(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201580055029.2
(22)申请日 2015.11.17
(30)优先权数据
2014-234050 2014.11.18 JP
2015-064201 2015.03.26 JP
(85)PCT国际申请进入国家阶段日
2017.04.10
(86)PCT国际申请的申请数据
PCT/JP2015/082188 2015.11.17
(87)PCT国际申请的公布数据
WO2016/080371 JA 2016.05.26
(83)生物保藏信息
NITE BP-224 2007.11.21
(71)申请人 株式会社明治
地址 日本东京都
(72)发明人 山田成臣 狩野宏 岩本千鹤 大柴幸男 坪井洋 浅见幸夫 伊藤裕之 (74)专利代理机构 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262代理人 李平 郑霞(51)Int.Cl.C12N 1/00(2006.01)A23L 33/10(2006.01)A61K 35/747(2006.01)A61P 3/00(2006.01)C12N 1/20(2006.01) (54)发明名称
(57)摘要
提供了获得具有降低血清尿酸水平的作用
的乳酸菌的方法。本发明涉及筛选乳酸菌的方
法，包括测量乳酸菌在含有嘌呤的培养基中的嘌
呤摄取量，和利用嘌呤摄取量作为指标筛选具有
嘌呤捕获作用的乳酸菌；和涉及用于降低血清尿
酸水平的捕获嘌呤的剂，所述剂包含通过该方法
可获得的乳酸菌。权利要求书1页 说明书18页PCT/RO/134表2页 附图12页CN 107208029 A 2017.09.26
C N 107208029
A
1.一种筛选乳酸菌的方法，包括测量乳酸菌在含有嘌呤的培养基中的嘌呤摄取量，和利用所述嘌呤摄取量作为指标选择具有嘌呤捕获作用的乳酸菌。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养基中的嘌呤是嘌呤碱。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述培养基中的嘌呤用放射性同位素标记。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，包括在所述包含嘌呤的培养基中测量所述乳酸菌的增殖的量，和使用所述增殖量与所述嘌呤摄取量一起作为指标选择具有嘌呤捕获作用的乳酸菌。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述乳酸菌是加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)细菌。
6.一种具有嘌呤捕获作用的乳酸菌，其是通过根据权利要求1至5中任一项所述的方法可获得的。
7.一种用于捕获嘌呤的剂，所述剂包含通过根据权利要求1至5中任一项所述的方法可获得的具有嘌呤捕获作用的乳酸菌作为活性组分。
8.根据权利要求7所述的用于捕获嘌呤的剂，所述剂用于在降低血清尿酸水平中使用。
9.根据权利要求7或8所述的用于捕获嘌呤的剂，其中所述乳酸菌是加氏乳杆菌OLL2959菌株(登录号：NITE BP-224)。
10.一种食品或饮料产品或药物制剂，所述食品或饮料产品或药物制剂包含根据权利要求7至9中任一项所述的用于捕获嘌呤的剂。
11.根据权利要求9所述的食品或饮料产品或药物制剂，所述食品或饮料产品或药物制剂用于在减少肠道中的嘌呤中使用。
12.根据权利要求10或11所述的食品或饮料产品或药物制剂，所述食品或饮料产品或药物制剂用于在向具有6至8mg/dL血清尿酸水平的人类受试者施用中使用。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的食品或饮料产品或药物制剂，所述食品或饮料产品或药物制剂包含每剂量1x108至1x1010cfu的所述乳酸菌。
权 利 要 求 书1/1页CN 107208029 A
具有嘌呤摄取能力的乳酸菌及其用途
技术领域
[0001]本发明涉及具有嘌呤摄取能力的乳酸菌及其用途。
背景技术
