(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610546786.6
(22)申请日 2016.07.12
(83)生物保藏信息
CGMCC No. 11828 2015.12.04
(71)申请人 江南大学
地址 214122 江苏省无锡市蠡湖大道1800
号
(72)发明人 陈卫 陈海琴 杨波 王俊通
赵建新 张灏 陈永泉
(74)专利代理机构 北京君智知识产权代理事务
所(普通合伙) 11305
代理人 邢大文
(51)Int.Cl.
A61K 35/745(2015.01)
A61P 1/04(2006.01)
A61P 1/00(2006.01)A61P 1/12(2006.01)A23L 33/135(2016.01) (54)发明名称
(57)摘要
本发明涉及一种短双歧杆菌
(Bifidobacterium breve)C11及其用途。本发明
短双歧杆菌C11(CCFM683)能够有效改善小鼠腹
病活动指数(DAI)的升高，改善小鼠结肠长度的
变化，显著减低髓过氧化物酶(MPO)活性，可以制
产益于肠道健康的食品。权利要求书1页 说明书10页序列表6页 附图6页CN 106038611 A 2016.10.26
C N 106038611
A
1.短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)C11在制备用于或预防炎症性肠病的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的炎症性肠病是溃疡性结肠炎或克罗思病。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述药物还包括在药学上可接受的载体和/或辅料。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于所述的药物含有短双歧杆菌C11菌剂，所述菌剂是将含有所述短双歧杆菌C11的菌液通过冷冻干燥制备所得到的粉剂，所述粉剂含有1010CFU/g以上短双歧杆菌C11。
5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于在药学上可接受的载体是一种或多种选自在药学上通常使用的填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或矫味剂的载体。
6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的药物的剂型是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
7.短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)C11在食品添加剂中的用途。
8.根据权利要求6所述的用途，所述食品添加剂是发酵剂。
权 利 要 求 书1/1页CN 106038611 A
短双歧杆菌C11及其用途
【技术领域】
[0001]本发明属于微生物技术领域。更具体地，本发明涉及短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)C11的用途。
【背景技术】
[0002]炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)是一组慢性、复发性肠道炎症疾病，分为溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)和克罗恩病(Crohn's Disease,CD)，发病机理尚不明确。目前对IBD发病机理的研究普遍认为IBD可能与易感基因、粘膜免疫、肠道微生物和环境四个因素有关，且粘膜免疫在IBD发病过程中具有重要地位。近年来，随着人们生活水平的改变以及饮食结构的变化，该病在我国的患病率正逐年上升。
[0003]IBD严重影响人们生活质量和身体健康，耗费卫生资源。目前IBD的药物包括抗生素、氨基水杨酸、糖皮质激素、免疫抑制剂(6-MP，AZA，MTX)和生物制剂(infliximab)等，但副作用大，难以实现长期，如生物制剂infliximab通常选用TNF-α单克隆抗体，尽管能有效达到IBD目标，但使用infliximab常见的不良反应有感染、充血性心力衰竭、自身免疫反应、神经系统病变、肝损害、恶性肿瘤等，所以需寻新的IBD预防和新方法。
[0004]肠道微生物与人体健康息息相关，且被形象的称为“微生物器官”。利用肠道益生菌来预防和肠道疾病越来越受到关注。例如中国发明专利申请CN 102210717 A公开了含有与丹宁组合的一种或多种产生丹宁酶的乳杆菌菌株的组合物，所述菌株具有粘附到肠粘膜上的能力，该组合物可以用于IBD。
