(10)申请公布号 CN 102721731 A
(43)申请公布日 2012.10.10C N 102721731 A *CN102721731A*
(21)申请号 201210236525.6
(22)申请日 2012.07.10
G01N 27/447(2006.01)
G01N 21/33(2006.01)
G01N 1/28(2006.01)
(71)申请人山东省农业科学院中心实验室
地址250100 山东省济南市历城区工业北路
202号
(72)发明人吕潇 赵善仓 邓立刚 郭长英
李增梅 苑学霞 陈业兵 毛江胜
梁京芸 谷晓红
(74)专利代理机构济南诚智商标专利事务所有
限公司 37105
代理人韩百翠
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种快速筛查饲料中是否存在
三聚氰胺脲甲醛树脂的方法。它首先称取饲料
试样于具塞塑料离心管中，加入四氢呋喃-水溶
液，涡旋振荡后再加入甲醇超声提取，
离心，将上清液过滤至另一具塞塑料离心管中，再加甲醇重
复提取1次，合并上清液，氮吹浓缩至近干后用甲
醇-水定容过滤；然后采用毛细管电泳-DAD 检
测，如果在检测波长为224nm 处具有特征吸收峰， 则确认饲料中含有三聚氰胺脲甲醛树脂。本发明
建立了一种快速筛查饲料中是否存在三聚氰胺脲
甲醛树脂的方法，对乳品质量安全起到监督作用。
(51)Int.Cl.
权利要求书1页 说明书3页 附图2页
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请
权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 2 页
1/1页
1.一种快速筛查饲料中是否存在三聚氰胺脲甲醛树脂的方法，其特征是，包括以下步骤：
（1）样品前处理
称取饲料试样于具塞塑料离心管中，加入体积比为37:13的四氢呋喃-水溶液，涡旋振荡后再加入甲醇超声提取，离心，将上清液过滤至另一具塞塑料离心管中，再加甲醇重复提取1次，合并上清液，氮吹浓缩至近干后用体积比1:1的甲醇-水定容过滤，待电泳分析；
（2）三聚氰胺脲甲醛树脂的检测
采用毛细管电泳-DAD 检测，检测波长为224nm ，分离电压+15kv ；背景电解质溶液为体积比为1：1的100mM 三氟乙酸/50%甲醇，如果毛细管电泳-DAD 检测结果在检测波长为224nm 处具有特征吸收峰，则证明饲料中含有三聚氰胺脲甲醛树脂，如果在检测波长为224nm 处不具有特征吸收峰，则证明不含有三聚氰胺脲甲醛树脂。
2.如权利要求1所述的一种快速筛查饲料中是否存在三聚氰胺脲甲醛树脂的方法，其特征是，所述步骤（1）前处理为：称取2.0g 饲料试样于50mL 具塞塑料离心管中，加入2mL 的四氢呋喃-水溶液，涡旋振荡2min 后加入8ml 甲醇在超声波清洗器中超声提取15min ，超声结束后离心5min ，将上清液过滤至另一50mL 具塞塑料离心管中，再10ml 甲醇重复提取一次，合并上清液，氮吹浓缩至近干后用甲醇-水定容至2mL ，过0.22μm 的滤膜，待电泳分析。
3.如权利要求1或2所述的一种快速筛查饲料中是否存在三聚氰胺脲甲醛树脂的方法，其特征是，所述步骤（2）为：进样：3s50mbar ，毛细管温度保持室温；检测前，依次用0.1mol/L 的NaOH 溶液、水和100mM 三氟乙酸/50%甲醇冲洗毛细管5、2、2min ，两次进样间用100mM 三氟乙酸/50%甲醇冲洗2min 。权 利 要 求 书CN 102721731 A
一种快速筛查饲料中是否存在三聚氰胺脲甲醛树脂的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种快速筛查饲料中是否存在三聚氰胺脲甲醛树脂的方法，属于检测技术领域。
