(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810867788.4
(22)申请日 2018.08.01
(71)申请人 李文锦
地址 531599 广西壮族自治区百市田东
县环城路小塘开发区田东县八闽农业
综合开发有限公司
(72)发明人 李文锦
(51)Int.Cl.
C12P 21/06(2006.01)
C07K 1/30(2006.01)
(54)发明名称一种低分子多肽的制备方法(57)摘要本发明公开了一种低分子多肽的制备方法，该制备方法包括以下步骤：（1）前处理：羊胎盘去杂、水洗、晾干、剪切、冷冻、超微粉碎；（2）酶解：向浆液中加水，调pH至7.7~7.8，加胰蛋白酶和Protamex，升温至40~43℃反应，滤纸过滤后取滤液；（3）提取：向酶解液中加乙醇、氯化钠和硅藻土，调pH至6.4~6.6，在10~15℃下搅后压滤，取上清液；向粗提液中加乙醇、氯化钠、硅藻土和麸皮，调pH至6.8~7.0，在3~5℃下搅后压滤，取沉淀；取沉淀冷冻，于0~10℃下超微粉碎，加水，在10~15℃下搅后有机过滤膜过滤并取滤液，冷冻，即得；过程中控温、控量、控时等，获得低分子多 肽。权利要求书2页 说明书5页CN 108866136 A 2018.11.23
C N 108866136
A
1.一种低分子多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）前处理
取新鲜羊胎盘，去除筋膜和血管，水洗，于室温下晾1~2hr；剪切成块，于-30~-20℃下冷冻8~12hr，于0~10℃下超微粉碎得到浆液；
（2）酶解
搅拌条件下，向浆液中加入水，加入0.8~1.1mol/l的碳酸钠水溶液调节体系pH至7.7~7.8，加入胰蛋白酶和Protamex，升温至40~43℃进行反应，至酶解完全，用滤纸过滤后取滤液，即为酶解液；
按质量计，浆液、水、胰蛋白酶和Protamex的用量比为1:4~6:0.2~0.4:0.1~0.2；
（3）提取
向酶解液中加入乙醇、氯化钠和硅藻土，加入0.8~1.1mol/l的盐酸水溶液调节体系pH 至6.4~6.6，在10~15℃下搅拌30~45min，在10~15℃下以1.6~2.0Kg/cm 2的压力进行压滤，取上清液，即为粗提液；按质量计，酶解液、乙醇、氯化钠和硅藻土的用量比为1:0.08~0.12:0.04~0.06:0.05~0.08；
向粗提液中加入乙醇、氯化钠、硅藻土和麸皮，加入0.8~1.1mol/l的盐酸水溶液调节体系pH至6.8~7.0，在3~5℃下搅拌30~45min，在3~5℃下以1.6~2.0Kg/cm 2的压力进行压滤，取沉淀；按质量计，粗提液、乙醇、氯化钠、硅藻土和麸皮的用量比为1:0.08~0.12:0.02~0.04:0.03~0.05:0.04~0.06；
取沉淀于-30~-20℃下冷冻8~12hr，于0~10℃下超微粉碎，加入水，在10~15℃下搅拌30
~45min，
用0.45μm或0.22μm有机过滤膜过滤并取滤液，于-30~-20℃下冷冻8~12hr，即得；按质量计，沉淀和水的用量比为1:2~3。
2.根据权利要求1所述的一种低分子多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）前处理
取新鲜羊胎盘，去除筋膜和血管，水洗，于室温下晾1.5hr；剪切成块，于-25℃下冷冻10hr，于4℃下超微粉碎得到浆液；
（2）酶解
搅拌条件下，向浆液中加入水，加入1.0mol/l的碳酸钠水溶液调节体系pH至7.8，加入胰蛋白酶和Protamex，升温至42℃进行反应，至酶解完全，用滤纸过滤后取滤液，即为酶解液；
按质量计，浆液、水、胰蛋白酶和Protamex的用量比为1:5:0.3:0.15；
（3）提取
向酶解液中加入乙醇、氯化钠和硅藻土，加入1.0mol/l的盐酸水溶液调节体系pH至
6.5，在12℃下搅拌40min，在12℃下以1.8Kg/cm 2的压力进行压滤，取上清液，即为粗提液；按质量计，酶解液、乙醇、氯化钠和硅藻土的用量比为1:0.10:0.05:0.06；
向粗提液中加入乙醇、氯化钠、硅藻土和麸皮，加入1.0mol/l的盐酸水溶液调节体系pH 至6.9，在4℃下搅拌40min，在4℃下以1.8Kg/cm 2的压力进行压滤，取沉淀；按质量计，粗提液、乙醇、氯化钠、硅藻土和麸皮的用量比为1:0.10:0.03:0.04:0.05；
取沉淀于-25℃下冷冻10hr，于4℃下超微粉碎，加入水，在12℃下搅拌40min，用0.22μm 有机过滤膜过滤并取滤液，于-25℃下冷冻10hr，即得；按质量计，沉淀和水的用量比为1:
2.4。
3.根据权利要求1或2所述的一种低分子多肽的制备方法，其特征在于，步骤（3）的每步中添加的乙醇和水均经过预热处理，预热的温度与其搅拌反应的温度一致。
一种低分子多肽的制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种低分子多肽的制备方法。
背景技术
