TECHNOLOGY AND INFORMATION
科技论坛
科学与信息化2019年7月上 177
王奇
国家知识产权局专利局专利审查协作广东中心 广东 广州 510555
摘 要 本文分析了引物序列撰写的特点和各个数据库的标引差异，在此基础上，结合实际案例阐述了如何基于专利数据库和非专利数据库检索引物序列的新颖性文件，为引物序列的新颖性文件检索提供了全面高效的检索思路。关键词 引物；序列；新颖性；检索全面；标引
前言
引物是一段短的单链RNA 或DNA 片段，可结合在核酸链上与之互补的区域，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸聚合酶可由其3’端开始合成新的核酸链。人工合成的引物被广泛应用于聚合酶链式反应
、测序和探针合成等，引物是体外诊断领域专利申请主要保护的对象。2017年全球体外诊断（IVD ，In Vitro Diagnosis ）市场规模达到735亿美元，体外诊断中又以基因检测的发展最为迅速，包括无创产检和肿瘤检测等，特别是随着精准医疗的发展和应用，基于引物的体外诊断研发投入越来越大，相关专利申请量也不断增加。
对于涉及引物序列的专利申请，不管是在专利实质审查过程中，还是在FTO 检索和无效检索过程中，都需要涉及对引物序列的新颖性检索，目前引物序列的检索主要包括专利库和非专利库的检索，由于引物序列撰写的特殊性，不同数据库在标引和收录时存在较大的差异和不足，给检索带来了一定的困难，容易造成漏检。下面将结合实际案例介绍如何对引物序列进行有效的新颖性文件检索，以期为引物序列的新颖性检索提供更全面更高效的检索思路。
权利要求1：一种利用单拷贝核基因检测食品和饲料中绵羊源性成分的实时荧光PCR 检测方法，其特征在于，包括以下步骤： 第一步，以待测样品的DNA 为模板，进行荧光定量PCR 扩增，获得PCR 扩增产物； 第二步，检测扩增产物的荧光信号； 第三步，以检测结果的Ct 值判定样品中是否含有绵羊源性成分以及定量检测样品中的绵羊源性成分的含量； 其中，用于PCR 扩增的反应体系中的特异性引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，特异性探针的序列如SEQ ID NO.3所示。
本文仅以S E Q I D N O :1所示序列为例展示新颖性文件的检索过程，S E Q I D N O :1的序列具体为5’-CCAACATGCCTTTAAACCCTCAA-3’1 专利库检索
1.1 全文专利数据库
在CNTXT/WOTXT/USTXT/EPTXT 等全文数据库中以CCAACA TGCCTTTAAACCCTCAA 以及其三字母、五字母或十字母一空格的形式进行检索，检索结果获得D1（CN106995852A ，本申请）和D2（CN109182471，非现有技术）。
1.2 中国专利生物序列检索系统中国专利生物序列检索系统的序列来源于从SIPO 受理的专利申请文件中提取出来的生物序列。
以CCAACATGCCTTTAAACCCTCAA 进行检索，除获得D1（CN106995852A ）和D2（CN109182471）外，还检索获得D3（CN105985948）[1]。2 非专利库检索
2.1 Genbank和EMBL
Genbank 和EMBL 分别是由NCBI 和EBI 维护的核酸序列数据
库，Genbank 常用的序列检索工具是BLAST ，EMBL 中常见的序列检索工具是WU-BLAST 和FASTA 等。使用Genbank 和EMBL 数据库中的相应检索工具进行检索，未获得新颖性对比文件。
2.2 STN S T N 的核酸序列数据库主要来自C A S R E G I S T RY 、DGENE 、USGENE 和PCTGEN ，
其中，CAS REGISTRY 数据库内容涵盖数千种期刊、63个专利权威机构以及声誉良好的网络资源、论文、书籍和会议记录、化学品供应商等所有公开的化学和相关学科资料。
通过STN 的SQEN 检索项命中4个结果，包括2篇专利文献和2篇非专利文献，其中，2篇专利文献即为D1和D2。两篇非专利文献分别是D4（Interlaboratory validation of a real-time PCR detection method for bovine and ovine-derived material ，2017）和D5（Lateral flow test for meat authentication with visual detection ，2019）。
