(19)中华人民共和国国家知识产权局
| (12)发明专利说明书 | |
| (10)申请公布号 CN 104031852 A (43)申请公布日 2014.09.10 |
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(21)申请号 CN201410325006.6
(22)申请日 2014.07.09
(71)申请人 新疆农业科学院微生物应用研究所
地址 830011 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市沙依巴克区南昌路403号农科院微生物所
(72)发明人 侯敏 詹发强 崔卫东 包慧芳 王宁 杨蓉 张慧涛 侯新强 龙宣杞
(74)专利代理机构
代理人
(51)Int.CI
C12N1/16
A23K1/16
A23K1/14
C12R1/72
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了产阮假丝酵母（Candidautilis）QC-1 CGMCC No.9165及其在降解棉杆中游离棉酚中的应用。通过从新疆五家渠青贮饲料中取样，分离、筛选、生理生化鉴定，确定该菌种本发明提供的产阮假丝酵母（Candidautilis）QC-1 CGMCC No.9165是一种酵母菌，具有降解棉杆中游离棉酚的良好技术效果，通过将筛选出的菌种接种于固体棉杆，在实际应用中具有良好的降解游离棉酚的效应，在饲料添加剂产业方面具有广泛的应用前景。 | |
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法律状态
权 利 要 求 说 明 书
1.一种产阮假丝酵母（Candida utilis）QC-1 ，其特征在于，所述的产阮假丝酵母（Candida utilis）QC-1保藏编号为CGMCC No.9165。
2.如权利要求1所述的产阮假丝酵母（Candida utilis）QC-1 CGMCC No.9165在降解棉杆中游离棉酚中的应用。
说 明 书
<p>技术领域
本发明涉及游离棉酚降解生物技术领域，具体的说，本发明涉及一种产阮假丝酵母菌及其作为棉杆中游离棉酚降解菌的应用的技术领域。
背景技术
棉花是新疆的支柱性产业之一，新疆棉花种植面积约占全国的1/3，棉秆资源相当丰富。但其中含有大量的游离棉酚，限制了棉杆在饲料中的广泛应用。含有一定量的游离棉酚(Freegossypol)，可以导致动物生长受阻、生产力下降、贫血、呼吸困难、繁殖力下降、甚至不育，严重时可致死亡。因此，降低游离棉酚含量对棉杆饲料化具有重要的意义。
棉株体内棉酚的存在形式有两种，即结合棉酚(Bound gossypol)和游离棉酚(Free gossypol)，通常认为在棉花组织中呈游离状态存在的棉酚称为游离棉酚，而与其他物质(蛋白质、氨基酸和磷脂)结合的棉酚称为结合棉酚。一般认为，只有游离棉酚对人畜具有毒性，因而人们也重点关注有毒的游离棉酚。棉杆中，含有一定量的游离棉酚(Freegossypol)，可以导致动物生长受阻、生产力下降、贫血、呼吸困难、繁殖力下降、甚至不育，严重时可致死亡。
游离棉酚的去除有物理法、化学法、复合或多次溶剂浸提和微生物发酵法。最初人们发现牛、羊等反刍动物对棉籽饼粕中的棉酚有较强的耐受能力，由于反刍动物瘤胃中的微生物和酶的作用，棉酚被破坏并随纤维素而水解转入真胃中，相对解决了棉酚的毒性问题；此外人们还发现在霉变的棉籽饼中棉酚含量也非常低，说明其中所生长的某类霉菌对游离棉酚可能存在降解作用；蘑菇培养基中含有大量的棉籽壳，棉籽壳棉酚含量较高，而蘑菇却可以在其上生长良好，推测某些真菌有可能降解了其中的棉酚，由此推断，在体外适当条件下，利用合适的微生物进行棉籽粕发酵, 有可能实现棉籽粕中游离棉酚的降解或破坏。国内学者在微生物发酵降解棉酚方面进行了较多研究，而国外的相关研究则较少，这主要与国内蛋白资源匮乏、棉粕产量及其在饲料中的添加用量大有关。其中，所筛选的菌种主要是以黑曲霉为主的霉菌和以热带假丝酵母为主的酵母菌两类。棉秆经生物发酵处理后可作为粗饲料，不但扩大了饲草料的来源有效地缓解了饲草料不足的问题，还为畜牧业规模化、产业化发展带来了突破性发展。 发明内容
目前，国内外鲜有针对产阮假丝酵母 （Candida utilis）作为棉杆中游离棉酚降解菌的研究现
状，本发明旨在一种产阮假丝酵母 （Candida utilis）及其作为棉杆中游离棉酚降解菌的应用，通过试验验证，采用本发明提供的产阮假丝酵母 （Candida utilis）具有良好的降解棉杆中游离棉酚的技术效果。
本发明从新疆五家渠青贮饲料中取样，进行筛选、驯化选育，分离出一株长势良好的微生物菌株，编号为QC-1,通过对所获菌株进行形态特征观察及总DNA的提取、18S rDNA序列测定及系统发育分析，初步确定了其分类地位；进行棉酚耐受实验，该菌在以1000mg/mL醋酸棉酚为碳源的培养基中长势良好，具有较高的耐受性；在棉杆固体发酵中，该菌QC-1对棉杆中降解游离棉酚有良好技术效果。
具体的，本发明提供的一种产阮假丝酵母 （Candida utilis），命名为QC-1。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。保藏日期是2014年5月14日，保藏号是CGMCC No.9165。经微生物学鉴定为产阮假丝酵母（Candida utilis）。在YPD平板培养基上，30 ℃，培养24 h，菌落乳白，平滑，有或无光泽，边缘整齐或菌丝状。在显微镜下，细胞呈圆形、椭圆形或腊肠形，大小为
（3.5-4.5）μm×（7-13）μm。在加盖片的玉米粉琼脂培养基上，形成原始假菌丝或不发达的假菌丝，或无假菌丝；能发酵葡萄糖、蔗糖、棉子糖，不发酵麦芽糖、半乳糖、乳糖和蜜二糖。不分解脂肪，能同化硝酸盐。依照第九版《伯杰氏系统细菌学鉴定手册》（《Bergey,s Manual of Systematic Bacterio-logy》）和《常用细菌系统鉴定手册》对QC-1菌株进行形态学测定，生理生化检测确定QC-1菌株为产阮假丝酵母（Candida utilis）。通过BLAST同源比对，用CLUSTAL X 进行多序列比对，并采用 Saitou和Nei 的邻接法（Neighbor Joining）用MEGA 4软件进行系统进化树的构建和同源性比较。将菌株QC-1确定为产阮假丝酵母（Candida utilis）。
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