[0002]最近几年在日本，随着饮食的改变，患有痛风的患者或高尿酸血症个体的数目每年增加。高尿酸血症包括尿酸的减少的排泄或过量尿酸的产生，并且血清尿酸水平的增加经常诱发痛风，其发展成伴随剧痛的急性关节炎。当前在日本，估计患有痛风的患者的数目是一百万，并且估计高尿酸血症个体的数目是一千万。现在，主要借助通过饮食疗法、运动疗法和药物的组合控制血清尿酸水平来预防或高尿酸血症。饮食疗法中，通过限制卡路里的摄取减少最终降解形成尿酸的膳食嘌呤的摄取。然而，继续严格限制卡路里的摄取不一定容易。因此，需要用于痛风或高尿酸血症的更加有效的方法。对于痛风或高尿酸血症，还需要对其预防或其症状的缓解有效的食品产品的开发。
[0003]已经报道了在减少高尿酸血症中的血清尿酸水平中示出疗效的微生物和发酵产品(专利文献1至5)。专利文献1，例如，公开了，乳酸菌具有将嘌呤核苷降解成嘌呤碱的高的能力。专利文献4和5，例如，公开了，乳酸菌具有降解嘌呤的能力。已经相信这些具有减少血清尿酸水平作用的常规的微生物和
发酵产品，通过促进肠道中的嘌呤核苷转化成嘌呤碱，即将易于从肠道吸收的嘌呤核苷转化成从肠道吸收不良的嘌呤碱，抑制嘌呤吸收或促进嘌呤排泄。然而，对人类测试结果几乎没有可得的报道，并且获得具有减少血清尿酸水平作用的乳酸菌的有效的方法是未知的。
[0004]引用列表
[0005]专利文献
[0006]专利文献1：日本专利公布号2008-005834A
[0007]专利文献2：国际公布号WO 2011/102310
[0008]专利文献3：国际公布号WO 2004/112809
[0009]专利文献4：国际公布号WO 2009/069704
[0010]专利文献5：日本专利公布号2013-048636 A
[0011]发明概述
[0012]技术问题
[0013]本发明的目的是提供获得(或选择)具有降低血清尿酸水平的作用的乳酸菌的有效方法。本发明的另一目的是提供具有嘌呤摄取能力的乳酸菌及其用途。
[0014]问题解决方案
[0015]作为解决上述问题的深入研究的结果，本发明人发现，存在具有嘌呤摄取能力和在嘌呤的存在下的高增殖能力的乳酸菌菌株诸如加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)细菌，并且这样的乳酸菌具有嘌呤摄取能力和在嘌呤的存在下的增殖能力之间的相关性，并且还发现，这种乳酸菌的施用(摄取)可降低血清尿酸水平，从而完成了本发明。
[0016]即，本发明包括以下。
[0017][1]一种筛选乳酸菌的方法，包括测量乳酸菌在含有嘌呤的培养基中的嘌呤摄取量，和利用所述嘌呤摄取量作为指标选择具有嘌呤捕获作用的乳酸菌。
[0018][2]根据以上[1]所述的方法，其中所述培养基中的嘌呤是嘌呤碱。
[0019][3]根据以上[1]或[2]所述的方法，其中所述培养基中的嘌呤用放射性同位素标记。[0020][4]根据以上[1]至[3]中任一项所述的方法，包括在所述包含嘌呤的培养基中测量所述乳酸菌的增殖量，和使用所述增殖量与所述嘌呤摄取量一起作为指标选择具有嘌呤捕获作用的乳酸菌。
[0021][5]根据以上[1]至[4]中任一项所述的方法，其中所述乳酸菌是加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)细菌。
[0022][6]具有嘌呤捕获作用的乳酸菌，其是通过根据以上[1]至[5]中任一项所述的方法可获得的。
[0023][7]一种用于捕获嘌呤的剂，所述剂包含通过根据以上[1]至[5]中任一项所述的方法可获得的具有嘌呤捕获作用的乳酸菌作为活性组分。
[0024][8]根据以上[7]所述的用于捕获嘌呤的剂，所述剂用于在降低血清尿酸水平中使用。[0025][9]根据以上[7]或[8]所述的用于捕获嘌呤的剂，其中所述乳酸菌是加氏乳杆菌OLL2959菌株(登录号：NITE BP-224)。
[0026][10]一种食品或饮料产品或药物制剂，所述食品或饮料产品或药物制剂包含根据以上[7]至[9]中任一项所述的用于捕获嘌呤的剂。
[0027][11]根据以上[10]所述的食品或饮料产品或药物制剂，其用于在减少肠道中的嘌呤中使用。
[0028][12]根据以上[10]或[11]所述的食品或饮料产品或药物制剂，其用于在向具有6至8mg/dL血清尿酸水平的人类受试者施用中使用。
[0029][13]根据以上[10]至[12]中任一项所述的食品或饮料产品或药物制剂，包含每剂量1x 108至1x 1010cfu的以上描述的乳酸菌。
[0030]发明的有益效果
[0031]根据本发明，可以有效地获得(选择)具有嘌呤捕获作用和降低血清尿酸水平的作用的乳酸菌。通过使用根据本发明的乳酸菌或捕获剂，可有效地捕获嘌呤。
