(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910844413.0
(22)申请日 2019.09.06
(71)申请人 青岛中科星熠高新技术研究院有限
公司
地址 266001 山东省青岛市李沧区北崂路
1022号中艺创意产业园A3栋3层308
(72)发明人 梁栋
(74)专利代理机构 北京联瑞联丰知识产权代理
事务所(普通合伙) 11411
代理人 张学府
(51)Int.Cl.
C12N 1/14(2006.01)
C12R 1/645(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明涉及生物化工领域，具体为一种冠突
散囊菌生产发酵方法；将茶叶和活性添加成分按
滤渣，处理第一滤渣得到发酵茶渣，处理发酵茶
渣得到后滤液，混合部分前滤液和后滤液得到冠
突散囊孢子悬浮液，将剩余所述前滤液与碳源营
养物质混合得到无菌培养液，将所述冠突散囊孢
子悬浮液接种到所述无菌培养液中发酵处理得
到冠突散囊菌；本发明通过制备前滤液、后滤液、
无菌培养液、冠突散囊菌悬液、冠突散囊菌液体
发酵五个步骤，将普通茶叶与枸杞、红枣、西洋参
等纯天然物质作为添加物制备发酵培养液。发明
生产原料更加简单，原料成本低，生产工艺可控，
完全能够达到产业化生产。权利要求书1页 说明书4页CN 110591925 A 2019.12.20
C N 110591925
A
1.一种冠突散囊菌生产发酵方法，其特征在于，将茶叶和活性添加成分按比例混合得到原料，处理原料得到前滤液和第一滤渣，处理第一滤渣得到发酵茶渣，处理发酵茶渣得到后滤液，混合部分前滤液和后滤液得到冠突散囊孢子悬浮液，将剩余所述前滤液与碳源营养物质混合得到无菌培养液，将所述冠突散囊孢子悬浮液接种到所述无菌培养液中发酵处理得到冠突散囊菌。
2.根据权利要求1所述的冠突散囊菌生产发酵方法，其特征在于，所述前滤液的处理方法包括：将所述茶叶和所述活性添加成分按照重量比100∶4-8∶0.5-3混合后熬煮1～2h。
3.根据权利要求2所述的冠突散囊菌生产发酵方法，其特征在于，所述茶叶包括重量比为4～20:1的黑茶和茯苓茶的混合物，所述活性添加成分包括枸杞或红枣或西洋参中的一种或多种混合物。
4.根据权利要求1所述的冠突散囊菌生产发酵方法，其特征在于，所述发酵茶渣的制备方法包括：在所述第一滤渣中加入食醋，调节pH至
5.5～
6.5后晾至至湿度为60-75％，放入至容器密封，在15-20℃下储藏15-45天。
5.根据权利要求1所述的冠突散囊菌生产发酵方法，其特征在于，所述后滤液的制备方法包括：将所述发酵茶渣加水熬煮30～60min后过滤收集滤液，为后滤液。
6.根据权利要求5所述的冠突散囊菌生产发酵方法，其特征在于，加入所述水与所述发酵茶渣的质量比为5～10:1。
7.根据权利要求1所述的冠突散囊菌生产发酵方法，其特征在于，所述无菌培养液制备方法包括：将剩余所述前滤液与碳源营养物质按体积质量比为100∶4-8的比例混合配制，配置的溶液pH为5.0-5.5，然后在温度条件为115-121℃，压力在0.1-0.15MPa条件下，持续灭菌20-30min。
8.根据权利要求7所述的冠突散囊菌生产发酵方法，其特征在于，所述碳源营养物质为蔗糖或葡萄糖中的任意一种。
9.根据权利要求1所述的冠突散囊菌生产发酵方法，其特征在于，所述冠突散囊孢子悬浮液的接种量为无菌培养液质量的5％-8％。
10.根据权利要求9所述的冠突散囊菌生产发酵方法，其特征在于，所述冠突散囊菌的发酵环境为转速100-500r/min，pH值5.0-5.5，溶氧20％-40％，温度28-30℃，培养时间120-168h。
权 利 要 求 书1/1页CN 110591925 A
一种冠突散囊菌生产发酵方法
技术领域
[0001]本发明涉及生物化工领域，具体为一种冠突散囊菌生产发酵方法。
背景技术
[0002]在人们的日常生活中，枸杞、红枣等经常被用于泡茶或浸泡药酒。研究发现枸杞中含有多种氨基
酸，并含有甜菜碱、玉蜀黍黄素、酸浆果红素等特殊营养成分，具有非常好的保健功效。枸杞的多种功效主要包括免疫调节、抗衰老、抗肿瘤、抗疲劳、抗辐射损伤、调节血脂、降血糖、降血压、保护生殖系统、提高视力、提高呼吸道抗病能力、美容养颜，滋润肌肤、保护肝脏、增强造血功能等等。红枣可以提高人体免疫力，抑制癌细胞生长，其中所含的芦丁可软化血管。西洋参作为补气保健首选药材，可以提高机体免疫力，抑制癌细胞生长；西洋参中的皂甙可以有效增强中枢神经系统功能；长服西洋参可以保护心血管系统、促进血液活力；同时其具有降低血糖、调节胰岛素分泌的功能。
