(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911405718.8
(22)申请日 2019.12.31
(71)申请人 山东省药学科学院
地址 250101 山东省济南市高新区新泺大
街989号
(72)发明人 付丙月 张宁 王金虎 孙玲
吴伟山 孙青 王颖超 张云
樊志萍 邓玉晓 张宗磊
(51)Int.Cl.
G01N 30/02(2006.01)
G01N 30/06(2006.01)
G01N 30/30(2006.01)
G01N 30/32(2006.01)
G01N 30/34(2006.01)
G01N 30/74(2006.01)
G01N 30/89(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种莱特莫韦及含莱特莫韦
的制剂中有关物质的检测方法。本方法选择适当
的流动相，采用HPLC法，迅速准确地检测出莱特
莫韦地合成和制剂过程中产生的各类杂质对产
品纯度的干扰，为控制原料药和制剂的质量提供
了一种有效的检测方法。权利要求书1页 说明书3页 附图2页CN 111024861 A 2020.04.17
C N 111024861
A
1.一种莱特莫韦及含莱特莫韦的制剂中有关物质检测方法，其特征在于检测方法包括以下步骤：
(1)取莱特莫韦原料药或含莱特莫韦的制剂样品，用流动相溶解，配制供试液，制成每1ml含莱特莫韦0.01～5mg的供试品溶液； (2)采用HPLC，谱柱为C18，流速为0.5～1.5ml/min，以混合有机溶剂-水的混合溶液为流动相，等度洗脱；
(3)采用紫外检测器，检测波长210～260nm，记录谱，完成莱特莫韦及含莱特莫韦的制剂中有关物质的检测。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，谱柱温度在15℃～40℃。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，谱柱选自Hypersil BDS。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，水相的pH值为2.5～6.0。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，调水相pH值的酸为醋酸、磷酸、硝酸或盐酸。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中流动相中混合有机溶剂选自乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇的混合溶剂。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中流动相中有机相-水相的体积比为10％：40％～60％～90％。
8.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，流速为1.0ml/min。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中，检测波长为230nm。
权 利 要 求 书1/1页CN 111024861 A
一种莱特莫韦及含莱特莫韦的制剂中有关物质的检测方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种莱特莫韦及含莱特莫韦的制剂中有关物质的检测方法，属于药物分析检测领域。
背景技术
[0002]莱特莫韦(英文名：Letermovir)，化学结构式如下：
[0003]
[0004]该药是一种新型非核苷CMV抑制剂(3,4-二氢喹唑啉)，通过特异性靶向病毒终止酶复合物来抑制病毒复制。目前正开发用于预防巨细胞病毒(CMV)感染，用于接受异基因造血干细胞移植(HSCT)后巨细胞病毒(CMV)血清呈阳性的成人患者预防CMV感染和相关疾病。[0005]2017年11月9日，美国默克公司宣布，FDA批准了该公司的每日一次口服和静脉注射药物Prevymis(letermovir)。2019年5月7号，莱特莫
韦(商品名LORVIQUA)被欧盟授权允许有条件下，进行市场销售。而之前已经以商品名LORBRENA在美国、加拿大和日本市场销售。
[0006]目前国内该药物也没有统一的检测标准，为了更好地控制莱特莫韦产品的质量，需要建立一套简单可靠并稳定有效的方法对本品的有关物质进行检测，解决合成工艺引入的或者降解及制剂加工过程产生的各类已知或未知杂质对产品纯度测定的干扰。[0007]本发明采用等度洗脱方式，有效地对莱特莫韦及含莱特莫韦的制剂进行含量和有关物质检测，可快速准确的检测出莱特莫韦的杂质及其降解产物，操作简捷，灵敏度高，可较好地控制产品质量。本发明实现了莱特莫韦及含莱特莫韦的制剂有关物质的测定，保证了莱特莫韦的质量控制，在合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。
发明内容
[0008]本发明的目的在于建立一种能够控制莱特莫韦及含莱特莫韦的制剂中有关物质的检测方法。该方法解决合成工艺引入的或者降解及制剂加工过程产生的各类已知或未知杂质对产品纯度测定的干扰，更好地控制莱特莫韦产品的质量。考虑到正相谱条件不适用于液质联用仪，无法进一步开展莱特莫韦及含莱特莫韦的制剂有关物质的分离和结构定性检测，因此研究了反相高效液相谱法。该方法的优点：1、能够将有关物质有效分离、并
且能够量化控制； 2、该方法具有普遍实用性；3、足够的灵敏度，可对杂质进行有效的控制。[0009]本