背景技术
[0002] 三聚氰胺脲甲醛树脂（MUF）是在脲醛树脂的基础上通过添加三聚氰胺得到的改性树脂，又称三聚氰胺改性脲醛树脂。由于三聚氰胺甲醛树脂（MF）成本较高而脲醛树脂（UF）的耐水性不好，三聚氰胺脲甲醛树脂（MUF）的性价比高且耐水性好，目前大部分木材加工企业都已采用三聚氰胺脲甲醛树脂作为粘合剂。虽然大部分木材加工企业采用三聚氰胺脲甲醛树脂作为粘合剂，但是对其粘结机理、品质的检测，正确的使用都缺乏认识。饲料粘合剂也称赋形剂，主要用于加工颗粒饲料，可以改善粒料品质、增加生产效率及延长铸模寿命，同时可以减少饲料粉尘，特别是水产饲料需要提高其在水中不散、不沉的特性，从而减少养分流失。又因为其含氮元素的比例较高，故可能被不法商人添加到动物饲料中，用作饲料粘合剂或冒充蛋白质。三聚氰胺脲甲醛树脂不但没有任何的营养价值，甚至对动物是有害的，严重的甚至能够导致动物的死亡。三聚氰胺脲甲醛树脂在饲料的生产、包装及充当“伪蛋白”过程中扮演着重要的角，当前缺乏与之配套的检测标准，监管者对乳品质量安全的监督和管理中缺少有效手段，因此建立饲料中三聚氰胺脲甲醛树脂的检测方法势在必行。
发明内容
[0003] 本发明旨在用毛细管电泳方法快速筛查饲料中的三聚氰胺脲甲醛树脂。此方法样品前处理简单，可靠性高，可对掺杂在饲料中三聚氰胺脲甲醛树脂进行快速筛查。[0004] 本发明的技术方案是：一种快速筛查饲料中是否存在三聚氰胺脲甲醛树脂的方法，其特征是，包括以下步骤：
[0005] （1）样品前处理（提取三聚氰胺脲甲醛树脂）
[0006] 称取饲料试样于具塞塑料离心管中，加入四氢呋喃（THF）-水溶液（四氢呋喃：水=37:13(V/V)），涡旋振荡后再加入甲醇超声提取，离心，将上清液过滤至另一具塞塑料离心管中，再加甲醇重复提取1次，合并上清液，氮吹浓缩至近干后用甲醇-水（体积比1:1)定容过滤，待电泳分析；
[0007] （2）三聚氰胺脲甲醛树脂的检测
[0008] 采用毛细管电泳-DAD检测，检测波长为224nm，分离电压+15kv；背景电解质溶液为100mM三氟乙酸（TFA）/50%甲醇（50%甲醇与100mM三氟乙酸水溶液的体积比为1:1）；；如果毛细管电泳-DAD检测结果在检测波长为224nm处具有特征吸收峰，则证明饲料中含有三聚氰胺脲甲醛树脂，如果在检测波长为224nm处不具有特征吸收峰，则证明不含有三聚氰胺脲甲醛树脂。
[0009] 优选地，步骤(1)处理方式为：称取2.0g(精确至0.1g)饲料试样于50mL具塞塑料离心管中，加入2mL的四氢呋喃（THF）-水溶液，涡旋振荡2min后加入8mL甲醇在超声波
清洗器中超声提取15min，超声结束后离心5min(4000r/min)，将上清液过滤至另一50mL具塞塑料离心管中，再10mL甲醇重复提取一次，合并上清液，氮吹浓缩至近干后用甲醇-水定容至2mL。过0.22μm的滤膜，待电泳分析。
[0010] 优选地，步骤(3)分析方法：Beckman P/ACE System MDQ，二极管阵列检测器，工作站为32Karat；进样：3s50mbar，毛细管温度保持室温；实验前，依次用0.1mol/L的NaOH溶液、水和缓冲溶液（100mM三氟乙酸（TFA）/50%甲醇）冲洗毛细管5、2、2min，两次进样间用缓冲溶液冲洗2min。
[0011] 本发明的有益效果为：
[0012] （1）建立一种快速筛查饲料中是否存在三聚氰胺脲甲醛树脂的方法，对乳品质量安全起到监督作用。
[0013] （2）标样溶解采用以四氢呋喃（THF）-水(37:13，V/V)作为最佳配比溶剂，解决了三聚氰胺脲甲醛树脂难溶解的问题。
