病情发展，还可改善预后，避免疾病反复。
4参考文献
1He S,Cuuhua L,Jian Ld Theranestic effeces cO esdovascular mtemes-tionai therapy on acute iscUemic cereSrai strone and its effect on he-morUeology and mUammatom factoo cO patients〔J〕.HeSei MeS J, 2519；81(12)：14-5.
六价铬
0姜一，沈红健，陈蕾，等•静脉溶栓或桥接对大动脉闭塞急性轻型缺血性脑卒中患者的疗效和安全性〔〕〕•第二军医大学学报,2513；52(l1)KP,
9中华医学会神经病学分会，中华医学会神经病学分会脑血管病学组•中国急性缺血性脑卒中诊治指南2014〔J〕.中华神经科杂志,2515；2C(7)
4热娜•阿不都萨拉木，艾克拜尔，李文超，等•缺血性脑卒中患者不同闭塞血管静脉溶栓后再通效果比较〔〕•中国医药521742
(6)：861G.
5刘新志，赵恒，罗谊，等•DSA诊断及介入缺血性脑卒中患者颈部血管狭窄的疗效及生存质量〔〕•昆明医科大学学报5213；
39(10)：121-5.
6付华文，李光建•数字减影血管造影联合神经介入溶栓术缺血性脑血管疾病临床效果观察〔〕•实用医院临床杂志5519;89
(6)：175G2.7Thoren M,Dixit A,EscuUem-MaT^dez I,at a.Effect cO recanalization on cereSrai eSema in iscUemic strone treateS with thrombolysis and/os esdovascular therany[J., Strone,2019；51(1)：42-5.
8陆小波，肖国栋，肖章红，等.神经介入取栓术脑梗死的疗效研究神经损伤与功能重建,2219；14(12)：523G. 2谢克航，周武8神经影像学指导下醒后卒中的静脉溶栓国际脑血管病杂志,2219；27(12)：755-9.
10项薇，邓镇.内皮微RNA与缺血性脑卒中的研究进展〔J〕.医学综述,2017；23(10)：1888-93.
1吴云涛，宋路，阮春雨，等8长时和短时收缩压变异性指标与老年人大血管功能及结构的相关性中华高血压杂志,2016；
：36G38
1赵婉婷，刘洵，庞家祺，等.FATmsx运动对肥胖老年人体质及心血管机能影响的研究〔J〕.体育科学,2016；36(12)：48-528
1曾海城，李斌，肖旋，等.老年高血压患者高尿酸血症对内皮功能损伤及心脑血管事件发生的影响重庆医学,2012；45
(35):4977392
1袁方，李伟，刘丙丽，等.醒脑静联合脑蛋白水解物脑卒中的疗效及其对患者血管内皮依赖性舒张功能的影响海南医学,2017；27(8)：1223-98
[2020-93-15修回〕
(编辑滕欣航)
-代谢性疾病•
ARL15基因多态性与延边地区2型糖尿病及糖尿病肾病的相关性 张洪江2王伟杰2邵薇2涂影叶8杜飞2杨康鹃8
(1延边大学附属医院，吉林延吉133002；2珲春市中医院;3延边大学医学院)
〔摘要〕目的分析ADP-核糖基化样因子(ARL15)基因多态性与延边地区朝鲜族和汉族2型糖尿病(T2DM)及糖尿病肾病(DN)的关联及ARL15与脂联素(PA)及其他临床实验室指标的相关性。方法设计病例对照实验，纳入葡萄糖耐量正常对照组(NGT组)268例,T2DM组393例，DN组94例，选取4个ARL15基因SNP，通过PCR-PDR进行基因分型。使用SHEhs线上软件分析ARL15基因SNP与T2DM及DN的关联。结果在隐性遗传模型中位点CC基因型与T2DM 患者发生DN的风险相关(P=4.420)。单倍型CCGA和CTAG与高风险DN相关(P<4.45)。在DN患者中，ARL15与PA有相关性(=4.372,P=4.414)。结论ARL15与PA相关，其SNP位点rs3594)基因型CC与高风险DN相关。 〔关键词〕ARL15；2型糖尿病；糖尿病肾病；单核苷酸多态性
〔中图分类号〕R557.2〔文献标识码〕A〔文章编号〕105-2202(2021)06-11197；do^：1.3962/j3ssI1.105P201202206.01
Association between ARL10gene SNPt and type0diabetet and diabetic nephropathy in Yanbian aree Koreen and Han population
