(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010721469.X (22)申请日 2020.07.24
(71)申请人 江南大学
地址 214000 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大
道1800号(72)发明人 朱升龙 陈永泉 姜旋
(74)专利代理机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权
代理有限公司 23211
代理人 林娟(51)Int.Cl.
A61K 35/741(2015.01)A61P 3/04(2006.01)A61P 3/06(2006.01)A61P 1/16(2006.01)A61P 5/50(2006.01)
A61P 3/00(2006.01)A23L 33/135(2016.01)A23K 10/18(2016.01)
(54)发明名称
杜氏杆菌在预防和改善肥胖及其相关疾病中的应用(57)摘要 本发明涉及杜氏杆菌在预防和改善肥胖及其相关疾病中的应用，属于生物医药及微生物技术领域。本发明使用的杜氏杆菌属菌株(Dubosiellanewyorkensis)NYU -BL -A4能够改善高脂肪饮食诱导肥胖小鼠的各项指标异常，可使肥胖小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL -C)降低25％和肝脏甘油三酯(TG)含量降低32％；同时还能够降低肥胖小鼠体重和血糖相关指标，提高体内对葡萄糖的消化和吸收能力；所述杜氏杆菌属菌株NYU -BL -A4能够提高肥胖小鼠体内有益微生物的丰度，改善由高脂饮食引发的小鼠肠道菌结构紊乱，提高肠道代谢和免疫能力，减少细菌 感染等疾病的发生。
权利要求书1页 说明书7页序列表2页 附图3页
CN 111686133 A 2020.09.22
C N 111686133
A
1.杜氏杆菌(Dubosiellanewyorkensis)或含有杜氏杆菌的益生菌制剂在制备预防、缓解或改善肥胖及其并发症的产品方面的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述杜氏杆菌为NYU -BL -A4。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肥胖及其并发症包括高血脂、脂肪肝、胰岛素抵抗、葡萄糖不耐受。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品用于(a)～(c)至少一方面：(a)降低体重；
(b)降低肝脏脂肪的堆积；
(c)降低血清低密度脂蛋白胆固醇、肝脏胆固醇、甘油三酯中至少一个指标的水平。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品用于提高肠道内有益微生物的丰度。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述有益微生物包括但不限于双歧杆菌属和/或乳杆菌属的微生物。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述益生菌制剂中除杜氏杆菌外，还含有辅料，所述辅料包括但不限于赋形剂或食品添加剂膳食补充剂；所述杜氏杆菌在益生菌制剂中的含量不低于1.0×107cfu/mL或1.0×107cfu/g。
8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括药物或药物组合物，杜氏杆菌在药物或药物组合物中的含量不低于1.0×107cfu/mL或1.0×107cfu/g。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物或药物组合物还包括药学上可接受的赋型剂；所述药学上可接受的赋型剂是指任何可用于药学领域的稀释剂、辅助剂和/或载体。
10.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括但不限于食品、保健品饮品、肠内营养制剂、膳食补充剂、兽药或者饲料添加剂。
