(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611182282.7
(22)申请日 2016.12.20
(71)申请人 宁夏启元药业有限公司
地址 750101 宁夏回族自治区银川市望远
工业园启元大道1号
(72)发明人 王咏梅 邹学峰 孙瑞君
(51)Int.Cl.
G01N 21/33(2006.01)
(54)发明名称
法
(57)摘要
本发明涉及一种维生素C发酵液中古龙酸的
含量测定方法，
本发明采用紫外分光光度法测定维生素C发酵液中古龙酸的含量，以古龙酸对照
含量。该方法：1、直接用古龙酸对照品制作标准
曲线，可以减少样品测定误差；2、紫外分光光度
法测定比直接滴定速度快，可以进行批量测定；
3、测定数据准确，
不受时间温度等因素影响。权利要求书1页 说明书3页 附图1页CN 106596445 A 2017.04.26
C N 106596445
A
1.一种维生素C发酵液中古龙酸含量的方法，其特征在于采用紫外分光光度法进行测定。
2.按照权利要求1所述的维生素C发酵液中古龙酸含量的方法，其特征在于所述紫外分光光度法进行测定的具体过程为：首先以古龙酸对照品配制标准品溶液绘制标准曲线，然后测定维生素C发酵液样品溶液的吸收度，即可计算出发酵液中古龙酸含量； 所述紫外分光光度法中检测波长为256nm。
3.按照权利要求2所述的维生素C发酵液中古龙酸含量的方法，其特征在于所述标准曲线的绘制方法为：
1）配制古龙酸标准品溶液：精密称取古龙酸对照品，用纯化水溶解，加入硫酸溶液摇匀后，置水浴加热10～40分钟，冷却后用纯化水定容；
2）将古龙酸标准品溶液配制成不同浓度的稀释液；
3）以纯化水为空白，在256nm处测定吸收度，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线。
4.按照权利要求2所述的维生素C发酵液中古龙酸含量的方法，其特征在于所述维生素C发酵液样品溶液的配置方法为：精密量取维生素C发酵液样品，加水稀释，再加入硫酸溶液摇匀后，置水浴加热10～40分钟，冷却后用纯化水定容。
5.按照权利要求3或4所述的维生素C发酵液中古龙酸含量的方法，其特征在于所述硫酸溶液浓度为7mol/L。
权 利 要 求 书1/1页CN 106596445 A
一种维生素C发酵液中古龙酸的含量测定方法
技术领域
[0001]本发明属于化学分析技术领域，尤其是涉及一种维生素C发酵液中古龙酸的含量测定方法。
背景技术
[0002]维生素C，又名抗坏血酸，是细胞氧化-还原反应中的催化剂，它释放两个氢原子后变成氧化型维生素C，有供氢体存在时，脱氢抗坏血酸可以接受两个氢原子接受变成抗坏血酸，参与机体新陈代谢，增加机体对感染的抵抗力。用于防止坏血酸和抵抗传染性疾病，促进创伤和骨折愈合，以及用作辅助药物。
[0003]现有技术中，维生素C采用两步发酵法制备：第一步是以山梨醇为原材料，以黑醋菌为产生菌将山梨醇转化为山梨糖的过程；第二步是以第一步发酵所得的L－山梨糖为原料，一株氧化葡萄糖酸杆菌（“小 菌”）和一株假单胞杆菌（“大菌”），大小两种菌自然组合的混合菌株发酵生成2-酮基-L-古龙酸，再进行转化精制得到维生素C。
[0004]2-酮基-L-古龙酸作为维生素C的重要前体物质，快速准确测定其含量可为车间生产监控提供准确可靠的数据。现有技术中，对于维生素C中古龙酸的含量测定通常都是利用维生素C和碘液的氧化还原反应测定维生素C含量，然后再折算为古龙酸含量。该方法存在的不足之处为：以测定维生素C含量折算为古龙酸含量容易引入误差；测定结果受温度、滴定速度及样品颜影响，导致结果不准确；检出限比较低；滴定速度较慢。
发明内容
[0005]本发明的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种能快速、准确的测定维生素C发酵液中古
龙酸含量的方法。
[0006]为实现上述发明目的所采取的技术方案为：
一种维生素C发酵液中古龙酸含量的方法，其特征在于采用紫外分光光度法进行测定。[0007]所述紫外分光光度法进行测定的具体过程为：首先以古龙酸对照品配制标准品溶液绘制标准曲线，然后测定维生素C发酵液样品溶液的吸收度，即可计算出发酵液中古龙酸含量；
所述紫外分光光度法中检测波长为256nm。
[0008]所述标准曲线的绘制方法为：
1）配制古龙酸标准品溶液：精密称取古龙酸对照品，用纯化水溶解，加入硫酸溶液摇匀后，置水浴加热10～40分钟，冷却后用纯化水定容；
