以甜瓜枯萎病菌为指示菌,将分离到的放线菌、细菌以及真菌菌株点接至已 经在PDA培养基培养3 d的病原菌平板四周,点接处距离病原菌中心2 cm,同 12
甜瓜枯萎病病原拮抗菌的蹄选及利用响应面法优化发酵条件
一平板上只点接一种分离菌;继续培养4 d,观察是否出现抑菌带,将出现抑菌
带的分离菌作为初蹄菌。
2.1.2.4拮抗菌的复蹄
平板对峙实验(同步措抗实验)以甜瓜枯萎病菌为指示菌,将初蹄得到产
生抑菌带的菌株,用打孔器打取5 mm (<2 )菌饼接种于距离病原菌中心2 cm的
四周,同一平板上只接一种初蹄菌;培养4d后测抑菌圈半径[79]、拮抗菌半径,
计算拮抗指数[8^。
抑菌圈半径=拮抗菌菌饼中心至甜瓜枯萎病病菌菌丝边缘的距离
措抗指数=(抑菌圈半径-拮抗菌半径)/措抗菌半径
继代培养实验将蹄选的拮抗效果较好的菌种进行继代培养,逐代进行平板
对峙实验,观测其措抗指数的变化,从而确定菌种的遗传稳定性。
发芽率实验将蹄选的措抗效果较好的菌株转接至PDB培养基中摇床振荡 培养24h,即得措抗菌菌悬液;挑取饱满的南海蜜甜瓜种子,用10%H202对种
子进行表面消毒5 min后用无菌水清洗3-4次,再将种子浸泡于拮抗菌菌悬液中
2 h,同时以未加入措抗菌的PDB做对照,每处理30粒甜瓜种子,三次重复;
浸泡完毕后,将甜瓜种子置于灭菌培养皿中的湿润无菌滤纸上,种子上加盖一层
湿纱布,30 °C催芽36h,统计种子的发芽率。
拮抗菌间平板对時实验同“平板对峙实验(同步拮抗实验)”。
苦瓜活性物质提取分离与抑菌作用研究
1 . 2 . 2 中草药提取液对病原真菌抑制作用的测定( 生
长速率法
[8- 9]
) 参照吴新安
[10]
等人的方法, 分别制成
含药10.0 mg/mL 的带药培养基, 用直径5 mm 的打孔
器在培养好的菌落外缘切下带菌培养基柱, 即菌饼,
将菌饼带菌丝的一面接种到培养皿中央。以纯PDA
培养基平板作空白对照(CK), 含化学药剂扑海因0 . 5
mg/ mL 的培养基平板作负对照(CK- ), 将各处理置于
28 ℃恒温箱中培养。每个处理设3 次重复。定期观
察菌落形态并用十字交叉法测量菌落直径, 直到CK
菌落即将长满平皿为止, 计算抑制生长率。抑制生长
率( % ) = ( CK 净生长量- 处理净生长量) / CK 净生长
量×100
[11]
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