(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910145557.7
(22)申请日 2019.02.27
(83)生物保藏信息
CGMCC NO. 6022 2012.04.19
(71)申请人 中国农业大学
地址 100193 北京市海淀区圆明园西路2号
(72)发明人 杨绍青 闫巧娟 段晓杰 江正强
相曼
(74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限
公司 11245
代理人 白艳
(51)Int.Cl.
C12N 9/20(2006.01)
C12N 15/55(2006.01)
C12P 7/44(2006.01)
C11B 9/02(2006.01) (54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种樟绒枝霉脂肪酶及其编
McLipB，是如下1)或2)或3)的蛋白质：1)序列表 中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；2)序
列表中序列1自N末端第22至565位所示的氨基酸
序列组成的蛋白质；3)将1)或2)所述的蛋白质经
过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/
或添加得到的具有脂肪酶活性的蛋白质。本发明
发现一种来源于樟绒枝霉的脂肪酶及其编码基
因，将其导入毕赤酵母中，得到重组毕赤酵母，重
组毕赤酵母该在5L发酵罐中高密度发酵后，发酵
上清液的肪酶酶酶活力达4304U/mL。
权利要求书1页 说明书11页序列表3页 附图3页CN 109797141 A 2019.05.24 C N 109797141
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109797141 A
1.蛋白质，为如下1)-4)中任一种：
1)氨基酸序列是序列表中序列1所示的蛋白质；
2)序列表中序列1自N末端第22至565位所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
3)在1)或2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；
4)将1)-3)中任一所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且具有相同功能的蛋白质。
2.编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子。
3.如权利要求2所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子为如下(a1)-(a4)中任一种所示的DNA分子：
(a1)编码区包括序列表中序列2的DNA分子；
(a2)序列表中序列2的自5′末端第64-1698位核苷酸组成的DNA分子；
(a3)与(a1)或(a2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子；
(a4)在严格条件下与(a1)或(a2)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子。
4.含有权利要求2或3所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系。
5.权利要求1所述蛋白质在作为脂肪酶中的应用；
或权利要求2或3所述核酸分子，或，含有权利要求4所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系，在制备脂肪酶中的应用。
6.一种制备脂肪酶的方法，包括如下步骤：发酵权利要求5所述的重组微生物，得到脂肪酶。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：
所述发酵培养包括如下步骤：将重组微生物发酵培养基中培养，待甘油消耗完全，流加甘油，保证发酵体系中的溶氧量在20％-70％，待菌体湿重达到180-220g/L时停止甘油流加；再饥饿处理0.5h，开始流加体积百分含量100％甲醇进行诱导培养，得到脂肪酶。
8.权利要求1所述蛋白质在水解对硝基苯酯或甘油三酯类中的应用；
或权利要求1所述蛋白质在水解黄油制备奶味香精中的应用；
或权利要求1所述蛋白质在降解邻苯二甲酸酯类中的应用。
9.一种制备奶味香精的方法，用权利要求1所述蛋白质水解黄油，得到奶味香精；
或一种水解对硝基苯酯或甘油三酯类的方法，用权利要求1所述蛋白质水解对硝基苯酯或甘油三酯类；
或，一种降解邻苯二甲酸酯类的方法，用权利要求1所述蛋白质水解邻苯二甲酸酯类。
10.根据权利要求8所述的应用或权利要求9所述的方法，其特征在于：
所述水解的反应pH范围为3.0-9.0；
和/或，所述水解的反应温度范围为30-40℃。
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