(19)中华人民共和国国家知识产权局
| (12)发明专利说明书 | |
| (10)申请公布号 CN 1250669 A (43)申请公布日 2000.04.19 |
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(21)申请号 CN99119245.1
(22)申请日 1999.08.27
(71)申请人 霍夫曼-拉罗奇有限公司
地址 瑞士巴塞尔
(72)发明人 阿波隆·帕帕季米特里乌
(74)专利代理机构 中科专利商标代理有限责任公司
代理人 严舫
(51)Int.CI
A61K47/48
A61K38/04
A61K38/16
(54)发明名称
(57)摘要
一种水溶性组合物,它含有一种选自刺猬蛋白质,骨形态发生蛋白质,生长因子,红细胞生成素,血小板生成素,粒细胞集落刺激因子,白细胞介素和干扰素的离子药学效应多肽的复合体,其特征在于,所说的组合物还含有一种亲水亲油性化合物,所说的多肽和所说的亲水亲油性化合物形成一种离子复合体,其中该复合体的形成不提高所说的多肽的溶解性。 | |
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法律状态
权 利 要 求 说 明 书
1.一种水溶性组合物，它含有一种选自下组的药学效应多肽：刺猬蛋白质，骨形态发生蛋白质，生长因子，红细胞生成素，血小板生成素，粒细胞集落刺激因子，白细胞介素和干扰素，其特征在于，所说的组合物还含有一种亲水亲油性化合物，所说的多肽和所说的亲水亲油性化合物形成一种离子复合体，其中该复合体的形成不提高所说的多肽的溶解性。
2.按照权利要求1所述的组合物，其特征在于它是冷冻干燥形式的。
3.按照权利要求2所述的组合物，其特征在于该复合体被固定在一个生物相容性载体上。
4.按照权利要求3所述的组合物，其特征在于该复合体是以溶解的和沉淀的形式的混合物存在的。
5.按照权利要求1至4中任意一项所述的组合物，其特征在于，所说的组合物在水溶液中的pH值与所说的多肽和所说的表面活性剂的pK值相差至少半个pH单位。
6.按照权利要求1至5中任意一项所述的组合物，其特征在于，所说的多肽是刺猬蛋白质。
7.按照权利要求1至6中任意一项所述的组合物，其特征在于，该亲水亲油性化合物是脱氧胆酸盐。
8.权利要求1至7中任意一项所述的组合物在人体中在刺猬蛋白质的缓释或局部施用中的应用。
9.用于生产在人体中局部施用的药物组合物的方法，其中，将选自刺猬蛋白质，骨形态发生蛋白质，生长因子，红细胞生成素，血小板生成素，粒细胞集落刺激因子，白细胞介素和干扰素的药学效应多肽与一种亲水亲油性化合物通过离子相互作用形成的复合体用作必须组分，其中，辅助化合物存在的浓度不提高所说的多肽的水溶性。
10.按照权利要求9所述的方法，其特征在于，该复合体被固定在一种生物相容性载体上。
11.一种提高由细胞表面受体识别和结合的多肽的活性的方法，其特征在于在所说的多肽和一种亲水亲油性化合物之间形成一种离子复合体。
说 明 书
本发明涉及一种多肽的组合物，它通过与细胞膜上的胞外受体相互作用而具有生物学效应，所说的多肽是与一种亲水亲油化合物形成的离子复合体的形式存在于所说的组合物中。本发明还涉及所说的组合物的应用。
亲水亲油性化合物作为药物传送系统的应用是现有技术中已知的(美国专利US-P5650393，US-P5688761，US-P5665328，US-P5124081，US-P5109038)。在表面活性物质和药物制剂之间的胶粒形式的复合物的形成也是已知的，例如用于改善活性制剂跨皮肤和跨膜的渗透(Tomlinson和Davis，J.Colloid.Interf.，Sci.74(1980)349)。药物制剂的非离子化的形式与其离子化的形式相比通常具有较好的通过生物膜的传送也是已知的(Cools和Jansen，J.Pharm.Pharmacol.35(1983)689-691)。也已知在生理pH值时以多重离子化的形式存在的肽对传送到作用位点(药物传送)不是最适的，这是因为带电分子，特别是多肽类，在脂肪中具
有较低的溶解性(Hirai等，Int.J.Pharm.7(1991)317-325)。从Okada等，J.Pharm.Sci.72(1993)75-78可知，将亲脂性反粒子结合在药物制剂的离子部分可该善与生物膜的相互作用，从而便于蛋白质穿过小肠膜的传送。例如，Hazzenga和Berner在J.Controlled Release 16(1991)77-88中描述了一种用于两性离子活性制剂跨皮肤运输的改良的方法。