[0005]肠道益生菌可通过调节粘膜免疫系统，增强肠上皮细胞间的紧密连接，降低肠道通透性，抑制肠上皮细胞凋亡，改善肠道物理屏障功能，调节肠道菌平衡等作用来减轻肠道炎症。乳酸菌是存在于人体肠道内的益生菌，近年来，乳酸菌对结肠炎的研究报道有增无减，且产生着积极的影响。
[0006]中国发明专利申请CN 102711778A公开了一株动物双歧杆菌乳亚种DN-173010，并通过TRUE小鼠实验和组织学研究验证了其发酵乳能减轻溃疡性结肠炎。然而，该申请仅通过组织学、通过小鼠结肠炎改善结果一个指标进行表征，这种检验方式及指标受人为认知的影响较大，存在主观因素。此外，该
申请在实施时给小鼠灌胃含有培养基组分的乳双歧杆菌组合物，因此，培养基的复杂组分对其结果造成的影响也必须被考虑。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是克服现有技术缺陷，获得一株具备改善结肠炎特别是的短双歧杆菌C11，其具备降低结肠炎后小鼠结肠病理评分、降低结肠炎后小鼠结肠粘液层破坏、上调抑炎性因子并下调促炎性因子转录并对免疫有调节作用。
[0008]为了实现以上目的，本发明提供一株短双歧杆菌(Bifidobacteriumbreve)C11，该菌株已于2015年12月04日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏
号为CGMCC No.11828。
[0009]这株短双歧杆菌C11也被命名为CCFM683，留存于江南大学食品生物技术菌种保藏中心。
[0010]本发明的菌株经分离、筛选后，采用了包括细菌基因组DNA提取、16S rDNA特异引物PCR扩增、扩增产物纯化、DNA测序、序列比对等步骤进行种属鉴定，鉴定为短双歧杆菌，并命名为短双歧杆菌C11(或CCFM683)。
[0011]短双歧杆菌C11具有下述生物学特性：
[0012]菌体特征：呈乳白。
[0013]菌落特征：在mMRS固体平板上菌落突起，光滑、圆形、乳白、半透明、直径为1～2mm
[0014]生长特性：在37℃恒温厌氧的条件下，在mMRS培养基中培养约24h达到对数末期。[0015]短双歧杆菌是双歧杆菌属中的一种。双歧杆菌属共包含35个种，包括青春双歧杆菌、动物双歧杆菌动物亚种、动物双歧杆菌乳酸亚种(即乳双歧杆菌)、两歧双歧杆菌、熊峰双歧杆菌、布姆双歧杆菌、短双歧杆菌、链双歧杆菌、豚双歧杆菌、棒状双歧杆菌、家兔双歧杆菌、齿双歧杆菌、没食子双歧杆菌、鸡双歧杆菌、长双歧杆菌长亚种、长双歧杆菌婴儿亚种、大双歧杆菌、最小双歧杆菌、假小链双歧杆菌、假长双歧杆菌假长亚种、假长双歧杆菌球旋虫亚种、小鸡双歧杆菌、细长双歧杆菌、嗜热双歧杆菌等。
[0016]由于双歧杆菌属种类繁多，同属不同种的双歧杆菌在形态、生理、代谢及生理功能等多方面存在显著差异，目前为止，尚未有研究发现短双歧杆菌能够改善炎症性肠病特别是溃疡性结肠炎或克罗思病，仅少数同属不同种的菌株具备相似用途。目前也尚未有研究确定导致差异的原因或机理。
[0017]本发明还提供短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)C11在制备用于或预防炎症性肠病的药物中的用途。
[0018]特别地，所述的炎症性肠病是溃疡性结肠炎或克罗思病。
[0019]溃疡性结肠炎(UC)是一种病因尚不十分清楚的结肠和直肠慢性非特异性炎症性疾病，病变局限于大肠黏膜及黏膜下层，病变多位于乙状结肠和直肠，也可延伸至降结肠，甚至整个结肠。病程漫长，常反复发作。克罗恩病(CD)是一种原因不明的肠道炎症性疾病，在胃肠道的任何部位均可发生。克罗恩病临床表现为腹痛、腹泻、肠梗阻，伴有发热、营养障碍等肠外表现。克罗恩病尚无根本的治愈方法，还会出现并发症，需手术，而术后复发率很高。
[0020]优选地，所述药物还包括在药学上可接受的载体和/或辅料。
[0021]本发明的药物含有短双歧杆菌C11菌剂，所述菌剂是将含有所述短双歧杆菌C11的菌液通过冷冻干燥制备所得到的粉剂，所述粉剂含有1010CFU/g以上短双歧杆菌C11。[0022]在本发明中，在药学上可接受的载体是一种或多种选自在药学上通常使用的填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或矫味剂的载体。
[0023]根据本发明，所述的填充剂应该理解是一种用来增加药物与载体重量和体积，以利于将它们压制成片剂的稀释剂；或者应该理解是用以吸收药物与载体中多余液体成分的辅料吸收剂。凡是具有这种性能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明，也都在本发明保护范围之内。具体地，本发明使用的填充剂选自淀粉、蔗糖、乳糖、硫酸钙或