2.3 Google学术Google 学术的文献来源包括免费的学术资源、免费获取的期刊网站、付费电子资源提供商以及美国的专利文献等。
（1）直接以CCAACATGCCTTTAAACCCTCAA 进行检索，获得7篇非专利文献，其中2篇为前述的D4和D5。
D4：Interlaboratory validation of a real-time PCR detection method for bovine and ovine-derived material ，2017。
D5：Lateral flow test for meat authentication with visual detection ，2019。
D6：Droplet digital PCR methods for the detection and quantification of goat and sheep derivatives in
commercial meat products ，2018。
D7：A multiplex real-time PCR method for the quantitative determination of equine(horse) fractions in meat products ，2017。
D8：A sensitive DNA-based fluorometric method for milk authenticity of dairy products based on spectrally distinct microspheres ，2017。
D9：DNA-based analytical methods for milk authentication ，2018。
D10：Rapid authentication of mutton products by recombinase polymerase amplification coupled with lateral flow dipsticks ，2019。
（2）以三字母一空格的形式“CCA ACA TGC CTT TAA ACC CTC AA ”进行检索，获得3篇非专利文献。以五字母或十字母一空格的形式未检索到新颖性文件[2]。
D11：Multiplex real-time PCR for the detection and quantification of DNA from beef, pork, horse and sheep ，2011。
D12：Duplex digital PCR for the determination of meat proportions of sausages containing meat from chicken ，turkey ，horse ，cow ，pig and sheep ，2019。
D13：Interlaboratory validation of two multiplex quantitative
TECHNOLOGY AND INFORMATION
科技论坛
178 科学与信息化2019年7月上
real-time PCR methods to determine species DNA of cow, sheep and goat as a measure of milk proportions in cheese ，2013。
2.4 CNKI和万方CNKI 的数据资源主要包括中国期刊全文数据库、中国学术期刊网络出版总库、中国优秀硕博学位论文全文数据库、中国重要会议论文全文数据库、中国重要报纸全文数据库、中国专利全文数据库等。万方数据资源主要包括期刊论文、学位论文、会议论文和专利资源等。
直接以CCAACATGCCTTTAAACCCTCAA 或以其三字母、五字母或十字母一空格的形式检索全文，其中，直接以CCAACATGCCTTTAAACCCTCAA 检索获得4篇非专利文献和3篇专利文献（D1、D2和D3），其他检索方式未获得可用文件，4篇非专利文献如下。
D14：实时定量PCR 法对羊肉中鸡源性成分的量化检测，2014。
D15：微滴式数字PCR 与实时荧光PCR 检测羊肉制品中羊源和猪源性成分方法的比较，2015。
D16：肉制品中五种动物源性成分的数字PCR 检测方法，2018。
D17：微滴式数字PCR 技术用于牛羊肉掺假定量检测方法的研究，2018[3]。
3 结束语