权 利 要 求 书
1/1页
CN 111686133 A
杜氏杆菌在预防和改善肥胖及其相关疾病中的应用
技术领域
[0001]本发明涉及杜氏杆菌在预防和改善肥胖及其相关疾病中的应用，属于生物医药及微生物技术领域。
背景技术
[0002]随着二代测序技术、宏基因组学、代谢组学技术的发展和应用，人们对肠道微生物的研究也不断深入。成人肠道内的微生物大约有330万个基因，是整个人类基因组的150～200 倍，被认为是人体的第二基因组，而人体则被形容为“超级生物体”。肠道菌参与了人体的营养和能量的代谢过程，不仅可通过影响机体的能量代谢吸收、肠壁通透性介导肥胖的发生、发展，也可以通过参与机体碳水化合物、胆汁酸、胆碱等的代谢过程，产生小分子化学物质，与人体的组织器官相互作用，形成肠道菌-肠-靶器官轴，介导肥胖症的发生发展。
[0003]肠道菌作为机体“隐形的内分泌器官”，其参与物质代谢产生的多种化学物质对宿主的多种作用需要更多的基础和临床试验去研究，以期为肥胖的预防和提供更多的理论依据。随着技术的发展与成熟，可以更好地针对敏感菌进行肠道干预，弥补临床研究空白，如益生菌、益生元特异性菌种的研发，
敏感菌种的肠道移植，代谢物质作用的相关受体及配体激动剂或阻滞剂，以期更有效地发挥菌的减重作用，这些针对肠道菌的个体化干预将为肥胖症的预防和提供新思路。
[0004]然而，由于微生物-宿主相互作用的特异性，必须在纯培养物中获得有益的生物，以便始终如一地将其作为剂提供。与胃肠道中的大量生物相比，当今市场上可用的益生菌中使用的属相对较少。对培养和表征新型细菌分类的成员的需求不断增加，要定期鉴定潜在微生物并研究其与宿主关联性。
发明内容
[0005]本发明为解决上述背景技术中提出的问题，本发明提供了杜氏杆菌(Dubosiella newyorkensis)或含有杜氏杆菌的益生菌制剂在制备预防、缓解或改善肥胖及其并发症的产品方面的应用。
[0006]在本发明的一种实施方式中，所述杜氏杆菌为NYU-BL-A4，公布于公开号为 US2018125900A1的专利中。
[0007]在本发明的一种实施方式中，所述肥胖及其并发症包括高血脂、脂肪肝、胰岛素抵抗、葡萄糖不耐受。
[0008]在本发明的一种实施方式中，
[0009]所述产品用于(a)～(c)至少一方面：
[0010](a)降低体重；
[0011](b)降低肝脏脂肪的堆积；
[0012](c)降低血清低密度脂蛋白胆固醇、肝脏胆固醇、甘油三酯中至少一个指标的水
平。
[0013]在本发明的一种实施方式中，所述产品用于提高肠道内有益微生物的丰度。[0014]在本发明的一种实施方式中，所述有益微生物包括但不限于双歧杆菌、乳杆菌属。[0015]在本发明的一种实施方式中，所述益生菌制剂中除杜氏杆菌外，含有其他辅料，所述辅料包括但不限于赋形剂或食品添加剂；所述杜氏杆菌在益生菌制剂中的含量不低于 1.0×108cfu/mL或1.0×108cfu/g。
[0016]在本发明的一种实施方式中，所述产品包括药物或药物组合物，杜氏杆菌在药物或药物组合物中的含量为不低于1.0×108cfu/mL或1.0×108cfu/g。
[0017]在本发明的一种实施方式中，所述药物或药物组合物还包括药学上可接受的赋型剂。
[0018]在本发明的一种实施方式中，所述药学上可接受的赋型剂是指任何可用于药学领域的稀释剂、辅助剂和/或载体。
[0019]在本发明的一种实施方式中，所述产品包括但不限于食品、保健品饮品、肠内营养制剂、膳食补充剂、兽药或者饲料添加剂。
[0020]在本发明的一种实施方式中，所述食品、保健品饮品、肠内营养制剂、膳食补充剂、兽药或者饲料添加剂中还含有本领域技术人员根据剂型或者使用目的适当选择配料的本技术领域的常用成分，可与其他原料一同使用。
[0021]在本发明的一种实施方式中，所述常规辅料包括填充剂、矫味剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、抗酸剂、以及营养强化剂中的一种或多种。