2）将古龙酸标准品溶液配制成不同浓度的稀释液；
3）以纯化水为空白，在256nm处测定吸收度，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线。
[0009]所述维生素C发酵液样品溶液的配置方法为：精密量取维生素C发酵液样品，加水稀释，再加入硫酸溶液摇匀后，置水浴加热10～40分钟，冷却后用纯化水定容。
[0010]所述硫酸溶液浓度为7mol/L。
[0011]本发明采用紫外分光光度法测定维生素C发酵液中古龙酸的含量，以古龙酸对照品绘制标准曲线，测定结果代入标准曲线中计算含量。该方法：1、直接用古龙酸对照品绘制标准曲线，可以减少样品测定误差；2、紫外分光光度法测定比直接滴定速度快，可以进行批量测定；3、测定数据准确，不受时间温度等因素影响。
附图说明
[0012]图1为本发明标准曲线图。
具体实施方式
[0013]为了使本领域的技术人员更好的理解发明的技术方案，下面结合具体实施方法对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。
[0014]下述实施例中，维生素C发酵液样品来源于宁夏启元药业有限公司的采用两步发酵法制备的维生素C发酵液。
[0015]1、 试验设备与试剂：
紫外-可见分光光度计。
[0016]50mL、100mL容量瓶、移液管。
[0017]古龙酸对照品、纯化水。
[0018]7mol/L硫酸溶液：量取浓硫酸42mL缓慢倒入50mL纯化水中，冷却至室温后，稀释至100mL。
[0019]2、 标准曲线测定：
标准曲线溶液：精密称取古龙酸对照品0.1g置50mL容量瓶中，加入5mL纯化水溶解后，加入2mL 7mol/L硫酸溶液摇匀后，置水浴加热10-40分钟，冷却，用纯化水稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2mL，置100mL容量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀。
[0020]标准曲线测定：在256nm处，以纯化水为空白，测定吸收度，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线，如图1所示。
浓度(μg/mL)1216202428
吸收值0.33950.44610.57160.67740.7865 [0021]结论：古龙酸浓度在12μg/mL～28μg /mL范围内，古龙酸浓度与吸收度呈良好的线性关系。
[0022]3、 发酵液样品测定
样品溶液：精密量取不同发酵液罐中维生素C发酵液样品1mL，置50mL容量瓶中，加入5mL纯化水，再加入2mL 7mol/L硫酸溶液摇匀，置水浴加热30分钟，冷却，用纯化水稀释至刻度，摇匀。精密吸取1mL置100mL容量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀。以纯化水为空白，在256nm处测定样品溶液吸收度，代入标准曲线计算发酵液中古龙酸含量。
[0023]测定结果：
发酵罐号401405407410415
吸收值0.58610.57650.58740.59150.5876
含量，mg/ml103.9102.2104.1104.9104.2
4、 样品精密度测定：
样品精密度溶液制备：分别精密吸取6份401发酵罐古龙酸发酵液1.0mL，分别6个置50mL容量瓶中，加入5mL纯化水稀释后，加入2mL 7mol/L硫酸溶液摇匀后，置水浴加热30分钟，冷却，用纯化水稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取1mL，置100mL容量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀。在256nm测测定吸收值。
[0024]测定结果：
结论：此法测定古龙酸发酵液中古龙酸精密度RSD为0.6%。
[0025]上述参照具体实施方式对该一种维生素C发酵液中古龙酸的含量检测方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例。因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
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