)水平的影响，从而为临床提供可靠的实验依据。
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，清洁级、健康、成年雄性，体质量(200±20))g，购于北京市海淀兴旺动物养殖场［SCXK(京) 2014-0013］并于山西中医药大学动物实验中心饲养，室温(25±2)益，湿度55%~60%，噪音低于60分贝，自由摄食饮水。
1.1.2试剂与仪器VetecAdenine(美国SIGMA-ALORICH)；徕卡(Leica)正置生物显微镜(DM400B/ DFC4SOC，徕卡微系统有限公司);Rat Testosterone (T)ELISA Kit96T,Rat Luteotropic hormone(LH) ELISA Kit96T,Rat Follicle-stimulating hor mone (FSH)ELISAKit96T均购置于Bio-Swamp公司。
1.2实验方法
1.2.1分组与造模将40只SD大鼠称重后编号，根据随机数字表法分为空白组、模型组、肾俞组、秩边透水道组4组，每组10只,5只/笼。模型组、肾俞组、秩边透水道组大鼠以20mg/mL腺嘌呤溶液按1mL/100g体质量灌胃，共28d，制备大鼠少弱精症模型。空白组使用等量的生理盐水连续灌胃28d。
1.2.2干预措施模型建立后，肾俞组选取双侧肾俞穴进行针刺干预，深度约为6mm。秩边透水道组方法：大鼠呈俯卧位进行固定，用针灸针快速刺入秩边穴，并往水道穴方向透刺进针，深度8~12mm。皆行平补平泻手法，留针30min,1次/d，连续28d。空白组与模型组只进行等时间的抓取固定，不做其他处理。
1.2.3标本采集与指标观察
1.2.3.1一般情况逐日监测记录各组大鼠毛发光泽、活动状况、反应表现、食量、体质量等方面的变化。
1.2.3.2血清中FSH、LH、T含量大鼠使用10%水合氯醛麻醉，待夹尾无肢体反应后于腹主动脉处进行采血，静置、分离出血清，并遵照ELISA试剂盒说明书对血清中FSH、LH、T的含量进行检测。
1.2.3.3精子质量分析麻醉后断头处死各组大鼠，摘取睾丸、附睾、肾脏等相关脏器，剪取附睾尾部10mg，经离心、孵化、混匀后，在血细胞记数板上行镜下观察，记录精子总数与活力，并计算出精子密度。按照WHO推荐使用的方法对精子活力进行分级并记录。向前运动(PR)：即不考虑速度的情况下能够主动呈直线或沿大圆周进行运动。非向前运动(NP)：即其余非向前运动的形式，如运动轨迹呈现出小圆周型，尾部无法驱动头部，或者仅有尾部运动。不动(IM)：即没有运动。精子活动率=(PR+NP)/PR+NP+IM。
1.3统计学方法
使用SPSS24.0软件对资料进行统计与分析，数据以均数土标准差(士s)表示。计量资料满足正态性且方差齐，组间采取单因素方差分析(One-way ANOVA)进行比较，两两比较以LSD-t 法进行；符合正态分布、方差不齐及不符合正态分布，采用非参数检验比较。以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 —般情况
空白组大鼠无异常情况，模型组、肾俞组和秩边透水道组大鼠均有不同程度的变化，出现毛发发黄，粗糙，光泽度下降，并且整体精神状态欠佳，活动量也有所下降。
2.2血清中FSH、LH、T含量
4组大鼠血清FSH含量比较差异无统计学意义(P>0.05)；与空白组比较，模型组LH含量升高,T含量下降(P<0.01)；与模型组比较，肾俞组、秩边透水道组LH含量降低,T含量升高，差异具有统计学意义(P<0.01)；肾俞组、秩边透水道组LH、T含量比较差异无统计学意义。结果见表1。
表1大鼠血清中FSH、LH、T水平的变化伝士)注：与空白组比较,1P<0.01；与模型组比较,》P<0.01
组别n FSH(mIU/mL LH(IU/L T(nmol/L 空白组10 3.53±0.21 2.19±0.25 2.30±0.22
模型组10 3.67±0.28 5.07±0.42】)0.72±0.121)肾俞组10 3.61±0.30 4.82±0.22)2) 1.58±0.09】)2)秩边透水道组10 3.26±0.44 4.66±1.04)2) 1.57±0.191)2