[0002]胎盘富含孕育生命所必需的所有原始生命物质。目前，胎盘尤其是羊胎盘的药用和保健功效越来越受到人们的关注。就羊胎盘而言，其中含有丰富的蛋白质、17种氨基酸、14种微量元素、磷脂、脂多糖、维生素，还有与免疫功能和机体正常运转相关的多种活性多肽，其营养成分天然搭配的比例最接近人体的需求。《本草纲目》中即对羊胎盘的功效有所记载：″羊胎，母羊腹中的胎兽，性味甘温，具有益气补虚，温中暖下，调补肾虚、羸瘦之功效″。科学家经过大量实验证实，羊胎盘还具有养血安神、丰肌泽肤、延年益寿等功效，是大补元气的滋补强壮药。综上所述，胎盘的功能特性日益为人们所认识，客观上也提出了胎盘深加工的要求。由于胎盘中含有大量人体必需的活性物质，因此，从中提取功能性的
多肽具有广阔的开发前景。
[0003]然而现有技术中制备的多肽中含有相当的高分子量多肽，不利于皮肤吸收，限制了其应用。
发明内容
[0004]本发明的目的是提供一种低分子多肽的制备方法，来获得低分子多肽。
[0005]本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
[0006]一种低分子多肽的制备方法，包括以下步骤：
[0007](1)前处理
[0008]取新鲜羊胎盘，去除筋膜和血管，水洗，于室温下晾1～2hr；剪切成块，于-30～-20℃下冷冻8～12hr，于0～10℃下超微粉碎得到浆液；
[0009](2)酶解
[0010]搅拌条件下，向浆液中加入水，加入0.8～1.1mol/l的碳酸钠水溶液调节体系pH至7.7～7.8，加入胰蛋白酶和Protamex，升温至40～43℃进行反应，至酶解完全，用滤纸过滤后取滤液，即为酶解液；
[0011]按质量计，浆液、水、胰蛋白酶和Protamex的用量比为1∶4～6∶0.2～0.4∶0.1～0.2；
[0012](3)提取
[0013]向酶解液中加入乙醇、氯化钠和硅藻土，加入0.8～1.1mol/l的盐酸水溶液调节体系pH至6.4～6.6，在10～15℃下搅拌30～45min，在10～15℃下以1.6～2.0Kg/cm2的压力进行压滤，取上清液，即为粗提液；按质量计，酶解液、乙醇、氯化钠和硅藻土的用量比为1∶0.08～0.12∶0.04～0.06∶0.05～0.08；
[0014]向粗提液中加入乙醇、氯化钠、硅藻土和麸皮，加入0.8～1.1mol/1的盐酸水溶液调节体系pH至6.8～7.0，在3～5℃下搅拌30～45min，在3～5℃下以1.6～2.0Kg/cm2的压力
进行压滤，取沉淀；按质量计，粗提液、乙醇、氯化钠、硅藻土和麸皮的用量比为1∶0.08～0.12∶0.02～0.04∶0.03～0.05∶0.04～0.06；
[0015]取沉淀于-30～-20℃下冷冻8～12hr，于0～10℃下超微粉碎，加入水，在10～15℃下搅拌30～45min，用0.45μm或0.22μm有机过滤膜过滤并取滤液，于-30～-20℃下冷冻8～12hr，即得；按质量计，沉淀和水的用量比为1∶2～3。
[0016]进一步优选为：包括以下步骤：
[0017](1)前处理
[0018]取新鲜羊胎盘，去除筋膜和血管，水洗，于室温下晾1.5hr；剪切成块，于-25℃下冷冻10hr，于4℃下超微粉碎得到浆液；
[0019](2)酶解
[0020]搅拌条件下，向浆液中加入水，加入1.0mol/l的碳酸钠水溶液调节体系pH至7.8，加入胰蛋白酶和Protamex，升温至42℃进行反应，至酶解完全，用滤纸过滤后取滤液，即为酶解液；
[0021]按质量计，浆液、水、胰蛋白酶和Protamex的用量比为1∶5∶0.3∶0.15；
[0022](3)提取
[0023]向酶解液中加入乙醇、氯化钠和硅藻土，加入1.0mol/l的盐酸水溶液调节体系pH 至6.5，在12℃下搅拌40min，在12℃下以1.8Kg/cm2的压力进行压滤，取上清液，即为粗提液；按质量计，酶解液、乙醇、氯化钠和硅藻土的用量比为1∶0.10∶0.05∶0.06；
[0024]向粗提液中加入乙醇、氯化钠、硅藻土和麸皮，加入1.0mol/l的盐酸水溶液调节体系pH至6.9，在4℃下搅拌40min，在4℃下以1.8Kg/cm2的压力进行压滤，取沉淀；按质量计，粗提液、乙醇、氯化钠、硅藻土和麸皮的用量比为1∶0.10∶0.03∶0.04∶0.05；
[0025]取沉淀于-25℃下冷冻10hr，于4℃下超微粉碎，加入水，在12℃下搅拌40min，用0.22μm有机过滤膜过滤并取滤液，于-25℃下冷冻10hr，即得；按质量计，沉淀和水的用量比为1∶2.4。
[0026]进一步优选为：步骤(3)的每步中添加的乙醇和水均经过预热处理，预热的温度与其搅拌反应的温度一致。
[0027]综上所述，本发明具有以下有益效果：通过化学生物的方法来获得低分子多肽，低分子多肽含量较高，有利于吸收，提高其在护肤品中的吸收和效果；相比现有技术中应用膜或谱等方法来分离获得，本申请的方法成本更低，减少物质在膜或谱等上的吸附造成设备需要经常更换的可能性。
具体实施方式
[0028]本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的保护范围内都受到专利法的保护。
[0029]实施例1：一种低分子多肽的制备方法，包括以下步骤：
[0030](1)前处理
[0031]取新鲜羊胎盘，去除筋膜和血管，水洗，于室温下晾1.5hr；剪切成块，于-25℃下冷冻10hr，于4℃下超微粉碎得到浆液；
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