[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 101402985A [43]公开日2009年4月8日
[21]申请号200810228812.6[22]申请日2008.11.17
[21]申请号200810228812.6
[71]申请人珍奥集团股份有限公司
地址116620辽宁省大连市双D港生命一路88号
[72]发明人乔宾福 谢赐福 黄国新 俞慧君 方文增
[74]专利代理机构大连非凡专利事务所代理人闪红霞
[51]Int.CI.C12P 19/34 (2006.01)C12R 1/865 (2006.01)
权利要求书 2 页 说明书 4 页
[54]发明名称
[57]摘要
取得高核糖核酸含量(16％)的菌体，经高温食盐法
提取核糖核酸，核糖核酸的总收率大于10％(W/W)，
用棉饼过滤机过滤以滤除胶体蛋白等杂质，克服了
现有等电点沉淀法、凝聚剂络合法、超滤过滤法等
许多过滤方法的不足，使制品中核糖核酸的含量大
于90％，具有操作简单、所产核糖核酸纯度高、产
量大，适合于大规模生产等特点。
200810228812.6权 利 要 求 书第1/2页
1.一种核糖核酸的工业化生产方法，其特征在于按以下步骤进行：
a.对酿酒酵母Y37菌种进行培养；
b.将所培养的酿酒酵母Y37种子接入发酵罐进行连续发酵，发酵液经离心得菌体；
c.将所得菌体用高温食盐法抽提核酸，离心取上清液；
d.用棉饼过滤法过滤上清液，得滤液；
e.使滤液中核酸析出沉淀，并对沉淀物洗涤、过滤、干燥。
2.根据权利要求1所述的核糖核酸的工业化生产方法，其特征在于：所述的a步骤是将酿酒酵母Y37培养
在麦芽汁固体斜面培养基上，29～31℃，生长31～33小时，接入装有种子培养基的培养瓶中，29～31℃摇瓶培养19～21小时，再接入装有种子培养基的种子罐中，控制温度33℃～34℃、PH
3.9±0.1，鼓风培养，直至种子干菌浓度达到0.5％～1％。
3.根据权利要求2所述的核糖核酸的工业化生产方法，其特征在于：所述b步骤是将发酵培养基装在发酵罐中，起始的装液系数为0.4～0.42，接种量14～15％，控制温度34±1℃，PH值3.9±0.1，当干菌浓度达到1.5％后进入连续发酵。
4.根据权利要求2或3所述的核糖核酸的工业化生产方法，其特征在于：所述的种子和发酵培养基的组分及每升所含重量如下：清糖水溶液中的还原糖30～40克、(NH4)2SO4 1.5～2.5克、MgSO4·7H2O 1～2克、FeSO4 0.05～0.10克、磷酸1～2克，所述清糖水溶液是将甘蔗糖蜜用水稀释1～2倍，加热至95～100℃保温30～35分钟，吹风鼓泡2～4小时，自然沉降16～18小时后的清液，是种子和发酵培养基的碳源。
5.根据权利要求4所述的核糖核酸的工业化生产方法，其特征在于：所述c步骤是将b步骤所得菌体在氯化钠溶液中，90±2℃的温度下抽提2～3小时，折干菌体及氯化钠的重量与水溶液的体积比分别为7～10％、8～10％，将抽提液离心分离脱核酵母，取上清液。
6.根据权利要求5所述的核糖核酸的工业化生产方法，其特征在于：所述d步骤是将过滤棉洗净后，经压棉机压干成型，装入板框过滤机，c步骤所得上清液经棉饼过滤机过滤。
200810228812.6权 利 要 求 书 第2/2页
7.根据权利要求6所述的核糖核酸的工业化生产方法，其特征在于：所述e步骤是将滤后清液冷却至8～10℃，用食用磷酸调节PH至2.0～2.5，析出沉淀，用食用酒精洗涤沉淀物并过滤后进入干燥机以80±5℃的温度干燥。
8.根据权利要求7所述的核糖核酸的工业化生产方法，其特征在于：将所得干燥物磨粉并取80目标准筛的筛下物。
200810228812.6说 明 书第1/4页
核糖核酸的工业化生产方法
技术领域：
本发明涉及一种核糖核酸(R N A)的生产方法，尤其是一种操作简单、所产核糖核酸纯度高、产量大，适合于大规模生产且安全可靠的核糖核酸的工业化生产方法。