发明提供了一种莱特莫韦及含莱特莫韦的制剂中有关物质检测方法，步骤如下：(1) 取莱特莫韦原料药或含莱特莫韦的制剂样品，用流动相溶解，配制供试液；(2)采用反相高效液相谱法，谱柱为Hypersil BDS C18柱，柱温15℃～40℃，流速为0.5～1.5ml/min，极性有机溶剂-水的混合溶液为流动相，采用等度洗脱；(3)采用紫外检测器，检测波长210～ 260nm，记录谱，完成莱特莫韦及含莱特莫韦的制剂中有关物质的检测。[0010]进一步地，本发明所述的检测方法中，取莱特莫韦及含莱特莫韦的制剂样品用流动相溶解并稀释，制成每1ml含莱特莫韦0.01～5mg的供试品溶液。
[0011]其中，以乙腈-异丙醇-水的混合溶液作为流动相，流动相中乙腈占总体积的10％～30％，异丙醇占总体积的0.5％～10％，水占总体积的60％～90％，体积比最优为15％-5％-80％。
[0012]更进一步地，水相的pH值为2.5～6.0，其中，优选pH值为3.0～5.5，最优pH为5.0。用于调节水pH值的酸的种类包括醋酸、磷酸、硝酸或盐酸，最优选磷酸。
[0013]本发明所述的检测方法中，谱柱为HypersilODS。
[0014]本发明所述的检测方法中，谱柱温度在15℃～40℃。
[0015]本发明所述的检测方法中，检测波长为230nm。
[0016]本发明与已有技术相比的积极效果在于：
[0017]1、本发明中液相谱条件的优越性更强，适用于原料药及其各种剂型有关物质的检测，可快速准确的检测出莱特莫韦的杂质和降解产物情况。在莱特莫韦原料及其制剂的有关物质检测中，各峰形对称，分离度高，避免了出现前沿峰、个别峰分离度不够等问题。[0018]2、本发明使用紫外检测器对产品进行有关物质检测，建立了一种快速直观的评价谱峰纯度的有效防范。可直观的判断谱峰的纯度，并判断存在干扰费的位置，能够获得“在流”的全部光谱信息，快速得到谱组分的吸收光谱，优点在于不仅能依靠谱的保留时间进行定性，而且能够根据其提供的光谱信息进行定性，大大提高了定性的可信度和检测灵敏度。
[0019]3、本发明检测方法准确，操作简捷，重现性好，灵敏度高，可以充分满足有关物质检测和分解产物测定的要求，比较好地控制样品中的特殊杂质，保证产品质量，在工作中实用性强。有利于工业化生产中，莱特莫韦及含莱特莫韦的制剂中有关物质的检测，能更好的控制产品质量，保证药品安全性。
附图说明
[0020]图1.莱特莫韦杂质限度线性关系图
[0021]图2.系统适用性液相谱图
[0022]图3.莱特莫韦原料有关物质的液相谱图
[0023]图4.实施例二莱特莫韦片有关物质液相谱图
[0024]图5.实施例二莱特莫韦注射液有关物质液相谱图
具体实施方式：
[0025]下面将通过实施例对本发明作进一步的描述，但这些描述并不是对本发明内容的
进一步的限定。
[0026]实施例一莱特莫韦有关物质的测定
[0027]1、谱条件与系统适用性实验
[0028] 1.1谱条件的选择：
[0029]仪器：Agilent 1260，其最佳柱温30℃，流速1.0ml/min，检测波长230nm。液相谱柱用Hypersil BDS C18柱(150mm×4.6mm，5μm)，乙腈-异丙醇-水(pH5.0)为流动相组成，其最佳配比为：15％：5％：80％。进样量20μl。
[0030]在该谱条件下，莱特莫韦主峰保留时间适中，峰形较好。
[0031] 1.2溶液稳定性
[0032]取同一份供试品品溶液，分别于0、2、4、8、10、12小时分别进样测定，其主峰峰面积及有关物质测定结果在12小时内基本稳定。
[0033]以上实验结果表明，此方法简便灵敏，重现性好，可较好地对样品中莱特莫韦的质量进行检测。
[0034] 1.3供试品溶液的配置；
[0035]取莱特莫韦原料适量，加流动相配置成0.2mg/ml的溶液，作为供试品溶液。[0036] 1.4对照品溶液的制备：
[0037]量取上述1.4供试品溶液适量，加流动相稀释成每1ml中约含2μg的溶液，作为对照溶液。该对照溶液浓度范围在：1～20μg/ml内时，峰面积与浓度呈很好的线性关系，线性相关系数为0.9998。见附图1
[0038]2、莱特莫韦原料有关物质的检测：
[0039]取供试品溶液10ul，注入液相谱仪，调节检测灵敏度，使主成分谱峰高约为满量程的10％，再取供试品溶液10ul注入液相谱仪，记录谱图，供试品溶液谱图中如有杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液中主峰的峰面积。见附图2
[0040]实施例二：莱特莫韦片有关物质的测定
[0041]取本品20片，精密称定，研细，精密量取适量(约相当于莱特莫韦2mg)，加流动相配置成每1ml中含0.2mg的溶液，滤过，作为供试品溶液。精密量取适量，加流动相稀释成每1ml 中约含2μg的溶液，作为对照溶液。在下列选的的谱条件下：
[0042]紫外检测器(Agilent 1260)检测波长230nm，Hypersil BDS C18柱(150mm×4.6mm，5 μm)，乙腈-异丙醇-水(pH5.0)为流动相组成，其最佳配比为：15％：5％：80％。谱柱柱温 28℃，流速1.0ml/min。进样量20μl。理论塔板上按莱特莫韦峰计算不低于3000。见附图3
[0043]实施例三：莱特莫韦注射液有关物质的测定
[0044]取供试品，精密量取适量(约相当于莱特莫韦2mg)，加流动相配置成每1ml中含0.2mg 的溶液，滤过，取稀释液滤液作为供试品溶液。精密量取适量，加流动相稀释成每1ml 中约含2μg的溶液，作为对照溶液。在下列选的的谱条件下：
[0045]紫外检测器(Agilent 1260)检测波长230nm，Hypersil BDS C18柱(150mm×4.6mm，5 μm)，乙腈-异丙醇-水(pH5.0)为流动相组成，其最佳配比为：15％：5％：80％。谱柱柱温 32℃，流速1.0ml/min。进样量20μl。理论塔板上按莱特莫韦峰计算不低于3000。见附图4 。
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