目录
1.人脐带间充质干细胞P4代成品细胞质量标准 (2) 3.逆转录病毒PERT法检测标准操作程序 (8)
4.细胞基因组DNA提取操作标准流程 (10)
5.细胞基因组RNA提取操作标准流程 (12)
病毒唑注射液
6.病毒PCR法检测标准操作程序Ⅰ (14)
7.病毒PCR法检测标准操作程序Ⅱ (16)
8.hUC-MSCs免疫学反应检测标准操作程序 (19)
9.hUC-MSCs成骨诱导分化标准操作程序 (21)
10.hUC-MSCs成脂诱导分化标准操作程序 (22)
11.细胞计数台盼蓝染法标准操作程序 (25)
12.细胞周期检测标准操作程序 (26)
13.hUC-MSCs端粒酶检测标准操作程序 (28)
14.hUC-MSCs软琼脂克隆形成实验标准操作程序 (31)
人脐带间充质干细胞P4代成品细胞质量标准
细胞流式检测标准操作程序
1 目的：对细胞表面抗原进行流式鉴定，保证检测的准确性。
2 范围：细胞流式检测的全过程
3 责任人：技术部
两个铁球同时着地教学设计
4 内容
4.1 仪器和试剂
4.1.1 仪器设备：流式细胞仪（FACS Calibur TM）、台式离心机、1000µL微量移液、100µL
微量移液、10µL微量移液。
4.1.2 试剂以及耗材：FITC单克隆抗体、APC 单克隆抗体、PE单克隆抗体、PerCP 单克隆
抗体、相应的同型对照；1XPBS；鞘液专用流式管、头。
4.1.3 样本准备
4.1.3.1 将样本按条码号顺序排列好，每份样本按照检测抗体种类的需要取流式专用管若
干支，分别标记好单阳管、阴性管、同型对照管和样本检测管。
4.1.3.2 各取100µL样本加入标记好的流式管中，然后根据流式管标记的信息分别添加对
应的抗体。充分混匀，置4℃冰箱避光孵育30分钟。
4.1.3.5 孵育结束以后加入1ml PBS，充分混匀，1200rpm离心5分钟。
4.1.3.7 弃上清液，加入300 µL PBS。充分混匀，随后上机检测。
4.2 仪器开机程序
4.2.1依次打开稳压电源，主电源，流式细胞仪电源，计算机。
4.2.2 开启电脑，在出现的密码登录框中，输入BDIS，按Enter。
4.2.3 打开鞘液筒抽屉，检查鞘液筒和废液筒存液情况，鞘液筒空则需要加液，废液筒满则取
出倒除，检查管路是否有气泡，否则应排除，没有问题以后，打开鞘液压力开关。
4.2.4 开机后，仪器预热5min，即可开始进行实验。
4.2.5 实验之前，仪器清洗，专用流式管装满双蒸水，放置仪器吸液管下，设备“run+high”情况下，然后PRIME（排空气）模式运行两次。
4.2.6 流式细胞仪上样前FAScomp质控分析
tilera4.2.6.1标准微球的制备（标准微球“Cal BRITE beads”保存4度）
三检测：管1：1滴Unlabeled+0.5ml鞘液（或者0.5ml蒸馏水）
管2：1滴unlabeled+FITC,PE,Percp各一滴+1ml鞘液
四检测：管1：1滴unlabed+1滴APC+0.5ml鞘液
管2：1滴unlabed+FITC,PE,Percp,APC各一滴+1ml鞘液
4.2.6.2 打开FAScomp软件，在“sigh in” 窗口下，输入信息，然后“accept”，进入“set up”
窗口。
4.2.6.3 “set up” 窗口下，选择分选模式：“Lyse/wash”（用于溶血素洗涤样本）(通常选
择该模式），“Lyse/No wash”（用于溶血处理后的免洗样），然后输入CaliBRITE
Beads”批号（批号为6位编码，最后一位为大写字母），选择存储文件。
4.2.6.4 然后点击“RUN”，进入PMT窗口，在该窗口下，用管1为样品，选择“RUN-
/high”。点击“start”自动调节光电倍增管的电压，屏幕出现闪烁“PMTS set successfully”，点击“NEXT”。
4.2.6.5 在“COMP”窗口下，用“管2”为样品，选择“RUN/HIGH”，点击“START”，可执
行自动调节荧光补偿：FL1-%FL2,FL2-%FL1和FL3-%FL2，屏幕出现“COMPENSATION
SET SUCCESSFULL Y”便可点击出“NEXT”。
4.2.6.6 在“sens”窗口下，依然用管2为样，点击“start”可自动检测各参数灵敏度。
4.2.6.7 在“summary report”下得到所有检测的结果。
4.2.6.8 质控完成后，移去标准微球管并插上双蒸水流式管，在“summary report”状态
下，点击“quit”键，或从“file menu”中选择“quit”退出程序。
4.2.7 打开cellquest pro软件，按”common+B”组合键，连接流式细胞仪。
4.2.8从“cytometer”菜单中选择“detectors”（或者键盘“common+1”)、“threshold” (或者
“common+2”)、“compensation”(或者键盘“common+3”)、“status”(键“common+4”)，将出现各自对应的窗口，将其拖至空白处。
4.2.9 确定软件与细胞仪完成连接。如果有必要，可点击Cytometer视窗，观察软件与细胞仪
是否完成连接。
4.2.10 完成连接后，在Cytometer视窗下方会显示Cytometer Connected。检视各项试剂液面是
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否正常。在Cytometer视窗右下方会显示各项试剂液面高度。视实验需要补充
FACSFlow，倒除废液。如果视窗下方显示Cytometer Disconnected，可尝试重新启动
Cellquest pro 软件。
xm20104.2.11接着可以开始规划实验挡、或设置仪器。
4.3 上样检测郑州seo张炎
4.3.1在工具板中选择点图，在文件的空白区点击，然后拖动对角线至所需大小，出点图对话框，
点击“plot type”，选择“acquisition->analysis”；X、Y轴默认为FSC、SSC，然后上阴性管，调节FSC、SSC电压，再设置目标细胞“region”，该“region”在调节荧光探测器时使用，在工具板
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