微晶纤维素，优选地选自淀粉、蔗糖或微晶纤维素，更优选地选自淀粉或微晶纤维素。[0024]根据本发
明，所述的润湿剂应该理解是一种在药物本身无粘性时能够使其药物润湿并诱发其具有粘性，故能够制成颗粒的液体。凡是具有这种性能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明，也都在本发明保护范围之内。具体地，本发明使用的润湿剂选自水、乙醇、淀粉或糖浆，优选地选自水、乙醇或淀粉，更优选地选自水或淀粉。[0025]根据本发明，所述的崩解剂应该理解是一种能够促进片剂在胃肠液中快速崩解成细小粒子的辅料。凡是具有所述这种性能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明，也都在本发明保护范围之内。具体地，本发明使用的崩解剂选自羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠，优选地选自羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂或碳酸氢钠，更优选地选自羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素或碳酸氢钠。
[0026]根据本发明，所述的粘合剂应该理解是当药物本身无粘性或粘性不足时需要加入一种粘性物质以便将其药物制成颗粒剂，这种粘性物质称为粘合剂。凡是具有所述这种性能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明，也都在本发明保护范围之内。具体地，本发明使用的粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮，优选地选自纤维素衍生物、明胶或聚乙烯吡咯烷酮，更优选地选自明胶或聚乙烯吡咯烷酮。[0027]根据本发明，所述的润滑剂应该理解是一种在制粒过程中能够提高片剂流动性，防止片剂粘附在制片机上，有利于片剂脱模的物质。凡是具有所述这种性能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明，也都在本发明保护范围之内。具体地，本发明使用的润滑剂选自滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、微粉硅胶或聚乙二醇，优选地选自滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁或聚乙二醇，更优选地选自滑石粉或硬脂酸钙。
[0028]根据本发明，所述的矫味剂应该理解是一种在药品中用以改善或屏蔽药物不良气味和味道(例如强烈苦味或其它异味等)的辅料。凡是具有这种性能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明，也都在本发明保护范围之内。具体地，本发明使用的矫味剂选自单糖浆、蔗糖、卵磷脂、橙皮糖浆、枸橼糖浆、樱桃糖浆甜味剂；柠檬、茴香、薄荷油芳香剂；海藻酸钠、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠胶浆剂；枸橼酸、酒石酸与碳酸氢钠混合物泡腾剂，优选地选自单糖浆、蔗糖、橙皮糖浆、樱桃糖浆甜味剂；柠檬、薄荷油芳香剂；海藻酸钠、阿拉伯胶、明胶、羧甲基纤维素钠胶浆剂；酒石酸与碳酸氢钠混合物泡腾剂，更优选地选自蔗糖、橙皮糖浆、樱桃糖浆甜味剂；柠檬芳香剂；海藻酸钠、阿拉伯胶胶浆剂；酒石酸与碳酸氢钠混合物泡腾剂。
[0029]在本发明中，填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或矫味剂的用量应该根据实际使用的需要进行确定，这些对于制药技术领域的技术人员而言是不存在任何技术困难的。
[0030]在本发明中，所述的药物的剂型是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。[0031]本发明的短双歧杆菌C11菌剂可以与在药学上可接受的载体或赋形剂组合制成各种剂型，例如颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液，其中在药学上可接受的载体或赋形剂可以根据不同剂型进行选择，所使用的这些载体或赋形剂及其用量对于制药技术领域的技术人员都是容易确定的，也是显而易见的。
[0032]所述的剂型一般应该理解是适用于人的单剂量药物形式，单个剂型含有为达到所
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