(10)申请公布号
(43)申请公布日 (21)申请号 201510382105.2
(22)申请日 2015.07.03
A61K 36/46(2006.01)
G01N 30/88(2006.01)
(71)申请人普正药业股份有限公司
地址343000 江西省吉安市井冈山经济技术
开发区
(72)发明人周朝忠 肖军平 吴永忠 陈梁
杜剑松
(74)专利代理机构南昌佳诚专利事务所 36117
代理人闵蓉 张文宣
(54)发明名称
检测方法
(57)摘要
一种杜仲叶总黄酮提取物的制备方法与质量
检测方法，涉及天然药物化学成分分离纯化技术。
以杜仲叶为原料，粉碎后超声提取得上清液；后
素和芦丁的含量。本发明工艺简单，能耗低，得到
提取物中总黄酮含量高，具有较好的经济效益和
社会效益。检测相对方便，质量易控制。(51)Int.Cl.
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书2页CN 105456333 A 2016.04.06
C N 105456333
A
1.一种杜仲叶总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：以杜仲叶为原料，粉碎成粗粉，用8~20倍40%~95%的乙醇超声提取，每次30min~60min；收集提取液，减压回收乙醇，得浓缩液；离心，得上清液；用大孔树脂上样吸附0.5~
2.0小时，依次用1~3倍水洗脱除杂，流速为每小时1~3倍水；再以2~4倍30%~95%的乙醇洗脱，洗脱速率为每小时1~4倍；收集所得洗脱液，洗脱液浓缩干燥，得杜仲总黄酮提取物。
2.根据权利要求1所述的一种杜仲叶总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：所述超声提取次数为1~3次。
3.根据权利要求1所述的一种杜仲叶总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：所述大孔树脂选用HPD-100、HPD-400、HPD600或D101中的一种。
4.一种杜仲叶总黄酮提取物的质量检测方法，其特征在于，采用HPLC法测定槲皮素和芦丁的含量：
a.谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以20~50:80~50的甲醇-0.1~1%乙酸水溶液为流动相；检测波长为256nm；流速：0.8ml/min~1.0ml/min；柱温：25℃~35℃；理论塔板数均不低于2000；
b.对照品溶液的制备：取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品和槲皮素对照品适量，精密称定，置于量瓶中，用流动相超声处理，使溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，制成芦丁和槲皮素的混合对照溶液，摇匀，即得；
c.供试品溶液制备：取上述制备得到的杜仲总黄酮提取物适量，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相超声溶解；
d.测定：分别精密吸取对照品和供试品溶液5~15ul，注入高效液相谱仪，测定，即得。
一种杜仲叶总黄酮提取物的制备方法与质量检测方法
技术领域
[0001] 本发明涉及天然药物化学成分分离纯化技术，具体属于杜仲叶中总黄酮的制备工艺及其质量检测方法。
背景技术
[0002] 杜仲的别名丝棉树、丝棉皮、玉丝皮。在植物分类学上属杜仲科杜仲属，其皮叶同为中药品种，收载于中国药典2010年版一部，具有补肝肾、强筋骨的作用。由于杜仲皮一般需生长多年，方可采收，
周期长，资源相对紧缺。而杜仲叶的资源相对丰富、易得，近代研究证实了杜仲叶与杜仲皮有相同的有效成分和药理作用。杜仲叶中含有多种黄酮类物质，国内有关制药企业常把杜仲叶制备成杜仲浸膏，因此，需要有一种能有效检测杜仲浸膏质量的检测方法。
发明内容
[0003] 本发明的目的是针对上面所述缺陷，提供一种工艺简单、能耗低且提取物中总黄酮含量高的杜仲叶总黄酮提取物的制备方法。
[0004] 本发明的另一目的是提供一种杜仲叶总黄酮提取物的质量检测方法。
[0005] 本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的。
[0006] 一种杜仲叶总黄酮提取物的制备方法，其特征在于：以杜仲叶为原料，粉碎成粗粉，用8~20倍40%~95%的乙醇超声提取，提取1~3次，每次30min~60min；收集提取液，减压回收乙醇，得浓缩液；离心，得上清液；选用HPD-100、HPD-400、HPD600或D101大孔树脂，上样，上样吸附0.5~2.0小时，依次用1~3倍水洗脱除杂，流速为每小时1~3倍水；再以2~4倍30%~95%的乙醇洗脱，洗脱速率为每小时1~4倍；收集所得洗脱液，洗脱液浓缩干燥，得杜仲总黄酮提取物。
