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一种无缝基因克隆方法[发明专利]

专利名称：一种无缝基因克隆方法

专利类型：发明专利

发明人：毕延震，郑新民，乔宪凤，刘西梅，周荆荣，华文君，李莉，肖红卫，张立苹，华再东，魏庆信

申请号：CN201010582369.X

申请日：20101210

公开号：CN102080075A

公开日：

20110601

专利内容由知识产权出版社提供

摘要：本发明公开了一种不含有人工碱基的无缝基因克隆方法，步骤有:i)根据目的基因和目标载体的序列，设计、合成嵌合体引物；ii)实施一步二元式搭桥耦联长距离PCR，获得融合线性片段；iii)DpnI 消化PCR产物，去除带甲基化的模板质粒DNA;iv)转化大肠杆菌菌株DH5α；v)挑取单克隆菌落测序鉴定；vi)酶切确认重组质粒的整合情况。该方法不需要特殊的限制性内切酶和连接酶以及碱性磷酸酶，而且可以将任意目的基因融入任意目标载体的任意位置。该方法原理简单，操作简便，位点精确可控，阳性率高，适用范围广。

申请人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所

地址：430064 湖北省武汉市洪山区南湖瑶苑特1号

国籍：CN

代理机构：武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙)

代理人：张火春

本文发布于:2024-09-20 15:29:04，感谢您对本站的认可！

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