背景技术：
核酸，学术定义上包括核糖核酸(R N A)和脱氧核糖核酸(D N A)，是生物遗传功能的物质基础，因此地球上的所有生物都含有核酸，核酸制品也已成为食品、医药等领域应用的高营养物质，因此，人们正着手研究大规模生产核酸的方法。
1.为了改造物种，创造一类更有利于人类生存的生物体，基因工程在全世界受到科学家的重视，基因工程的核心技术是遗传物质核酸的重组、转化、转导及其排列顺序的测定和结构改变，许多工作离不开核酸抽提、纯化，但这方面的研究只是在实验室里精细地操作，其核酸只能以克来计，不能实现核酸的大规模生产。
2.草本和木本植物虽然在地球上的数量最大，但核酸含量很低，不能用作核酸提取的原料。
3.微生物类中，有的细菌和病毒核酸含量虽然高达50％以上，但是要想大量获得这类细菌或病毒是非常困难的，经济成本得不偿失。 虽然已有报道可培养一种细菌，能在胞外产生脱氧核糖核酸或核糖核酸，但其最高产率也只能达到5g/L，远不能达到工业化生产的目标。 目前，国内外大部分都是使用假丝酵母(Candida)作为大规模生产核酸的菌株，但是所生产的核酸制品未见在食品上安全使用的报道。
我国卫生部所提供的可用于保健食品的真菌目录，首选是酿酒酵母，而酿酒酵母确是人类最早利用的微
生物之一，它生长繁殖快，容易进行大规模培养，不仅富含核糖核酸(一般含核酸6～8％)，而且还含有较高的蛋白质、维生素、微量元素等生理结构物质，提取核酸后的副产品脱核酵母菌体回收率可达50％以上，蛋白质含量也达到50％左右，是一种高蛋白饲料。目前，国内有以在啤
200810228812.6说 明 书 第2/4页酒生产过程中第6、7代以后的啤酒废弃酵母为原料提取核酸的，但却存在着资源分散、原料数量有限、所产核酸纯度不高的问题，因此虽然用啤酒废酵母可以提取核酸，但是仍然不能大规模生产。
酿酒酵母Y37(Saccharomyces cerevisiae)是与啤酒生产同一种属的酿酒酵母，亦是上述我国卫生部所提供的可用于保健食品的真菌之一，但是迄今为止还没有关于发酵培养酿酒酵母Y37所获得的菌体为原料，大规模生产核糖核酸的任何报道。
发明内容：
本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种操作简单、所产核糖核酸纯度高、产量大，适合于大规模生产且安全可靠的核糖核酸的工业化生产方法。
本发明的技术解决方案是：一种核糖核酸的工业化生产方法，其特征在于按以下步骤进行：
a.对酿酒酵母Y37菌种进行培养；
b.将所培养的酿酒酵母Y37种子接入发酵罐进行连续发酵，发酵液经离心得菌体；
c.将所得菌体用高温食盐法抽提核酸，离心取上清液；
d.用棉饼过滤法过滤上清液，得滤液；
e.使滤液中核酸析出沉淀，并对沉淀物洗涤、过滤、干燥。 所述的a步骤是将酿酒酵母Y37培养在麦芽汁固体斜面培养基上，29～31℃，生长31～33小时，接入装有种子培养基的培养瓶中，29～31℃摇瓶培养19～21小时，再接入装有种子培养基的种子罐中，控制温度33℃～34℃、PH3.9±0.1，鼓风培养，直至种子干菌浓度达到0.5％～1％。
所述b步骤是将发酵培养基装在发酵罐中，起始的装液系数为0.4～0.42，接种量14～15％，控制温度34±1℃，PH值3.9±0.1，当干菌浓度达到1.5％后进入连续发酵。
所述的种子和发酵培养基的组分及每升所含重量如下：清糖水溶液中的还原糖30～40g、(NH4)2SO4 1.5～2.5g、MgSO4·7H2O 1～2g、FeSO4 0.05～0.10g、磷酸1～2g，所述清糖水溶液是将甘蔗糖蜜用水稀释1～2倍，加热至95～100℃保温30～35分钟，吹风鼓泡2～4小时，自然沉降16～18小时后的清液，是种子和发酵培养基的碳源。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议