[0003]茶叶是一种富含多酚类物质的植物，所含的化合物种类多达700 余种。而以茶叶的萃取液、浓缩粉、茶粉等为主要加工原料的茶饮料不但具有茶叶的清爽口味，而且含有茶多酚、儿茶素、等有效成分。已有研究结果显示茶叶中的有效成分可直接清除自由基，避免氧化损伤。因此，这些有效成分可作用于与自由基有关的许多疾病如动脉粥样硬化、糖尿病、机体老化等，具有预防心脑血管疾病、抗菌抗病毒等多种药理作用。
[0004]在我国六大类基本茶类中，茯砖茶是紧压黑茶的一种，以黑毛茶或粗老绿茶为原料，经过紧压过程而制成的再加工茶。在茯砖茶“发花”工艺中，存在着一种优势菌即冠突散囊菌，可以通过控制外界条件促使其生长繁殖，从而在茯砖茶表面生出大量肉眼可见的金黄闭囊壳，俗称“金花”。由于冠突散囊菌的存在，赋予了茯砖茶独特的品质和风味。因此，人们常以“金花”的数量和质量来判断茯砖茶品质。研究发现冠突散裹菌之所以有如此多的功效，归功于它在生长过程中为了满足自身的生长发育，可
以吸收茶叶中的营养物质，在利用并转化这些营养物质的同时，分泌很多代谢产物，如抗氧化作用类代谢产物、降脂类代谢产物、酶类代谢产物、香气类代谢产物、氨基酸类代谢产物、抗菌、抗肿瘤类代谢产物等。以抗菌、抗肿瘤类代谢产物为例，在茯砖茶“发花”工艺中，冠突散囊菌的大量生长繁殖能明显抑制和干扰其他细菌和霉菌明显的生长。丁婷等人在2012年通过抑菌实验发现冠突散囊菌液体发酵液对大肠杆菌、金黄葡萄球菌均有抑菌作用。邓放明(冠突散囊菌胞外多糖生物活性高通量筛选试验，2007)等研究了冠突散囊菌胞外多糖对肿瘤模型细胞的抑制作用，结果证实冠突散囊菌胞外多糖具有抗肿瘤细胞活性。因此，冠突散囊菌的代谢活动不仅促使茶叶中的各种成分发生明显的变化，在很大程度上形成了茯砖茶独特的、香、味，并且造就了其有益于人体健康的神奇功效。正是这些独特的生命活动，才使得冠突散囊菌的研究与开发具有非常重要的意义。固体培养冠突散囊菌时，虽然其长势旺盛，但并不适合大规模生产；液体发酵技术对冠突散囊菌进行培养时，不但生产周期短、成本低，产量大，而且液体培养冠突散囊菌菌丝体时，菌体生长代谢更活跃，更有利于活性成分的积累。因此，利用现代液体发酵技术可以实现冠突散囊菌的大规模培养与生产。
[0005]目前，大部分研究的冠突散囊菌发酵普遍存在培养基成分简单、相关保健品功效不足且单一的缺陷。
发明内容
[0006]为了解决以上的技术问题，本发明提供一种冠突散囊菌生产发酵方法；[0007]本发明是这样实现的：
[0008]一种冠突散囊菌生产发酵方法，将茶叶和活性添加成分按比例混合得到原料，处理原料得到前滤液和第一滤渣，处理第一滤渣得到发酵茶渣，处理发酵茶渣得到后滤液，混合部分前滤液和后滤液得到冠突散囊孢子悬浮液，将剩余所述前滤液与碳源营养物质混合得到无菌培养液，将所述冠突散囊孢子悬浮液接种到所述无菌培养液中发酵处理得到冠突散囊菌。
[0009]进一步的，前滤液的处理方法包括：将所述茶叶和所述活性添加成分按照重量比100∶4-8∶0.5-3混合后熬煮1～2h。
[0010]进一步的，茶叶包括重量比为4～20:1的黑茶和茯苓茶的混合物，所述活性添加成分包括枸杞或红枣或西洋参中的一种或多种混合物。
[0011]进一步的，发酵茶渣的制备方法包括：在所述第一滤渣中加入食醋，调节pH至5.5～6.5后晾至至湿度为60-75％，放入至容器密封，在15-20℃下储藏15-45天。
[0012]进一步的，后滤液的制备方法包括：将所述发酵茶渣加水熬煮 30～60min后过滤收集滤液，为后滤液。
[0013]进一步的，所述水与所述发酵茶渣的质量比为5～10:1。
[0014]进一步的，无菌培养液制备方法包括：将剩余所述前滤液与碳源营养物质按体积质量比为100∶4-8的比例混合配制，配置的溶液pH 为5.0-5.5，然后在温度条件为115-121℃，压力在0.1-0.15MPa条件下，持续灭菌20-30min。
[0015]进一步的，碳源营养物质为蔗糖或葡萄糖中的任意一种。