（1）全文专利数据库和中国专利生物序列检索系统的差异：前者无法检索到D3，后者可以检索到D3，原因在于，D3说明书正文部分的引物序列是以图片形式显示，同时说明书的序列表部分未进行代码化，同样是以图片形式显示，导致以具体引物序列在全文专利库中检索时无法检索到D3。中国专利生物序列检索系统的数据是基于从SIPO 受理的专利申请文件中提取出来的生物序列，也即该数据库对序列可能进行了相应的加工，故可以命中含有上述序列的D3，中国专利生物序列检索系统避免了因序列位于图片中无法被检索到而导致的中国专利漏检。
（2）STN 对引物序列的检索并非万能：STN 在结构检索方面具有强大的优势，但是通过本案可以看出，对于引物序列的检索，其存在漏检的可能。CAS REGISTRY 在以相关专利数据库作为数据源时可能采取的是直接使用，并未对专利数据进行加工，导致其遗漏了序列部分未代码化的专利文献，推测其漏检的原因与全文专利数据库是类似的。另外，从CNKI 和Google 学术检索的结果可知，STN 只命中了
14篇非专利文献中的2篇，可见，STN 对含有引物序列的非专利文献的加工处理仍有不足之处，特别是对含有引物序列的中文文献的加工处理。
（3）Google 学术检索引物时的引物格式：Google 学术检索时，以全序列（无空格）和三字母一空格的形式作为检索式获得了完全不同的检索结果，这是由于本领域在撰写引物序列时，一般存在无空格、三字母、五字母或十字母一空格共四种方式，因此，在Google 学术以及全文专利库中检索时，应该对上述四种引物格式都进行检索，避免漏检。
（4）CNKI 全文检索对引物序列不可缺少：CNKI 的专利检索功能可以检索获得D1-D3，说明CNKI 在检索引物序列时具有与中国专利生物序列检索系统类似的功能，同时，CNKI 可以检索到部分Google 学术无法检索到的中文文献，可见，不管对于中文专利文献还是中文非专利文献，CNKI 都是检索引物时需要检索的数据库之一，可以有效减少新颖性文件的漏检[4]。
本文结合实际案例介绍了使用专利库（全文专利库和中国专利生物序列检索系统）和非专利库（Genbank 、EMBL 、STN 、Google 学术和CNKI ）检索引物序列的新颖性文件时的差异和思路，主要包括以下几点：①全文专利库对引物序列的标引存在不完整的情形，在检索全文专利库的同时，也应检索中国专利生物序列检索系统。②由于收录的局限性，STN 检索引物序列并不是万能的，还需要加强对其他非专利数据库如Google 学术和CNKI 的检索。③Google 学术检索时需要注意全面检索四种引物
序列格式，避免因为引物序列的撰写差异而导致的漏检。实际上，经过上述较为全面的检索后，笔者还是发现了个别未检索到的新颖性文件，同时通过以上案例的检索过程可以发现，检索引物序列的新颖性文件时，为了避免漏检，需要同时检索多种专利数据库和非专利数据库，并适时调整引物序列的检索格式，从而最终实现全面高效的检索。参考文献
[1] 佚名.生物技术领域文献使用检索策略[M].北京：知识产权出版社,2012:211.
[2] 佚名.化学领域文献使用检索策略[M].北京：知识产权出版社, 2012:17.
[3] 佚名.化学领域计算机检索高级培训教程[M].北京：知识产权出版社,2011:55.
[4] 李进进，刘迎鸣，王在竹，等.广东省体外诊断试剂(生物类)专利申请分析[J].中国科技信息,2018,(1):31-32.
絮凝剂，或者可以利用细菌细胞生命活动产生的代谢物作为絮凝剂。采用微生物絮凝技术具有适用性强、污水净化效果好、无二次污染、成本较低等优点，可以广泛应用与高浓度的有机污水净化处理中，有效处理污水中的悬浮物质。
微生物絮凝技术可以有效地除去废水中的素，对于传统的可溶性素脱技术相比，采用微生物絮凝技术具有良好的污水絮凝效果，且可以解决高分子絮凝剂无法脱的问题，从而一定程度上提高了城市
污水的脱效果，且该处理技术较为安全可靠[3]。
4 结束语
综上所述，在城市发展过程中，需要加强对废水治理的力度，禁止工业废水的直接排放，并加强对废水治理技术的研
究，避免河道黑臭水体污染，从而提高河道水资源的洁净度，保护生态环境。参考文献
[1] 周天，陈舸，徐煜娇，等.城市河道黑臭水体污染治理技术初探[J].广州化工,2017,45(22):117-119.
[2] 樊亮亮.城市河道黑臭水体污染治理技术探析[J].环境与发展,2018,30(06):62-63.
[3] 郭杰.城市黑臭水体治理技术探究[J].智能城市,2017,3(05):59-61.
作者简介
李梅（1986－），女，现就职单位： 吴忠市科信环境检测有限公司，研究方向：环境检测、环境保护、环境工程类工作 。
（上接第176页）
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议