(19)中华人民共和国国家知识产权局
| (12)发明专利说明书 | |
| (10)申请公布号 CN 103361414 A (43)申请公布日 2013.10.23 |
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(21)申请号 CN201310091118.5
(22)申请日 2013.03.20
(71)申请人 冯家望;王小玉;胡松楠
地址 519015 广东省珠海市九洲大道东1144号
(72)发明人 冯家望 王小玉 胡松楠 邝筱珊 游淑珠 唐食明
(74)专利代理机构 广东秉德律师事务所
代理人 杨焕军
(51)Int.CI
C12Q1/68
C12Q1/10
C12N15/11
(54)发明名称
肠致病性大肠杆菌的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法 | |
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(57)摘要
本发明涉及肠致病性大肠杆菌的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法，其中，LAMP检测引物组包括下列引物：外引物F3：GGTAATACTAACACCGCA；外引物B3：ATGAGGATATCTACATGCAGTTG；内引物FIP：TCAAGGTTGTTGCACTAACACATGTTTGGTTACTATCTGAGTAT；内引物BIP：GACTCTAGTTGTTGTTAATATCTCTAGCAGTACTATTAGCGC。 | |
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法律状态
权 利 要 求 说 明 书
1.肠致病性大肠杆菌的LAMP检测引物组，其特征在于，包括下列引物：
外引物F3：GGTAATACTAACACCGCA；
外引物B3：ATGAGGATATCTACATGCAGTTG；
内引物FIP：
TCAAGGTTGTTGCACTAACACATGTTTGGTTACTATCTGAGTAT；
内引物BIP：
GACTCTAGTTGTTGTTAATATCTCTAGCAGTACTATTAGCGC。
2.肠致病性大肠杆菌的LAMP检测引试剂盒，其特征在于，包括以下成分：
3.根据权利要求2所述的肠致病性大肠杆菌的LAMP检测引试剂盒，其特 征在于，还包括显剂。
4.根据权利要求3所述的肠致病性大肠杆菌的LAMP检测引试剂盒，其特 征在于，所述显剂为荧光染料SYBR Green I。
5.肠致病性大肠杆菌的LAMP检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(101)对待检样品提取待检模板DNA；
(102)进行环媒等温核酸扩增反应：
配置LAMP反应体系，每25μL体积的LAMP反应体系具体为：
；将LAMP反应体系置于LAMP浊度仪中进行63℃恒温反应90min，然后 在80℃下保温5min。
说 明 书
<p>【技术领域】
本发明属于生物检测领域，具体涉及肠致病性大肠杆菌(EPEC)的LAMP 检测引物组、试剂盒及检测方法。
【背景技术】
大肠杆菌(Escherichia coli，E.coli)为革兰氏阴性无芽孢短杆菌，大小0.5×1～ 3μm，多数具周身鞭毛，能运动，能发酵多种糖类产酸、产气，是人和大多数 温血动物肠道中的正常栖居菌，其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物 生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素B和K，以及有杀 菌作用的大肠杆菌素。普通大肠杆菌正常栖居条件下不致病，但若进入腹腔、 胆囊、膀胱等处可引起腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎等肠道外感染。大肠杆菌在肠 道中大量繁殖，几占粪便干重的1/3。在环境卫生不良的情况下，常随粪便散布 在周围环境中。若在水和食品中检出此菌，可认为是被粪便污染的指标，从而 可能有肠道病原菌的存在，因此，是饮用水和食物(或药物)的卫生学标 准。
大肠杆菌的抗原成分复杂，可分为菌体抗原(O)、鞭毛抗原(H)和表面 抗原(K)，后者有抗机体吞噬和抗补体的能力。根据菌体抗原的不同，可将大 肠杆菌分为150多型，其中有16个血清型致病性强，引起腹泻，统称致病性大 肠杆菌，也称为致泻性大肠杆菌，根据不同的生物学特性可将其分为5类：肠 道致病性大肠杆菌(EPEC)、肠道产毒素性大肠杆菌(ETEC)、肠道侵袭性大肠杆 菌(EIEC)、肠道出血性大肠杆菌(EHEC)、肠道黏附性大肠杆菌(EAEC)。其中， 大肠杆菌O157:H7血清型属肠出血性大肠杆菌，大肠杆菌O157:H7引起肠出血 性腹泻，约2％～7％的病人会发展成溶血性尿毒综合征，儿童与老人最容易出 现后一种情况。致病性大肠杆菌通过污染饮水、食品、娱乐水体引起疾病暴发 流行，病情严重者，可危急生命。自1982年由美国首次报道了大肠杆菌O157:H7 引起的出血性肠炎的爆发以来，包括我国等许多国家都有报道，且日见增加， 日本近年来因食物污染该菌导致的数起大暴发，格外引人注目，在美国和加拿 大通常分离的肠道致病菌中，目前它已排在第二或第三位，已经成为世界性问 题。世界卫生组织已将大肠杆菌O157:H7列为新的食源性疾病病原菌。
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