[0016]进一步的，冠突散囊孢子悬浮液的接种量为无菌培养液质量的 5％-8％。[0017]进一步的，冠突散囊菌的发酵环境为转速100-500r/min，pH值 5.0-5.5，溶氧20％-40％，温度28-30℃，培养时间120-168h。
[0018]上述方案的有益效果：
[0019]本发明通过制备前滤液、后滤液、无菌培养液、冠突散囊菌悬液、冠突散囊菌液体发酵五个步骤，将普通茶叶与枸杞、红枣、西洋参等纯天然物质作为添加物制备发酵培养液。发明生产原料更加简单，原料成本低，生产工艺可控，完全能够达到产业化生产。
具体实施方式
[0020]一种冠突散囊菌生产发酵方法，将茶叶和活性添加成分按比例混合得到原料，处理原料得到前滤液和第一滤渣，处理第一滤渣得到发酵茶渣，处理发酵茶渣得到后滤液，混合部分前滤液和后滤液得到冠突散囊孢子悬浮液，将剩余所述前滤液与碳源营养物质混合得到无菌培养液，将所述冠突散囊孢子悬浮液接种到所述无菌培养液中发酵处理得到冠突散囊菌。
[0021]实施例1
[0022]步骤1，按照按照重量份称取20份黑茶、60份文冠果树叶和5 份茯茶；
[0023]步骤2，将三种原料放入水中熬煮1小时，过滤收集滤液，称为前滤液，再用食醋调节前滤液pH到5.5～6.5后，冷藏备用；
[0024]步骤3，在步骤2所得茶渣中加入食醋，调节pH到5.5～6.5，再将茶渣晾至湿度为60％，再用三层医用纱布包裹，放入搪瓷器皿内，密封，15℃下储藏15天，得发酵茶渣；[0025]步骤4，将步骤3所得发酵茶渣加纯净水熬煮30分钟，然后过滤收集滤液，称为后滤液；
[0026]步骤5，将后滤液与前滤液混合，即制成冠突散囊孢子悬浮液。
[0027]步骤6，将步骤2制得的剩余前滤液冠突散囊孢子悬浮液按照与碳源营养物质按体积质量比为100∶4的比例混合配制，配置的溶液 pH为5.0-5.5，然后在温度条件为115℃，压力在0.12MPa条件下，持续灭
菌20min即得无菌培养液。
[0028]步骤7，将步骤5制得的冠突散囊孢子悬浮液按照8％的接种量接入由步骤二制得的无菌培养液中，设置发酵参数分别为：转速 500r/min，pH值为5.5，溶氧40％，温度30℃，培养168h，当发酵液颜呈红艳透明且菌丝量不再增加时停止发酵。
[0029]步骤8，收集并浓缩步骤7所得的发酵液，去除水分，得到冠突散囊菌。
[0030]实施例2
[0031]步骤1，按照按照重量份称取40份黑茶、40份文冠果树叶和2 份茯茶；
[0032]步骤2，将三种原料放入水中熬煮1.5小时，过滤收集滤液，称为前滤液，再用食醋调节前滤液pH到5.5～6.5后，冷藏备用；
[0033]步骤3，在步骤2所得茶渣中加入食醋，调节pH到5.5～6.5，再将茶渣晾至湿度为70％，再用三层医用纱布包裹，放入搪瓷器皿内，密封，117℃下储藏30天，得发酵茶渣；[0034]步骤4，将步骤3所得发酵茶渣加纯净水熬煮45分钟，然后过滤收集滤液，称为后滤液；
[0035]步骤5，将后滤液与前滤液混合，即制成冠突散囊孢子悬浮液。
[0036]步骤6，将步骤2制得的剩余前滤液冠突散囊孢子悬浮液按照与碳源营养物质按体积质量比为100∶4的比例混合配制，配置的溶液 pH为5.0-5.5，然后在温度条件为115℃，压力在0.12MPa条件下，持续灭菌20min即得无菌培养液。
[0037]步骤7，将步骤5制得的冠突散囊孢子悬浮液按照8％的接种量接入由步骤二制得的无菌培养液中，设置发酵参数分别为：转速 500r/min，pH值为5.5，溶氧30％，温度30℃，培养168h，当发酵液颜呈红艳透明且菌丝量不再增加时停止发酵。
[0038]步骤8，收集并浓缩步骤7所得的发酵液，去除水分，得到冠突散囊菌。
[0039]实施例3
[0040]步骤1，按照按照重量份称取35份黑茶、45份文冠果树叶和4 份茯茶；
[0041]步骤2，将三种原料放入水中熬煮1～2小时，过滤收集滤液，称为前滤液，再用食醋调节前滤液pH到5.5～6.5后，冷藏备用；
[0042]步骤3，在步骤2所得茶渣中加入食醋，调节pH到5.5～6.5，再将茶渣晾至湿度为60-75％，再用三层医用纱布包裹，放入搪瓷器皿内，密封，15-20℃下储藏15-45天，得发酵茶渣；
[0043]步骤4，将步骤3所得发酵茶渣加纯净水熬煮30～60分钟，然后过滤收集滤液，称为
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