[0014] （3）采用了四氢呋喃-水，甲醇溶液作为三聚氰胺脲甲醛树脂的提取溶液，以涡旋和超声的混合提取方式，可以充分的提取样品中的树脂。
[0015] （4）毛细管电泳采用的电解质为TFA-甲醇的时候，其峰形好，基线低。
附图说明
[0016] 图1为三聚氰胺脲甲醛树脂的电泳图；其中A电解质溶液为TFA-甲醇、B电解质溶液为TFA-乙腈。
[0017] 图2为三聚氰胺脲甲醛树脂的光谱图。
具体实施方式
[0018] 以下结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0019] 1、仪器与样品
[0020] 1.1、仪器：毛细管电泳-DAD
[0021] 1.2、样品：奶牛饲料
[0022] 2、方法与结果
[0023] 2.1电解质溶液的选择
[0024] 对三聚氰胺脲甲醛树脂（MF）分别选用100mM三氟乙酸（TFA）-50%甲醇（体积比1:1）、乙酸/ACN（体积比1:1）为电解质溶液进行电泳。电泳图见图1。
[0025] 当选用TFA-甲醇的时候，峰形好，基线较低。因此选用100mM三氟乙酸（TFA）-50%甲醇作为电解质溶液。
[0026] 2.2检测波长的选择
[0027] 通过DAD二极管阵列检测器全波长扫描图2可以得知，该化合物在224nm和273.9nm处有特征吸收峰，为提高其测试灵敏度，选择224nm为检测波长。
[0028] 2.3分析筛查方法评价-回收率、精密度和精确度
[0029] 对空白奶牛饲料样品分别在20、50、100浓度水平上进行添加，每个平行重复5次，测定其回收率，回收率见表1，三聚氰胺脲甲醛树脂在饲料的添加回收率44.97%~51.22%，相对标准偏差为9.39%～11.61%。市售饲料添加三聚氰胺脲甲醛树脂的含量约为5%才能
起到赋形剂的作用，因此该方法灵敏到完全能够起到筛查作用。
[0030] 表1三聚氰胺脲甲醛树脂在饲料中的添加回收率
[0031]
[0032] 2.4分离电压是影响分离效果的重要因素，实验表明当分离电压较低时，分析物会在毛细管内扩散引起谱峰展宽，灵敏度下降。分离电压升高，分析物迁移时间缩短，但电压增大会产生大量的焦耳热使峰展宽。为了达到好的分离效果，选择15kv为工作电压。考虑到灵敏度和峰形，进样条件为3s50mbar。
[0033] 2.6实际饲料进行快速筛查并进行质谱表征识别
[0034] 随机抽取市售饲料150份（奶牛饲料、水产饲料和鸡饲料各50份），依据GB/ T20195-2006（动物饲料试样的制备）进行样品制备，采用以下步骤：
[0035] （1）称取2.0g(精确至0.1g)试样于50mL具塞塑料离心管中，加入2mL的四氢呋喃（THF）-水溶液，涡旋振荡2min后加入8ml甲醇在超声取波清洗器中超声提取15min，超声结束后离心5min(4000r/min)，将上清液过滤至另一50mL具塞塑料离心管中，再10ml甲醇重复提取一次，合并上清液，氮吹浓缩至近干后用甲醇-水定容至2mL。过0.22μm的滤膜，待电泳分析。
[0036] （2）采用毛细管电泳-DAD检测，检测波长为224nm，分离电压+15kv；背景电解质溶液为100mM三氟乙酸（TFA）/50%甲醇；Beckman P/ACE System MDQ，二极管阵列检测器，工作站为32Karat；进样：3s50mbar，毛细管温度保持室温；实验前，依次用0.1mol/L的NaOH 溶液、水和缓冲溶液（100mM三氟乙酸（TFA）/50%甲醇）冲洗毛细管5、2、2min，两次进样间用缓冲溶液冲洗2min。其中有1样品（水产饲料）在毛细管电泳-DAD检测中在检测波长为224nm处具有特征吸收峰，检出率为0.67%。
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