ZHANG Hong-Jiaiig,WANG Wei-Jie,SHAO Wei,et ah丁俊发
Affiliated Hospital of Yanbian Universiti,Yanji103005,Jilia,China
基金项目：国家自然科学基金资助项目(31062154.81472158)；吉林省卫生与健康技术创新项目(2020J005)
通信作者：杨康鹃(1290-)，女，博士，教授，博士生导师，主要从事医学遗传学研究。
杜飞(1999-)，女，博士，主治医师，主要从事糖尿病大血管病变研究。
第一作者：张洪江(1998-)，男，硕士，副主任技师，主要从事生物化学及分子生物学研究。
[Abstract]Objective To analyze the association of ARL13gele polymorphism with type l dianetes mellitus(T2DM)and di-81X0heph/pathy(DN)of R Yanhiah area Koreai and Hari populatiou,and to explore the correlation betweel ARL13and plasma anipouectid(PA)and otUer clinicai lahoratora iniicators.Methods A case-coutTV expeTmeni was desiahen,ihcluUina NGT grouu (268cases),T2DM gTwp(393cases),and DN grouu(^9cases).Four ARL13geie SNPs were selected and geiotya^l by PCR-LDR.SHEsis o/R c software was used to analyze the association of ARL13geie SNP with T2DM and DN.Results Id the recessive geieUe moVei,the CC genotype of/35941was associated with an increased Tsh of DN io T2DM patients(P二4.426).Hapytypes of CCGA and CTAG were asso
ciated with increased Tsh DN(Pv9.43).In DN patients,ARL13was positively correlated with PA(r= 9.372,P=9,95)/Conclusiont ARL13is related to PA,and its polymorphism SNP locas/35941geiotype CC is related to DN.
【Key words]ARL13；Type2dianetes；Dianetic hephropathp；Sin/le/ucleotide polymorphism
糖尿病肾病（DN）是2型糖尿病（T2DM）最常见的微血管病变，我国T2DM患病人数居全球首位, DN的患病率也逐年上升。DN发病机制也在广泛研究中，但具体发病机制尚不明确。目前普遍认为DN的发病机制可能与遗传因素，如微小RNA（miR-NA）〔〕、DNA甲基化⑵、代谢紊乱〔脂联素（PA）、多元醇通路⑶、蛋白激酶c+6〕等〕、血流动力学改变、炎症反应〔，〕、氧化应激（活性氧类、内质网应激）等因素有关。因此，通过研究DN的发病机制，了解疾病的发生、发展，对疾病的早期干预及预防都具有重大意义。
PA与DN关系密切，研究表明在终末期肾病患者中，无论原发病是否为T2DM，均可引起PA水平升高〔3"4〕。另外，有研究表明〔3〕，早期DN可能与和肽素、PA水平升高有关。Richards等〔5〕在2209年全基因组水平上进行的一项荟萃分析发现,ADP-核糖基化样因子（ARL15）基因rs4311394位点的突变等位基因G与T2DM相关，且G等位基因与低水平的血浆脂联素PA水平相关。Zhag等〔7〕发现胰岛素刺激可以上调ARL5表达；当ARL5过表达可以增强成C2C10肌管中胰岛素信号通路关键分子