)
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2.3精子质量
与空白组比较，模型组大鼠精子密度与活力下降明显(P<0.01)，提示造模成功；与模型组比较，肾俞组、秩边透水道组精子密度和活力均升高
(P<0.01)，秩边透水道组较肾俞组精子密度及活力升高幅度更大(P<0.05)o结果见表2o
表2各组精子密度与精子活力的变化(x±s)组别n精子密度(106/mL)精子活力(％)空白组1055.98±7.8537.43±5.22
模型组109.39±2.33°8.17±2.61)
肾俞组1015.95±3.132)13.67±2.152)
秩边透水道组1016.01±2.962)3)18.62±3.622)3)
注：与空白组比较,1)P<0.01占模型组比较,“”P<0.01占肾俞组比较,3P<0.05
3讨论
造成男性不育症的原因大致有先天生殖器异常、内分泌紊乱、免疫性因素以及外界环境污染、化学药物造成的器质性病变，或因功能性病变如早泄、勃起功能障碍、性欲淡漠等，从而引起下丘脑-垂体-睾丸轴调节功能异常［5］，造成睾酮t等激素水平下降，精子密度和精子活力也随之下降。
用以维持男性生殖系统正常功能的雄激素，是精子得以产生、发育和成熟的基础，主要为睾酮(T)，经由生物轴下丘脑-垂体-睾丸实行双向调控分泌［6］o呈脉冲式分泌的促性腺激素释放激素(GnRH)由下丘脑产生并作用于垂体，使垂体前叶继而分泌合成卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)，睾丸内的间质细胞受到LH的刺激生成睾酮，以促进精子的成熟；而FSH通过结合相应受体提高曲细精管腔的睾酮浓度，进而加快成熟精子的分化程度［7］，所以说睾酮的含量直接影响到精子的质量。
在一些生殖泌尿疾病的中，针灸已作为一种常用的手段和方法。在临床实践中，作为传统针法的秩边透水道技术已得到广泛使用。从其经络属性上来看，秩边穴归属于膀胱经，络肾，膀胱经分布于头面、腰背及下肢外侧，别入于肛。根据现代解剖研究，膀胱经与人体中枢神经及周围神经存在着某种联系［8］，加之骶区的秩边穴下分布有丰富的神经网络，无疑可扩大其主治范围切o临床时发现针感可向下肢放射至足趾部，下肢、腰部的疾患，如坐骨神经痛［10］；针刺朝向肛周区域可用于直肠
痈等肛肠类疾病的［11］；若针尖转向会阴部，则可放射至前阴部，通过刺激盆丛神经多种原因导致的尿潴留［12-13］，尿失禁［14］以及前列腺相关的泌尿生殖系统疾病［15-16］；刺向小腹则擅治原发性痛经［17-18］和多囊卵巢综合征［19］等妇科疾患。
基于秩边穴的特殊解剖位置，本研究通过秩边透刺水道来刺激阴部神经、盆丛神经等，以激活下丘脑-垂体-睾丸轴的分泌作用。结果显示4组间FSH含量比较差异无统计学意义，与高学勇等㈤研究结果类似，分析其可能与该生物轴复杂的双向调节机制有关。在GnRH的影响下,FSH和LH 同样呈现出脉冲式分泌，加之FSH比LH的半衰期长，故而FSH的脉冲式分泌特征不如LH明显［21］；同时GnRH的脉冲频率也会影响到LH和FSH的分泌水平,GnRH脉冲频率较高时有利于促进LH 的分泌，而较低时则有利于促进FSH的分泌［22］；另外，睾丸支持细胞内的FSH受体在受到FSH刺激后会分泌生成一种抑制素，而这种物质具有选择性抑制垂体分泌FSH的功能［23］o
本研究结果提示两种针刺干预手段对少弱精症大鼠模型均有效果，均能降低大鼠血清中FSH、LH、T含量，提高大鼠精子密度与活力，且秩边透水道针法对精子密度与活力的疗效更明显。由于本实验的局限性，未能测得两种针刺干预方法对激素分泌时间与效应关系的影响，有待于进行进一步的实验探究。
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(编辑：张世霞)
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(编辑：梁葆朱)
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