[0032]本说明书包括日本专利申请第2014-234050号和第2015-064201号的内容，本申请从其要求优先权。
[0033]附图简述
[0034][图1]图1是示出加氏乳杆菌OLL2959菌株的嘌呤摄取能力的图。
[0035][图2]图2是示出在嘌呤的存在下加氏乳杆菌OLL2959菌株的增殖能力的图。[0036][图3]图3示出多个乳酸菌菌株的腺嘌呤摄取能力。
[0037][图4]图4是示出在腺嘌呤的存在下多个乳酸菌菌株的增殖能力的图。
[0038][图5]图5是示出连续口服施用(口服摄取)加氏乳杆菌OLL2959菌株的人类受试者中血清尿酸水平随着时间变化的图。
[0039][图6]图6是示出在向其同时施用加氏乳杆菌OLL2959菌株和嘌呤的动物中加氏乳杆菌OLL2959菌株的嘌呤摄取能力的图。
[0040][图7]图7是示出比较乳酸菌菌株间的腺嘌呤摄取能力的结果的图。
[0041][图8]图8是示出比较乳酸菌菌株间在腺嘌呤的存在下乳酸菌菌株的增殖能力的结果的图。
[0042][图9]图9是示出浊度(OD650)和加氏乳杆菌OLL2959菌株中核酸的量随着时间变化的图。
[0043][图10]图10是示出来自加氏乳杆菌OLL2959菌株的核酸的量和该核酸中的放射性随着时间变化的图。
[0044][图11]图11表示各自显示在施用加氏乳杆菌OLL2959菌株和14C-IMP的动物中OLL2959菌株降低IMP吸收的作用的图。放射性(dpm)：平均值±SD。*p<0.1。A：施用后15分钟，B：施用后30分钟。从左开始，每个柱显示阴性组(阴性对照组)、IMP组(IMP处理组)和IMP +OLL2959组(IMP+OLL2959菌株处理组)的结果。
[0045][图12]图12表示各自显示在施用加氏乳杆菌OLL2959菌株和14C-IMP的动物中OLL2959菌株降低IMP吸收的作用的图。放射性(dpm)：平均值±SD。*p<0.1。A：施用后45分钟，B：施用后60分钟。从左开始，每个柱显示阴性组(阴性对照组)、IMP组(IMP处理组)和IMP +OLL2959组(IMP+OLL2959菌株处理组)的结果。
[0046][图13]图13表示各自显示在施用加氏乳杆菌OLL2959菌株和14C-次黄嘌呤的动物中OLL2959菌株降低次黄嘌呤吸收的作用的图。放射性(dpm)：平均值±SD。##p<0.01。A：施用后15分钟，B：施用后30分钟。从左开始，每个柱显示阴性组(阴性对照组)、次黄嘌呤组(次黄嘌呤处理组)和次黄嘌呤+OLL2959组(次黄嘌呤+OLL2959菌株处理组)的结果。[0047][图14]图14表示各自显示在施用加氏乳杆菌OLL2959菌株和14C-次黄嘌呤的动物中OLL2959菌株降低次黄嘌呤吸收的作用的图。放射性(dpm)：平均值±SD。##p<0.01,#p< 0.05。A：施用后45分钟，B：施用后60分钟。从左开始，每个柱显示阴性组(阴性对照组)、次黄嘌呤组(次黄嘌呤处理组)和次黄嘌呤+OLL2959组(次黄嘌呤+OLL2959菌株处理组)的结果。[0048][图15]图15是显示加氏乳杆菌OLL2959菌株的次黄嘌呤摄取能力(捕获作用)和肌苷摄取能力(捕获作用)的图。
[0049][图16]图16是示出加氏乳杆菌OLL2959菌株在酸奶中的存活率的图。
[0050]实施方案的描述
[0051]本发明将在下文中详细描述。
[0052]“嘌呤”共同地指具有嘌呤骨架的物质并且被分类为嘌呤碱、嘌呤核苷和嘌呤核苷酸。嘌呤主要在活体细胞中起着多种功能，并且发挥例如作为核酸的成分传递遗传信息的作用。主要的嘌呤碱的实例包括腺嘌呤、鸟嘌呤、次黄嘌呤和黄嘌呤。嘌呤核苷是其中糖与嘌呤碱基结合的化合物，并且其实例包括其中核糖与嘌呤碱基结合的腺苷、鸟苷、肌苷和黄苷；和其中脱氧核糖与嘌呤碱基结合的脱氧腺苷、脱氧鸟苷、脱氧肌苷和脱氧黄苷。嘌呤核苷酸是其中磷酸与嘌呤核苷结合的化合物，并且其实例包括腺苷酸(AMP)、鸟苷酸(GMP)、肌苷酸(IMP)和黄苷酸(XMP)。
[0053]嘌呤从食品通过肠道吸收供给身体作为饮食嘌呤，或是从氨基酸等经由从头途径从头生物合成。嘌呤还经由补救途径生物合成，通过其由嘌呤核苷酸的降解产生的嘌呤碱被循环利用以合成嘌呤核苷酸。
[0054]在人类的情况中，嘌呤核苷酸最终代谢成尿酸。例如，腺苷酸通过5’-核苷酸酶(5’-NT)活性代谢成腺苷，且腺苷经过肌苷代谢成次黄嘌呤。次黄嘌呤通过黄嘌呤脱氢酶
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