(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910151424.0
(22)申请日 2019.02.28
(71)申请人 中国科学院上海营养与健康研究所
地址 200031 上海市徐汇区岳阳路319号
(72)发明人 沈夏 梁宁宁 尹慧勇
(74)专利代理机构 上海专利商标事务所有限公
司 31100
代理人 韦东
(51)Int.Cl.
G01N 33/68(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明涉及痛风诊断生物标志物及其应用。
本发明的痛风诊断生物标志物包括苯丙酮酸、异
烟肼α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛。
可采用质谱方法检测得到本发明的痛风诊断标
志物，并由这些标志物确定对象是否患有痛风，
盒。权利要求书2页 说明书9页 附图4页CN 111624344 A 2020.09.04
C N 111624344
A
1.苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛作为痛风诊断生物标志物在制备用于检测它们以诊断痛风的试剂或试剂盒中的应用。
2.检测苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛所需测的试剂在制备痛风诊断试剂盒中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括：
(1)采用质谱检测所述苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛所需的试剂；优选地，所述试剂为质谱检测所用的流动相；更优选地，所述试剂包括NH4OH、NH4OAc 和乙腈；和
(2)任选的，从血清中分离出血清所含蛋白质的试剂，优选选自醇类试剂和盐析所用的试剂，如甲醇和醋酸铵。 4.一种诊断试剂盒，其含有检测苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛所需的试剂。
5.如权利要求4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂包括：
(1)采用质谱检测所述苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛所需的试剂；优选地，所述试剂为质谱检测所用的流动相；更优选地，所述试剂包括NH4OH、NH4OAc 和乙腈；和
(2)任选的从血清中分离出血清所含蛋白质的试剂，优选选自醇类试剂和盐析所用的试剂，如甲醇和醋酸铵。
6.如权利要求4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有独立包装的：
(a)NH4OH和NH4OAc的水溶液，其中，NH4OH和NH4OAc的浓度各自为15-50mM，优选为20-30mM；
(b)任选的乙腈；和
(c)任选的甲醇。
7.一种计算机可读存储介质，其上存储有计算机程序，该程序被处理器执行时计算得到下述判定阈值：
判定阈值＝-1.488+0.0011828×M1+0.0012194×M2-0.0009549×M3-0.0015879×M4其中，M1表示苯丙酮酸的离子响应丰度；M2表示α-酮戊二酸的离子响应丰度；M3表示16-表啡肽的离子响应丰度；M4表示4-羟基肉桂醛的离子响应丰度；和任选地，该程序被处理器执行时实现以下步骤：判定该判定阈值是否小于等于0.68，如果小于等于0.68，则得出对象患有痛风或患上痛风的风险相对较高的诊断结果；如果大于0.68，则得出对象不患有痛风或患上痛风的风险相对较低的诊断结果。
8.一种装置，所述装置包括输入设备和计算设备，其中，所述输入设备用于输入苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛的离子响应丰度；所述计算设备用于根据所输入的离子响应丰度用下述式子计算判定阈值：
判定阈值＝-1.488+0.0011828×M1+0.0012194×M2-0.0009549×M3-0.0015879×M4其中，M1表示苯丙
酮酸的离子响应丰度；M2表示α-酮戊二酸的离子响应丰度；M3表示16-表啡肽的离子响应丰度；M4表示4-羟基肉桂醛的离子响应丰度。
9.一种计算机设备，包括存储器、处理器及存储于该存储器上并可在处理器上运行的程序，其中，所述处理器执行所述程序时执行以下步骤：
(1)根据下式计算得到判定阈值：
判定阈值＝-1.488+0.0011828×M1+0.0012194×M2-0.0009549×M3-0.0015879×M4
其中，M1表示苯丙酮酸的离子响应丰度；M2表示α-酮戊二酸的离子响应丰度；M3表示16-表啡肽的离子响应丰度；M4表示4-羟基肉桂醛的离子响应丰度；
(2)根据计算得到的判定阈值获得诊断结果，其中，若判定该判定阈值小于等于0.68，则得出对象患有痛风或患上痛风的风险相对较高的诊断结果；若大于0.68，则得出对象不患有痛风或患上痛风的风险相对较低的诊断结果。
10.同时检测对象血清中苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛的方法，其特征在于，所述方法包括采用质谱方法同时检测对象血清中苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛，获得苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛各自的离子响应丰度。
痛风诊断生物标志物及其应用
技术领域
[0001]本发明涉及痛风诊断生物标志物及其应用。
背景技术