胰岛素受体（IR）/胰岛素受体底物（IRS）1/蛋白激酶B（AKT）的磷酸化，从而调节胰岛素信号传导途径的磷酸化失调，抑制胰岛素抵抗；因此提出ARL15是胰岛素敏感的效应分子。另外有研究发现〔3〕ARL15是T2DM的危险因素，与总胆固醇（TC）、PA、胰岛素均具有相关性,ARL15通过增加AKT和AMPK下游代谢通路促使糖原、脂肪的合成。全基因组关联分析（GWAS）揭示了ARL5多态性与T2DM的关联，以微血管病变为特征的DN 是否与ARL15多态性相关仍有待于进一步研究。目前国内外尚缺乏ARL15基因多态性与DN相关性的研究，本研究将通过病例对照关联分析对ARL15基因多态性位点rs35941、rs26770、rs4311394、rs/45917与延边地区朝鲜族和汉族T2DM及DN人进行相关性分析。通过连锁不平衡（LD）及单倍型分析，探讨ARL5基因多态性位点联合作用与ARL15、PA、胰岛素等相关性，另外分析ARL5与临床实验室指标、PA、胰岛素的相关性及对单纯T2DM、DN的累加效应，为T2DM及其并发症DN的预防和靶向提供遗传学数据。
1资料与方法
1.1研究对象选取2010-2210年在延边大学附属医院及珲春市中医院单位体检和就诊患者771例。设计对照研究，将研究对象分为9组：葡萄糖耐量正常对照组（NGT组228例）朝鲜族111例，汉族117例；单纯糖尿病组（T2DM组393例）朝鲜族188例，汉族225例；糖尿病肾病组（DN90例）朝鲜族35例，汉族55例，所有参与者对研究内容知情同意。诊断标准参考糖尿病诊断标准（1999年WHO标准）及2210年美国肾脏病基金会对肾脏疾病控制的临床实践指南（NKF-KDOQI）颁布的诊断标准。
1.2SNP位点的选取通过NCBI SNP数据库（hu tps：//hV v/snp/）筛选ARL5基因SNP，其最小等位基因频率（MAF）在1000Ga-nomes研究东亚人中大于0.05o本研究纳入4个ARL15基因SNP：rs35941、rs26770、rs43n394、rsy450176。
1.2实验室指标检测与基因组DNA的提取收集所有参与者性别、年龄、血压、体重指数（BMI）。清晨抽取空腹外周静脉血于2mi置于促凝管中, 3000r/min离心10min并分离血清，采用实验室生化常规仪器检测空腹血糖（FPG）、高密度脂蛋白胆固醇（H D L-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、TC、三酰甘油（TG）。采取0.6mi全血于二氨基联苯胺（EDTA）-N p2抗凝管中，离心后将样本保存于-80O C 环境，所有样本待同一时间提取基因组DNA o使用长春百奥生物技术有限公司AxyGena小量全血基因组DNA提取试剂盒，参照说明书提取全血DNA o 1.2引物的设计与合成登录NCBI查询ARL5基因序列，利用PTmerO软件辅助设计引物序列（表5，引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成。
1.2PCR-CDR基因分型（1）在5以体系中进
行多重PCR 扩增反应，其中样品DNA I 〜2 ^i,9x PCR mix 7. 5小，混合引物2讪，双蒸水补至2讪。
多重 PCR 反应参数:94°C 2 s,55°C 2 s,72o C 34 s,45个循环。（2）在7讪体系中进行PCR 纯
化，其中 PCR 产物 3 |±1, Exol 2. 2 ,Fast/P 2. 8 ,
Exol 缓冲液2.3 J，双蒸水补至7 J；反应参数: 37°C 2 mix 22°C 2 mix 。（3）延伸反应，其中 PCR 产物2 J,Suapshgt Mix 试剂-J ，延伸引物-J ，双 蒸水补至6 J；反应参数：96°C 2 s,52C 9 s,60°C
32 s,34个循环。
1・6统计学处理 运用SHECs 在线软件进行Han
dy-Weinkery 遗传平衡检验、等位基因和基因型频率
分析、LD 分析及单倍型分析。等位基因和基因型频 率分析使用尢2检验计算P 值和风险值（OR ）。通过
LD 分析，计算D 値和T 值。D~2,n 二2时，表示完 全连锁平衡;DJ-,r 2 = -时，表示完全连锁不平衡 状态；I D 「m 2.3时表示存在强连锁不平衡。使用
SPSS25. 0软件进行t 检验。
表1 SNP 位点及引物
SNP ID （n 编号）
位置等位基因（R 〉A ）a
频率
引物PCR 产物长度
微电子学与计算机rs3594I exou-T 〉C 0.719上游:CCCTGCACCTACCAGATAA 74 —
