(10)申请公布号 CN 102980951 A
(43)申请公布日 2013.03.20C N 102980951 A
*CN102980951A*
(21)申请号 201210458087.8
(22)申请日 2012.11.15
G01N 30/02(2006.01)
(71)申请人上海景峰制药股份有限公司
地址200120 上海市宝山区罗新路50号
(72)发明人叶湘武 王琼 薛亮
(74)专利代理机构上海天翔知识产权代理有限
公司 31224
代理人吕伴
(54)发明名称
(57)摘要
本发明涉及透明质酸钠及其制剂中分子量的
质酸钠通过一根内装有不同孔径的高分子凝胶球
的谱柱，每一谱柱中可供分子通行的路径有
粒子间的较大间隙和粒子内的较小通孔；当透明
质酸溶液流经谱柱时，较大的分子被排除在粒
子的较小通孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速
率较快；而较小的分子可以进入粒子中的较小通
孔，通过的速率慢的多；经过一定长度的谱柱，
分子根据相对分子质量被分开，相对分子质量大
的在前面，相对分子质量小的在后面；其测量时
实验室的温度为16℃～24℃，配制的透明质酸溶
液在规定浓度的±10%范围内。利用本方法可以
保证检测透明质酸钠中分子量重复性，对数据分
析和产品的研究有很大帮助，减小测量带来误差，
特别适合实验室对其进行的检测工作。
(51)Int.Cl.
权利要求书1页 说明书4页
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请
权利要求书 1 页 说明书 4 页
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1.透明质酸钠及其制剂中分子量的检测方法，其是让测量的透明质酸钠溶液中透明质酸钠通过一根内装有不同孔径的高分子凝胶球的谱柱每一谱柱中可供分子通行的路径有粒子间的较大间隙和粒子内的较小通孔；当透明质酸溶液流经谱柱时，较大的分子被排除在粒子的较小通孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的较小通孔，通过的速率慢的多；经过一定长度的谱柱，分子根据相对分子质量被分开，相对分子质量大的在前面，相对分子质量小的在后面；其特征在于，所述测量时实验室的温度为16℃～24℃，配制的透明质酸溶液在规定浓度的±10%范围内。
2.如权利要求1所述的透明质酸钠及其制剂中分子量的检测方法，其特征在于，所述测量时实验室的温度为24℃。权 利 要 求 书CN 102980951 A
透明质酸钠及其制剂中的分子量的检测方法
技术领域：
[0001] 本发明涉及透明质酸钠检测技术领域，尤指一种透明质酸钠及其制剂中的分子量的检测方法。
背景技术：
[0002] 透明质酸（Hyaluronic acid，简称HA），是由（1→3）-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖-(1→4)-O-β-D-葡糖醛酸双糖重复单位所组成的直链多聚糖，分子式为(C14H21NO11)n，依据组织来源不同，分子量变化范围为2×105～7×106，双糖单位数为300～11000对。
[0003]
[0004] 商品透明质酸一般为钠盐形式，为白纤维状或粉末状固体，有较强的吸湿性，溶于水，不溶于有机溶剂。透明质酸钠的大分子网状结构通过与H2O形成氢键结合大量的水，在体内具有构成多种基质、调节渗透压、调控大分子物质的转运、在细胞周围形成物理屏障以及调节细胞功能等作用。透明质酸钠可作为眼科手术辅助用药及变形性膝关节病和肩关节周围炎的辅助，还在组织生成、创伤愈合、肿瘤入侵和调节细胞功能诸方面具有重要的生理功能。
[0005] 研究表明，不同分子量透明质酸钠制剂在骨关节炎方面均有确切疗效，分子量约为80~150万Da的相对小分子玻璃酸钠在促进软骨组织修复和减少滑膜组织增生方面略显优势。长期以来，中国、日本、欧美等国，都在寻求更好的检测方法，为更准确测出分子量而努力，为工艺改进提供更准确的数据
支持。在目前的公开的文献中，使用此检测方法并没有明确提出检测溶液的浓度范围，检测时环境温度。
发明内容：
[0006] 本发明所解决的技术问题，克服了上述检测方法中的条件不明确，提供一种保证检测浓度范围，同时，确保检验结果的重现性，以便检验工作有效开展的方法，尤其是透明质酸钠及其制剂中分子量的检测方法。
[0007] 本发明所解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：