[0002]痛风患者经常会在夜晚出现突然性的关节疼，发病急，关节部位出现严重的疼痛、水肿、红肿和炎症。最常发病的关节是第一跖骨，但发病的关节不限于此，还常见于手部的关节、膝盖、肘部等。发病的关节最终会红肿、发炎，水肿后组织变软，活动受限。 [0003]目前，痛风的检查项目包括：血尿常规和血沉，血尿酸测定，尿检和关节腔穿刺检查。急性发作期绝大多数病人血清尿酸含量升高。一般认为采用尿酸酶法测定，男性420umol/L(7mg/DL)，女性360umol/L(6mg/DL)，具有诊断价值。急性痛风性关节炎发作时，肿胀关节腔内可有积液，以注射针抽取滑液检查，具有极其重要诊断意义。即使在无症状期，亦可在许多关节到尿酸钠结晶。约95％以上急性痛风性关节炎滑液中可发现尿酸盐结晶。关节腔穿刺检查可采用偏振光显微镜检查、普通显微镜检查、紫外分光光度计测定、紫尿酸胺试验和尿酸盐溶解试验等进行检查。
发明内容
[0004]本发明提供新的痛风诊断生物标志物。本发明的痛风诊断生物标志物包括苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽(16-Epivellosimine)和4-羟基肉桂醛。
[0005]具体而言，本发明提供一种痛风诊断方法，所述方法包括检测对象血清中苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛的步骤。
[0006]在一个或多个实施方案中，采用质谱检测对象血清中苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛的浓度。
[0007]在一个或多个实施方案中，血清体积为50微升。
[0008]在一个或多个实施方案中，检测得到苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛的血清浓度后，将所述浓度代入下式：
[0009]判定阈值＝-1.488+0.0011828×M1+0.0012194×M2-0.0009549×M3-0.0015879×M4
[0010]其中，M1表示苯丙酮酸的离子响应丰度；M2表示α-酮戊二酸的离子响应丰度；M3表示16-表啡肽的离子响应丰度；M4表示4-羟基肉桂醛的离子响应丰度；
[0011]其中，若判定阈值小于等于0.68，则诊断患有痛风或患上痛风的风险相对较高；若判定阈值大于0.68，则诊断不患有痛风或换上痛风的风险相对较低。
[0012]本发明还提供苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛作为生物标志物在痛风诊断中的应用。
[0013]本发明还提供用于苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛的检测的试剂在制备痛风诊断试剂盒中的应用。
[0014]在一个或多个实施方案中，所述试剂是采用质谱检测所述苯丙酮酸、α-酮
戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛所需的试剂。
[0015]在一个或多个实施方案中，所述试剂包括NH4OH、NH4OAc和乙腈(ACN)。
[0016]在一个或多个实施方案中，所述试剂还包括从血清中分离出血清所含蛋白质的试剂。
[0017]在一个或多个实施方案中，所述从血清中分离出血清所含蛋白质的试剂为甲醇。[0018]本发明还提供一种诊断试剂盒，其含有NH4OH、NH4OAc和乙腈(ACN)。
[0019]在一个或多个实施方案中，所述NH4OH、NH4OAc和乙腈(ACN)各自独立包装。[0020]在一个或多个实施方案中，所述诊断试剂盒含有NH4OH和NH4OAc的水溶液，以及纯ACN。
[0021]在一个或多个实施方案中，所述试剂还包括从血清中分离出血清所含蛋白质的试剂。
[0022]在一个或多个实施方案中，所述从血清中分离出血清所含蛋白质的试剂为甲醇。[0023]在一个或多个实施方案中，所述含有NH4OH和NH4OAc的水溶液中，NH4OH和NH4OAc的浓度各自为15-50mM，优选为20-30mM。
[0024]本发明还提供一种计算机可读存储介质，其上存储有计算机程序，该程序被处理器执行时计算得到下述判定阈值：
[0025]判定阈值＝-1.488+0.0011828×M1+0.0012194×M2-0.0009549×M3-0.0015879×M4
[0026]其中，M1表示苯丙酮酸的离子响应丰度；M2表示α-酮戊二酸的离子响应丰度；M3表示16-表啡肽的离子响应丰度；M4表示4-羟基肉桂醛的离子响应丰度。
[0027]在一个或多个实施方案中，该程序被处理器执行时还实现以下步骤：判定该判定阈值是否小于等于0.68，如果小于等于0.68，则得出对象患有痛风或患上痛风的风险相对较高的诊断结果；如果大于0.68，则得出对象不患有痛风或患上痛风的风险相对较低的诊断结果。
[0028]本发明还提供一种装置，所述装置包括输入装置和计算装置，其中，所述输入装置用于输入苯丙酮酸、α-酮戊二酸、16-表啡肽和4-羟基肉桂醛的离子响应丰度；所述计算装置用于根据所输入的离子响应丰度用下述式子计算判定阈值，并根据计算得到的判定阈值给出对象是否患有痛风的结论：
[0029]判定阈值＝-1.488+0.0011828×M1+0.0012194×M2-0.0009549×M3-0.0015879×M4
[0030]其中，M1表示苯丙酮酸的离子响应丰度；M2表示α-酮戊二酸的离子响应丰度；M3表示16-表啡肽的离子响应丰度；M4表示4-羟基肉桂醛的离子响应丰度；
[0031]其中，若判定该判定阈值小于等于0.68，则得出对象患有痛风或患上痛风的风险相对较高的诊断结果；若大于0.68，则得出对象不患有痛风或患上痛风的风险相对较低的诊断结果。
[0032]本发明还提供一种计算机设备，包括存储器、处理器及存储于该存储器上并可在处理器上运行的程序，其中，所述处理器执行所述程序时执行以下步骤：
[0033](1)根据下式计算得到判定阈值：
[0034]判定阈值＝-1.488+0.0011828×M1+0.0012194×M2-0.0009549×M3-0.0015879×
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