rs26777intros -T 〉C 2. 335下游:CTTTAGGCTGCCGGATGT 下游:TTAACACAAGGCAGAATGG 89 —
rs4311394intros -A 〉G 2. 459下游:GTACTCAAGTCAAGGAAGC 上游:AAGAGGGGTTATAGCTGAAGT 9-—
rs645226
intros -
G>A
2. 458
下游:GACTAGCACATTGTAGGC 下游:AACAACTCTTCATCTACTCCACAG
392 —
下游:GTTCCTCTTCTCAATTCTCCACTA
R ：参考基因位点;A ：突变基因位点
稀疏表示
2 结 果
2・1 ARL2基因分型结果 根据NGT 组4个SNP
杜华瑾n3594I 、n2622、n431 294 和 rsP454166 的基因型
进行HkOy-WemUera 遗传平衡检验,4个SNP 的基
cpld因型频率在NTG 组中符合遗传平衡（P 〉4.25）。见 图-〜4。
S1-CC （产物G G ）
32
34
36
38
S1-CC （产物A G ）10 000
8 000 4 000 2 000
图 1 ARL15 基因 rs26772G/G, A/G,A/A 位点测序
图 2 ARL15 基因 r2311394C/C,C/T,T/T 位点测序
6 000 L
4 000
nr 6 000 4 000
m
! A 2 000
2 000
\
!
\ /V \
°
一
卜厶---
&
°!
---
10 0005 000
10 0008 000
6 0004 0002 000
15 00010 0008 000
6 0004 0002 000
图 9 ARL15 基因 o35941C/C , C/T ,T/T 位点测序
S3-TT （产物T T ）
图 4 ARL15 基因 06455176A/A ,A/G ,G/G 位点测序
2 2 SNPs 等位基因及基因型分布4个SNP 的等 位基因和基因型频率在延边地区朝鲜族和汉族人 之间差异无统计学意义（P 〉4.45）。将每组中朝鲜 族和汉族人视为同一体，在隐性遗传模型中，携
带m3594）位点CC 基因型频率在DN 组显著高于 T2DM 组，增加T2DM 患者发生DN 的风险（P 二
4. 420），且CC 基因型在DN 组和NGT 组也具有增 加风险的趋势（P 二4. 457），但m3594）等位基因频
率在DN 组与T2DM 组、NGT 组差异无统计学意义 （P 〉4.45）。其他SNP 的等位基因和基因型频率在
DN 组与T2DM 组、NGT 组间差异无统计学意义（P 〉 4.45）。见图 5、图 6o
2 2 LD 、单倍型及联合基因型分析rsHlD 与 rsy454157之间存在较强连锁不平衡（D^4. 397, T^O. 784），其他位点之间未发现有明显意义的连 锁不平衡（D ，或u 2 <4.3）。由于rsP81139与
rsy454157的等位基因和基因型频率在3组之间不 存在差异，故对4个SNP 的单倍型进行分析。见
图7o
■R/RR ・ RA "A/AA
RRR ：参考等位基因/野生纯合子;RA ：突变杂合子；A/AA ：突变等位基因/突变纯合子
图5 NGT 组汉族和朝鲜族ARL10基因SNPt
等位基因和基因型频率
s1§S§§S§§S§§s1§S§§§S§§N z N e N e N e N z N e N e N e
等位基因基因型显性模型隐性模型等位基因基因型显性模型隐性模型
rs35941rs26770
R，参考等位基因;A，突变等位基因；RR，野生纯合子；RA，突变杂合子；AA，突变纯合子
图9ARL10等位基因、基因型分析
位点间LD分析数值以DF2表示图7SNP位点LD分析
ARL5基因4个SNP仅rs05541位点CC基因型在隐性遗传模型中显示与DN相关。考虑多基因遗传病具有微效基因累加效应特点，对单倍型和联合基因型与疾病进行关联分析。在单倍型分析中，仅对等位基因频率大于9.91的单倍型进行分析，结果显示，相对于NGT组和T2DM组，单倍型CCGA (/35941Ns26774Ns4311394Ns6454176/与高风险DN相关(P<4.45)。相对于T2DM组，单倍型CTAG(/35941ns26力4Ns4311394Ns645456/与高风险DN相关(Pv4.45)。见表4
o
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