[0022]有益效果：本发明杜氏杆菌属菌株(Dubosiella newyorkensis)NYU-BL-A4能够改善高脂肪饮食诱导肥胖小鼠的各项指标异常，可使肥胖小鼠血清和肝脏低密度脂蛋白胆固醇(LDL- C)降低15％、甘油三酯(TG)含量降低32％；同时还能够降低肥胖小鼠体重和血糖相关指标，提高体内对葡萄糖的消化和吸收能力；所述杜氏杆菌属菌株NYU-BL-A4能够提高肥胖小鼠体内双歧杆菌(Bifidobacterium)、乳杆菌(Lactobacillus))的丰度，改善由高脂饮食引发的小鼠肠道菌结构紊乱，提高肠道代谢和免疫能力，减少细菌感染等疾病的发生。本发明所述的菌株可用于制备缓解代谢综合征的保健食品或药物，具有非常广泛的应用前景。
附图说明
[0023]图1是杜氏杆菌NYU-BL-A4对肥胖小鼠肠道中相关有益菌属丰度的影响图。[0024]图2是杜氏杆菌NYU-BL-A4对肥胖小鼠体重的影响图。
[0025]图3是杜氏杆菌NYU-BL-A4对肥胖小鼠空腹血糖水平图。
[0026]图4是杜氏杆菌NYU-BL-A4对肥胖小鼠葡萄糖耐量(GTT)的影响图。
[0027]图5是杜氏杆菌NYU-BL-A4对肥胖小鼠胰岛素敏感性(ITT)的影响图。
[0028]图6是杜氏杆菌NYU-BL-A4对肥胖小鼠的肝脏重量的影响图。
[0029]图7是杜氏杆菌NYU-BL-A4对肥胖小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的影响图。
[0030]图8是杜氏杆菌NYU-BL-A4对肥胖小鼠肝脏甘油三酯(TG)的影响图。
[0031]图9是杜氏杆菌NYU-BL-A4对肥胖小鼠肝脏脂质代谢基因的影响图。
具体实施方式
[0032]C57BL/6J小鼠购自上海斯莱克实验动物有限公司。
[0033]改良MTGE肉汤培养基：MTGE肉汤培养基+0.05％半胱氨酸盐酸盐。
[0034]实施例1：杜氏杆菌NYU-BL-A4对模拟胃肠液的耐受性
[0035]将保存于冷冻-80℃下的杜氏杆菌NYU-BL-A4接种于改良MTGE肉汤培养基中，于37℃厌氧条件下培养48h，再以2-4mL/100mL的接种量液体传代培养2次，充分活化菌株。调整菌株培养液活菌浓度为5×108CFU/mL，并取出培养液1mL与9.0mL pH2.5的人工模拟胃液 (含1g/100mL胃蛋白酶、pH＝2.5的MTGE肉汤培养基)混合，并在37℃厌氧条件下培养，分别在0h、0.5h、1h和2h时取样，涂布于布鲁氏菌固体培养基并培养、进行平板菌落计数，测定活菌数并计算其存活率。存活率是取样时培养液中活菌数的对数值与在第0h时活菌数对数值之比，以％表示。实验结果如表1所示。
[0036]表1杜氏杆菌NYU-BL-A4在人工模拟胃液中的耐受性
[0037]
[0038]取混合培养液1mL加入9mL人工模拟肠液(含0.3％牛胆盐、1％胰蛋白酶、pH＝8.0的 MTGE肉汤
培养基)中，在37℃厌氧环境下培养，分别在0h、0.5h、1h、2h、3h和4h时取样，涂布于布鲁氏菌固体培养基并培养、进行平板菌落计数，测定活菌数并计算其存活率。存活率是在该培养液中在取样时的活菌数对数值与在第0h时活菌数对数值之比，以％表示。实验结果如表2所示。
[0039]表2杜氏杆菌(Dubosiella newyorkensis)NYU-BL-A4在人工模拟肠液中的耐受性
[0040]
[0041]实验结果如表1和表2所示，结果表明，杜氏杆菌(Dubosiella newyorkensis)NYU-BL- A4在酸性和碱性的人工胃肠液中均具有较高的存活，因而其对肠液具有较好的耐受性。
[0042]实施例2：杜氏杆菌NYU-BL-A4对C57BL/6J小鼠无毒副作用
[0043]将杜氏杆菌NYU-BL-A4菌体重悬于3g/100mL的蔗糖溶液中，制成浓度为 3.0×108CFU/mL的菌悬
液。取体重20-22g左右的健康雄性C57BL/6J小鼠8只，适应饲养环境一周后，每日给予浓度为3.0×108CFU/mL的菌悬液灌胃一次，每次灌胃0.2mL，观察一周，记录实际死亡和体重情况。实验结果见表3。
[0044]表3小鼠体重的变化及死亡情况
[0045]时间(天)1234567体重(g)21..25±0.221.39±0.321.68±0.321.97±0.222.12±0.322.32±0.222.45±0.3
死亡情况-------[0046]注：-表示无死亡。
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