[0008] 透明质酸钠及其制剂中分子量的检测方法，其是让测量的透明质酸钠溶液中透明质酸钠通过一根内装有不同孔径的高分子凝胶球的谱柱，每一谱柱中可供分子通行的
路径有粒子间的较大间隙和粒子内的较小通孔；当透明质酸溶液流经谱柱时，较大的分子被排除在粒子的较小通孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的较小通孔，通过的速率慢的多；经过一定长度的谱柱，分子根据相对分子质量被分开，相对分子质量大的在前面，相对分子质量小的在后面；其特征在于，所述测量时实验室的温度为16℃～24℃，配制的透明质酸溶液在规定浓度的±10%范围内。[0009] 在本发明的一个优选实施例中，所述测量时实验室的温度为24℃。
[0010] 由于采用了如上的技术方案，可以保证检测透明质酸钠中分子量重复性，对数据分析和产品的研究有很大帮助，减小测量带来误差，特别适合实验室对其进行的检测工作。
具体实施方式
[0011] 通过下面给出的本发明的具体实施例可以进一步清楚地了解本发明，但它们不是对本发明的限定。
[0012] 透明质酸钠及其制剂中分子量的检测方法，其是让测量的透明质酸钠溶液中透明质酸钠通过一根内装有不同孔径的高分子凝胶球的谱柱，每一谱柱中可供分子通行的路径有粒子间的较大间隙和粒子内的较小通孔；当透明质酸溶液流经谱柱时，较大的分子被排除在粒子的较小通孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的较小通孔，通过的速率慢的多；经过一定长度的谱柱，分子根据相对分子质量被分开，相对分子质量大的在前面，相对分子质量小的在后面；测量时实验室的温度为16℃～24℃，优选为24℃。配制的透明质酸溶液在规定浓度的±10%范围内。
[0013] 采用了如上的技术方案，可以保证检测透明质酸钠中分子量重复性，对数据分析和产品的研究有很大帮助，减小测量带来误差，特别适合实验室对其进行的检测工作。[0014] 以下通过具体实施例来予以验证：
[0015] 透明质酸钠批号：20120204
[0016] 试验1：确认环境温度对检验结果的影响：
[0017] 1.1系列对照品溶液制备：取4个分子量已知(280k 600k 1M 2M)聚苯乙烯磺酸钠适量，精密称定5mg，分别加流动相溶解并稀释至50ml，摇匀，室温放置过夜，作为系列对照品溶液（批号20120206）。
[0018] 1.2供试品溶液：精密称取透明质酸钠供试品5.20mg置50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至50ml摇匀，室温放置过夜，作为供试品溶液。分别将实验室环境温度控制在16℃，20℃，24℃，按谱条件分别进样测定，记录图谱，用GPC软件计算出供试品的分子量和分子量分布，并对3*6个测定结果进行评价。
[0019] 1.3具体实验
[0020] 1.3.1环境温度16℃进行检测，检测结果如表1：
[0021] 表1
[0022]
[0023] 1.3.2环境温度20℃进行检测，检测结果如表2：
[0024] 表2
[0025]
[0026]
[0027] 1.3.3环境温度24℃进行检测，检测结果如表3：
[0028] 表3
[0029]
[0030] 以上检测结果表明，检测时，不同的环境温度，对检验分子量的检测结果影响较大。如果不固定检测时的环境温度，对数据的分析、工艺稳定程度分析实际意义就会很小。[0031] 试验2：不同称样差异（溶液浓度）对检验结果的影响
[0032] 2.1系列对照品溶液：取4个分子量已知(280k 600k 1M 2M)聚苯乙烯磺酸钠适量，精密称定5mg，
分别加流动相溶解并稀释至50ml，摇匀，室温放置过夜，作为系列对照品溶液（批号20120206）。
[0033] 2.2供试品溶液：称取玻璃酸钠样品3份，分别为4.10mg、5.02mg、6.06mg分别置50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至50ml，摇匀，室温放置过夜，作为供试品溶液。按谱条件重复进样测定，用GPC软件计算出供试品的分子量和分子量分布，再对测定结果之间的精密度进行评价。
[0034] 2.3具体实验
[0035] 2.3.1供试品称量4.10mg置50ml容量瓶中，结果见表4
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