(19)中华人民共和国国家知识产权局
| (12)发明专利说明书 | |
| (10)申请公布号 CN 103918554 A (43)申请公布日 2014.07.16 |
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(21)申请号 CN201410143290.5
(22)申请日 2014.04.11
(71)申请人 山东省农业科学院蔬菜花卉研究所
地址 250131 山东省济南市工业北路202号
(72)发明人 孔素萍 徐坤 刘波 高莉敏 刘冰江 刘贤娴 陈伟
(74)专利代理机构 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人 汤东凤
(51)Int.CI
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种利用氨磺乐灵诱导大蒜四倍体的方法，本发明选用氨磺乐灵为诱导大蒜四倍体诱变剂，采用最优诱变处理方法，通过研究获得最佳的诱导大蒜四倍体的效果，为大蒜种质创新和新品种选育提供种质资源储备。 | |
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法律状态
权 利 要 求 说 明 书
1.一种利用氨磺乐灵诱导大蒜四倍体的方法，其特征在于包括如下步 骤：
（1）将1.0mg6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg萘乙酸溶解在1LB5基本 培养基中，配制成液体培养基和固体培养基两种培养基，将两种培养基pH 调整至5.8-6.0，并进行高压灭菌；
（2）将2-12mg氨磺乐灵过滤灭菌后加入到1L高压灭菌好的液体 培养基中，分装备用；
（3）大蒜鳞茎经自然晾干打破休眠后，将其鳞芽去皮在自来水下冲洗 0.5-1.0h，然
后在无菌条件下用75%（质量百分浓度）的酒精浸泡1.0-2.0 min，在解剖镜下剥离出带2个叶原基0.15-0.25mm左右的茎尖作为外植 体；
（4）将剥离的茎尖接种在含有2-12mg/L氨磺乐灵的分装好的液体培 养基中，暗培养48-144h，然后取出茎尖在无菌水中冲洗3-5遍，再转入 固体培养基，培养条件为温度23.0±2.0℃，光照25～31μmol·m<sup>-2</sup>·s<sup>-1</sup>， 光照16h/d；
（5）茎尖在固体培养基上培养50-70d后，形成带根的芽苗植株；
（6）将获得的芽苗植株进行倍性鉴定，通过以下两种方法进行鉴定， 先用植株叶片通过流式细胞仪检测，再通过根尖染体计数鉴定，进一步 验证植株的倍性；从而鉴定出获得的四倍体植株。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于将氨磺乐灵处理后茎尖转 入固体培养基上培养，其固体培养基中琼脂粉的浓度为0.6-0.8%。
说 明 书
<p>技术领域
本发明属于农业技术领域，具体而言，涉及一种利用氨磺乐灵诱导大 蒜四倍体的方法。
背景技术
秋水仙素是常用的诱导染体加倍的化学诱变剂。氨磺乐灵与秋水仙 素相比，具有较小的毒性，而且染体加倍效果更好。目前，氨磺乐灵在 多种作物上都成功诱导出多倍体（Chalak1996;2000;Carvalho et al.2005； al.，2011），另外还应用在马铃薯（Leire Barandalla et al.，2006）、玫瑰（J.F.Allum et al.，2007）、湖北紫 荆（Joshua D.Nadlera et al.，2012）、百合（简佳等，2013）、观赏姜 （HamidouF.，2009）、西瓜（阎志红等，2008；赵依杰等，2011）、椪柑 （何建等，2011）兰花（TildenP.等，2011）等作物上。《一种薄皮甜瓜 四倍体诱导方法》发明专利（申请号CN201310258679）也是用的氨磺乐灵 诱导四倍体。
大蒜以无性系选育为主，难以进行大蒜种质创新及新品种选育。而倍 性育种是大蒜种质
创新及新品种选育的一种有效途径。目前大蒜有利用秋 水仙素诱导多倍体成功的报道（张素芝等，2006），未见利用氨磺乐灵诱导 大蒜四倍体。虽然秋水仙素是常用的多倍体加倍诱变剂，但毒性大，成本 高，诱变效率低，然而，直接使用氨磺乐灵诱导大蒜四倍体成功率低，如 何提高大蒜四倍体成功率是本领域技术亟待解决的技术问题。
豫公网安备41160202000603
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