(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810418582.3
(22)申请日 2018.05.04
(71)申请人 江苏中济万泰生物医药有限公司
地址 214400 江苏省无锡市江阴市东盛西
路78号
(72)发明人 赵树铭 林裕翔 陈亚平 吴明磊
(51)Int.Cl.
G01N 1/30(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明涉及一种孔雀石绿溶液的制备方法
和使用方法，先称取孔雀石绿(草酸盐)6g溶于
100ml 95％乙醇中，再加入纯化水850ml搅拌均
匀，之后用普通滤纸过滤，最后加入甘油50ml搅
拌均匀灌装黑或棕瓶中备用。经染对比用
孔雀石绿溶液复染后抗酸染阴性菌呈蓝绿，
背景更清晰，优势明显，提高了操作人员的工作
效率，
具有更加广泛的适用性。权利要求书1页 说明书2页CN 108593396 A 2018.09.28
C N 108593396
A
1.一种孔雀石绿溶液的制备方法，其特征在于：所述孔雀石绿溶液的制备方法具体实施步骤如下：
A、称取孔雀石绿(草酸盐)6g溶于100ml 95％乙醇中；
B、加入纯化水850ml搅拌均匀；
C、用普通滤纸过滤；
D、加入甘油50ml搅拌均匀灌装黑或棕瓶中备用。
2.一种孔雀石绿溶液的使用方法，其特征在于：所述孔雀石绿溶液抗酸染方法步骤如下：
A、固定后的涂片放置于玻片架上；
B、加石炭酸品红溶液染，试剂完全覆盖样本并停留5分钟，流动自来水冲洗直到没有云雾状染剂出现，沥去标本上剩余的水； C、加盐酸乙醇溶液脱，试剂完全覆盖样本并停留15～30秒(视标本厚度决定)，流动自来水立即冲洗，沥去标本上剩余的水；
D、加孔雀石绿溶液染，试剂完全覆盖样本并停留1分钟，流动自来水立即冲洗，沥去标本上剩余的水；
E、以滤纸吸干或在空气中风干，或50℃烘干后镜检；
抗酸染结果如下：
经染对比用孔雀石绿溶液复染后抗酸染阴性菌呈蓝绿，背景更清晰，优势明显。
权 利 要 求 书1/1页CN 108593396 A
孔雀石绿溶液的制备方法和使用方法
[0001]本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种孔雀石绿溶液的制备和使用方法。
背景技术
[0002]抗酸染法acid－fast staining method 1882年由埃利希(F.Ehrlich)首创并经F.Ehrlich)齐尔(Ziehl)改进而创造出的细菌染法。其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森(Ziehl－Neelsen)染法和齐尔-加贝特(Ziehl－Gabbet)染法。
[0003]齐-尼氏抗酸染法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红，而其他细菌及背景中的物质为蓝。
[0004]抗酸菌细胞壁富含蜡与脂质导致染效率低，过去需要加热石炭酸溶液加速细胞壁形成复合物，
现代采用特殊工艺配制，不需要进行加热即可完成染。抗酸菌细胞壁被品红染料染后几乎不可能被脱，即使使用盐酸化乙醇脱液也无法脱。利用抗酸菌的这个特点，可以在显微镜下与非抗酸菌进行区分。
[0005]孔雀石绿可用作生物染剂，也用作丝绸、皮革和纸张的染料。商品孔雀石绿染料，是将素溶于热草酸溶液冷却后得草酸盐的结晶，2C23H24N2.C2H2O4。或用盐酸中和后，加定量的氯化锌ZnCl2结晶出氯化锌复盐3C23H25N2CL.2ZnCl2，成为绿碱性染料，把细菌或细胞组织染成蓝绿，方便在显微镜下研究。
[0006]目前国内市场没有抗酸染液复染用孔雀石绿复染，经染对比用孔雀石绿溶液复染后抗酸染阴性菌呈蓝绿，背景更清晰，优势明显。
发明内容
[0007]本发明的目的是提供一种孔雀石绿溶液，在抗酸染液复染时更加清晰，提高了操作人员的工作效率，具有更加广泛的适用性。
[0008]本发明解决上述问题所采用的技术方案为：一种孔雀石绿溶液的制备方法，所述孔雀石绿溶液的制备方法具体实施步骤如下：
[0009]A、称取孔雀石绿(草酸盐)6g溶于100ml 95％乙醇中；
[0010]B、加入纯化水850ml搅拌均匀；
[0011]C、用普通滤纸过滤；
[0012]D、加入甘油50ml搅拌均匀灌装黑或棕瓶中备用。
[0013]所述孔雀石绿溶液抗酸染方法步骤如下：
[0014]A、固定后的涂片放置于玻片架上；
[0015]B、加石炭酸品红溶液染，试剂完全覆盖样本并停留5分钟，流动自来水冲洗直到没有云雾状染剂出现，沥去标本上剩余的水；
[0016]C、加盐酸乙醇溶液脱，试剂完全覆盖样本并停留15～30秒(视标本厚度决定)，流动自来水立即冲洗，沥去标本上剩余的水；
[0017]D、加孔雀石绿溶液染，试剂完全覆盖样本并停留1分钟，流动自来水立即冲洗，沥去标本上剩余的水；
[0018]E、以滤纸吸干或在空气中风干，或50℃烘干后镜检；
[0019]抗酸染结果如下：
[0020]经染对比用孔雀石绿溶液复染后抗酸染阴性菌呈蓝绿，背景更清晰，优势明显。
[0021]与现有技术相比，本发明的优点在于：本申请提供了一种抗酸复染液，孔雀石绿溶液在抗酸染液复染时更加清晰，提高了操作人员的工作效率，具有更加广泛的适用性。
具体实施方式
[0022]以下结合实施例对本发明孔雀石绿溶液的制备方法作进一步详细描述。[0023]本实施例中孔雀石绿溶液的制备方法具体实施步骤如下：
[0024]A、称取孔雀石绿(草酸盐)6g溶于100ml 95％乙醇中。
[0025]B、加入纯化水850ml搅拌均匀。
[0026]C、用普通滤纸过滤。
[0027]D、加入甘油50ml搅拌均匀灌装黑或棕瓶中备用。
[0028]抗酸染方法步骤如下：
[0029]A、固定后的涂片放置于玻片架上
[0030]B、加石炭酸品红溶液染，试剂完全覆盖样本并停留5分钟，流动自来水冲洗直到没有云雾状染剂出现，沥去标本上剩余的水。
[0031]C、加盐酸乙醇溶液脱，试剂完全覆盖样本并停留15～30秒(视标本厚度决定)，流动自来水立即冲洗，沥去标本上剩余的水。
[0032]D、加孔雀石绿溶液染，试剂完全覆盖样本并停留1分钟，流动自来水立即冲洗，沥去标本上剩余的水。
[0033]E、以滤纸吸干或在空气中风干，或50℃烘干后镜检。
[0034]抗酸染结果如下：
[0035]经染对比用孔雀石绿溶液复染后抗酸染阴性菌呈蓝绿，背景更清晰，优势明显。
[0036]除上述实施例外，本发明还包括有其他实施方式，凡采用等同变换或者等效替换方式形成的技术方案，均应落入本发明权利要求的保护范围之内。
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