[0007] 一种杜仲叶总黄酮提取物的质量检测方法，其特征在于，采用HPLC法测定槲皮素和芦丁的含量：
a.谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以20~50:80~50的甲醇-0.1~1%乙酸水溶液为流动相；检测波长为256nm；流速：0.8ml/min~1.0ml/min；柱温：25℃~35℃；理论塔板数均不低于2000；
b.对照品溶液的制备：取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品和槲皮素对照品适量，精密称定，置于量瓶中，用流动相超声处理，使溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，制成芦丁和槲皮素的混合对照溶液，摇匀，即得；
c.供试品溶液制备：取上述制备得到的杜仲总黄酮提取物适量，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相超声溶解；
d.测定：分别精密吸取对照品和供试品溶液5~15ul，注入高效液相谱仪，测定，即得。
[0008] 本发明具有以下优点：从资源丰富的杜仲叶中提取黄酮类物质，在整个制备过程
中，工艺简单，能耗低，所用溶剂为乙醇和水，可回收利用，无污染，具有较好的环境效益；得到提取物中总黄酮含量高，具有较好的经济效益和社会效益。检测相对方便，质量易控制。[0009] 具体实施方式：
实施例1。
[0010] 将杜仲叶粉碎成粗粉，置于超声提取罐中用10倍量的50%乙醇超声提取，提取1次，每次提取30min；合并浓缩液，5000r/min离心10min，得上清液；上清液通过HPD600，吸附0.5小时，用1倍水，流速为每小时1倍水洗脱除杂；再以2倍50%的乙醇洗脱，洗脱速率为每小时一倍体积，收集洗脱液，洗脱液浓缩干燥，得杜仲叶总黄酮提取物。
[0011] HPLC法测定槲皮素和芦丁的含量：
a.谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以20:80的甲醇-0.1%乙酸水溶液为流动相；检测波长为256nm；流速：0.8ml/min；柱温：25℃；
b.对照品溶液的制备：取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品20.5mg和槲皮素0.54mg，精密称定，置于100ml量瓶中，用流动相超声处理，使溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，制成1ml含0.205mg芦丁和5.4ug槲皮素的溶液，摇匀，即得；
c .供试品溶液制备：取上述制备得到的杜仲总黄酮提取物0.5241g，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相超声溶解；
d.测定：分别精密吸取对照品和供试品溶液5ul，注入高效液相谱仪，测定，即得。[0012] 测得杜仲提取物含槲皮素0.18mg/g和2.54mg/g芦丁。
[0013] 实施例2。
[0014] 将杜仲叶粉碎成粗粉，置于超声提取罐中用10倍量的80%乙醇超声提取，提取2次，每次提取60min；合并浓缩液，5000r/min 离心10min，得上清液；上清液通过D101大孔树脂，吸附1小时，用2倍水，流速为每小时2倍水洗脱除杂；再以3倍80%的乙醇洗脱，洗脱速率为每小时2倍体积，收集洗脱液，洗脱液浓缩干燥，得杜仲叶总黄酮提取物。[0015] HPLC法测定槲皮素和芦丁的含量：
a.谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以30:70的甲醇-1%乙酸水溶液为流动相；检测波长为256nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；
b.对照品溶液的制备：取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品22mg和槲皮素0.48mg，精密称定，置于100ml量瓶中，用流动相超声处理，使溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，制成1ml含0.22mg芦丁和4.8ug槲皮素的溶液，摇匀，即得；
c.供试品溶液制备：取上述制备得到的杜仲总黄酮提取物0.5847g，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相超声溶解；
d.测定：分别精密吸取对照品和供试品溶液10ul，注入高效液相谱仪，测定，即得。[0016] 测得杜仲提取物含槲皮素0.21mg/g和芦丁2.69mg/g。
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