(19)中华人民共和国国家知识产权局
| (12)发明专利说明书 | |
| (10)申请公布号 CN 103675284 A (43)申请公布日 2014.03.26 |
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(21)申请号 CN201310650519.X
(22)申请日 2013.12.03
(71)申请人 南昌大学
地址 330031 江西省南昌市红谷滩新区学府大道999号
(72)发明人 陈红兵 周宁菱 李雯莹 吴志华 高金燕 李欣 佟平 杨安树
(74)专利代理机构 南昌新天下专利商标代理有限公司
代理人 施秀瑾
(51)Int.CI
G01N33/577
(54)发明名称
(57)摘要
一种利用过敏原表位单克隆抗体评估食物致敏性的方法，按以下步骤：（1）用常规方法获得过敏原蛋白抗体和分别针对各致敏表位的单克隆抗体；（2）用过敏原蛋白抗体包被酶标板，封闭后加入待检测样品，再加入针对各致敏表位的单克隆抗体，测得各致敏表位的数量；（3）计算致敏性强度；（4）采用与待检测样本来源相近、致敏性得到公认的食物/蛋白样品在相同条件下处理，获得参照，与对照样品对比，即可判断待检测样本的致敏性。本发明通过制备过敏原蛋白的抗体，实现食品及其过敏原蛋白的致敏性评估，摆脱了致敏性评估对过敏患者血清的依赖，也有利于实现评估的标准化。 | |
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法律状态
法律状态公告日 | 法律状态信息 | 法律状态 |
2015-07-01 | 授权 | 授权 |
2014-04-23 | 实质审查的生效 | 实质审查的生效 |
2014-03-26 | 公开 | 公开 |
2022-02-15 | 专利权的转移IPC(主分类):G01N33/577专利号:ZL201310650519X登记生效日:20220129变更事项:专利权人变更前权利人:南昌大学变更后权利人:杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司变更事项:地址变更前权利人:330031 江西省南昌市红谷滩新区学府大道999号变更后权利人:310052 浙江省杭州市滨江区滨康路568号2号楼201-209室 | 专利申请权、专利权的转移 |
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权 利 要 求 说 明 书
1.一种利用过敏原表位单克隆抗体评估食物致敏性的方法，其特征是按以下步骤：
（1）用常规方法获得过敏原蛋白抗体和分别针对各致敏表位的单克隆抗体；
（2）用双抗夹心法分别测定样品中所含致敏表位的数量：首先用过敏原蛋白抗体包被酶标板，封闭后加入待检测样品，再加入针对各致敏表位的单克隆抗体，再经显反应后测得各致敏表位的数量；
（3）计算致敏性强度A=k<sub>1</sub>C<sub>1</sub>+ k<sub>2</sub>C<sub>2</sub>+ k<sub>3</sub>C<sub>3</sub>+ k<sub>4</sub>C<sub>4</sub>+ …+ k<sub>i</sub>C<sub>i</sub>，其中k<sub>i</sub>为过敏原蛋白致敏表位i的致敏强度系数，C<sub>i</sub>为过敏原蛋白致敏表位i的数量；
（4）采用与待检测样本来源相近、致敏性得到公认的食物/蛋白样品在相同条件下处理，获得其A值作为参照，与对照样品对比，即可判断待检测样本的致敏性。
说 明 书
<p>技术领域
本发明属于食品技术领域，涉及一种食物过敏的安全性检测方法。
背景技术
食物过敏作为世界各地普遍存在的一个食品安全问题，其发病率在不断增长，引起了人们的广泛关注。以花生为例，花生及其制品是FAO/WHO认定的八大类食物过敏食品之一。近二十年来，花生过敏症的发病率呈明显上升趋势，1而且花生过敏患者的症状一般比较严重，由花生引起的食物过敏反应中有20%可能是致命性的，这些严重制约了花生在食品工业中的应用。
目前对食物过敏原的检测严重依赖生物学样本，包括抗抗血清，抗体等，对食物致敏性的评估则完全依赖于抗血清和动物（人体）实验。受到生物学样本数量和一致性的约束，对食物致敏性的定量评价难以实现标准化。相对于血清样品，单克隆抗体的制备技术已经成熟，能够实现批量化生产。
蛋白质的功能是由其结构决定的，这提示我们结构检测的结果可用于评价蛋白功能。作为食物过敏原的蛋白，其致敏功能主要是由过敏原表位的结构来实现。过敏原表位，包括线性表位和构象性表位，是食物过敏反应发生的物质基础，过敏原表位存在及数量直接影响蛋白致敏性的强弱。截止目前，已经有很多过敏原蛋白的结构及过敏原表位都被揭示。这些线性表位的确定为利用结构分析起致敏性提供了方向。通过基于单克隆抗体的ELISA可以测定过敏原蛋白致敏表位数量，再根据各表位激发致敏反应的强弱，推断整个食物样品致敏性的强弱，评估食品安全风险的高低。过敏原蛋白各表位的致敏能力可以通过其刺激导致的过敏反应强弱得出，这一能力的强弱可以用敏原蛋白致敏表位的致敏强度系数k来表征。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用过敏原表位单克隆抗体评估食物致敏性的方法，是一种不依赖血清学样本的食物致敏性评估方法，即利用针对过敏原表位的单克隆抗体分析食物中过敏原蛋白线性表位的数量和活性，并据此判断食物的致敏性强弱。
本发明是通过以下步骤实现的。
1、用常规方法获得过敏原蛋白抗体和分别针对各致敏表位的单克隆抗体。
2、用双抗夹心法分别测定样品中所含致敏表位的数量。具体步骤为，首先用过敏原蛋白抗体包被酶标板，封闭后加入待检测样品，再加入针对各致敏表位的单克隆抗体。再经显反应后可以测得各致敏表位的数量。
3、计算致敏性强度A=k<sub>1</sub>C<sub>1</sub>+ k<sub>2</sub>C<sub>2</sub>+ k<sub>3</sub>C<sub>3</sub>+ k<sub>4</sub>C<sub>4</sub>+ …+ k<sub>i</sub>C<sub>i</sub>，其中k<sub>i</sub>为过敏原蛋白致敏表位i的致敏强度系数，C<sub>i</sub>为过敏原蛋白致敏表位i的数量。
4、采用与待检测样本来源相近、致敏性得到公认的食物/蛋白样品在相同条件下处理，获得其A值作为参照，与对照样品对比，即可判断待检测样本的致敏性。
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