其它的用于改善药物制剂与生物膜相互作用的方法描述于例如，Lee等，Critical Rev.Therp.Drug Carrier Systems 8(1991)91-192，Morimoto等，Arch.Int.Pharmacodyn.302(1989)18-26和Aungst，Int.J.Pharm.33(1986)225-234。但在所有的这些方法中，其目的是提高活性制剂的疏水性，从而促进其通过生物膜例如皮肤，以及将所说制剂向细胞中的传送。为此使用了表面活性物质，其浓度高于临界胶粒浓度(CMC，Womack等，Biochim.Biophys.Acta 733(1983)210)。这些方法的一个缺点是所使用的高浓度的表面活性物质对细胞膜具有很大的影响，可能将其破坏。
从WO94/08599可知，通过加入适量的阴离子去垢剂形成沉淀，分离出沉淀并将其再溶解于有机溶剂中，可制备出活性制剂的均一溶液用于生产载体结合的活性制剂。然后就可以用这
一含有阴离子去垢剂和活性制剂之间形成的复合体的均一溶液在一种固体基质中包埋或分散该活性制剂。此外，WO94/08599提到可形成蛋白质和阴离子去垢剂的复合体，可从中释放出活性制剂以控制蛋白质的释放。
已知蛋白质的活性可通过将其与疏水性化合物例如脂肪酸或胆固醇共价结合而得到改善。但是，这一方法非常复杂，并且由于偶联的化学反应而产生不均一的产物(例如，Ekrami，H.M.等，FEBS Letters371(1995)283-286，Peinski，R.B.等，J.Biol.Chem.273(1998)14037-14045)。
本发明的目的是提供具有药学效果的多肽的组合物，它可改善其中含有的多肽的活性。
本发明的目的由一种组合物达到，该组合物最好为一种药物组合物，它含有一种选自下组的具有药学效果的多肽：刺猬蛋白质(hedgehogprotein)，骨形态发生蛋白质，生长因子，红细胞生成素，血小板生成素，粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，白细胞介素，干扰素，其特征在于，所说的组合物还含有亲水亲油性化合物，所说的多肽和所说的亲水亲油性化合物形成一种离子复合体，其中该复合体的形成不提高所说的多肽的溶解性。该组合物不含有任何一种有机溶剂。为了便于贮存，该组合物可被冷冻干燥。
在本发明中，该多肽和该亲水亲油性化合物可分别以所使用的浓度溶解于水中，最好为缓冲液中，并且仅是这两种物质的组合通过离子的相互作用导致复合体的形成，使该多肽疏水化，从而降低或者至少不改善其水溶性。令人惊奇地发现，这种多肽的活性可通过这种方式得到显著地改善。
根据本发明，该亲水亲油性化合物和该多肽的用量和比率的选择最好使该含有离子复合体的水性组合物为透明溶液。如果多肽和亲水亲油性化合物之间复合体的形成导致混浊，并且该组合物被直接用作给患者施用的溶液时，则将该溶液进行过滤，得到没有混浊的溶液。如果该组合物在给患者使用前被固定在一种载体上，则不需要避免其混浊性。
该具有药学活性的多肽是一种可以离子的形式存在的多肽，并且它是通过细胞表面受体(胞外受体)的识别和结合来呈现其生物活性的。这些多肽为生长因子(例如，NGF，TGF-β，FGF，GDF，胰岛素类生长因子)，红细胞生成素，血小板生成素，G-CSF，诸如干扰素-α2b的干扰素，诸如白细胞介素-2和白细胞介素-12的白细胞介素，诸如BMP-2的骨形态发生蛋白质，或刺猬蛋白质，例如，sonic，印度(indian)，或沙漠(desert)刺猬蛋白质。特别优选的是刺猬蛋白质。最好使用在按照本发明的复合体中所具有的活性(效果和/或体外蛋白
质活性)与非复合体的形式相比最好被提高10倍或者以上的多肽。该多肽的离子形式可通过将其存在于一种与其pK值相比至少相差0.5pH单位的环境中来得到。
本发明的亲水亲油性化合物应被理解为一种阴离子，两性离子或阳离子型疏水表面活性剂，脂肪酸，烷基磺酸盐或脂类。优选的阴离子表面活性剂为阴离子型去垢剂，例如，类固醇表面活性剂如脱氧胆酸盐，胆酸盐，牛磺胆酸盐，牛磺脱氧胆酸盐，脱氢胆酸盐(可用于阳离子型多肽)；优选的两离子型表面活性剂为CHAPS(3[(3-胆酸酰胺丙基)二甲基氨]-1-丙烷磺酸盐)和Zwittergent(R)(N-十二烷基-N，N-二甲基-3-氨-1-丙烷磺酸盐)；优选的阳离子型去垢剂为十六烷基三甲基铵溴化物或者十二烷基铵氯化物(可用于阴离子型多肽)；优选的脂肪酸为诸如棕榈酸的脂肪酸(可用于阳离子型多肽)。优选的烷基硫酸盐为烷基磺酸盐，例如癸基烷基磺酸盐(可用于阳离子型多肽)；优选的脂类为诸如磷脂酰基丝氨酸(可用于阴离子型多肽)和磷脂酸(可用于阳离子型多肽)的脂类。
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