单克隆抗体在抗击新冠病毒中发挥着关键作用，并已被证明能有效减少患者症状由轻症向重症的发展。然而，该领域未来的进展取决于抗体开发的时间和技术。近日，《Nature - Scientific Report》杂志最近发表的一篇文章论证了单B细胞克隆筛选在快速、可靠地识别高亲和力、强效的新冠病毒（SARS-CoV-2）中和抗体方面的应用，并解释了如何增强其中和活性。
中和抗体
疫苗接种后，一般会产生不同类型的抗体，以中和抗体为例：中和抗体由病毒最外层的包膜或衣壳抗原刺激机体产生的一类能与病毒结合并使之丧失感染力的抗体。目前针对新冠疫苗的研究中，中和抗体属于研究的热点，如针对S1蛋白的受体结合域（receptor-binding domain，RBD）、针对S1蛋白的N末端域（NTD）。 该研究中研究的中和抗体属于前者，针对S1蛋白受体结合域（RBD），它可以和SARS-CoV-2的RBD区域结合，阻断该区域与血管紧张素转化酶II受体（ACE2 receptor）的结合，
从而达到阻止病毒入侵细胞的功效。该类抗体是人体产生的最多、最主要也是阻断病毒效果最好的一类抗体。
图1. SARS-CoV-2刺突(S)的蛋白结构。a. SARS-CoV-2病毒粒子及其S蛋白示意图。 E包膜，M膜，N核衣壳，血管紧张素转换酶2。 b. SARS-CoV-2 S蛋白三聚体(PDB 6VXX)低温em结构。分别用橙、绿和蓝三种颜来表示这三个亚基。 c. SARS-CoV-2 S受体结合域(RBD)和S1亚基n端结构域(NTD)。 d. SARS-CoV-2 RBD与人ACE2复合物的晶体结构(PDB 6M0J)。人类ACE2是浅蓝的
倍加乐通过单B细胞的筛选，可以更快的发现抗体
通过单B细胞分选，可以将抗体的发现过程缩短至几周之内。这种开创性的方法包括从免疫动物或康复患者中分离活细胞，分类抗原特异性细胞亚，并通过RT-PCR和PCR恢复成对的VH/VL抗体基因; 编码的抗体可以被表达和表征，以确定性能最好的克隆，如图2所示：
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877uu图2. 从单个B细胞中分离发现有效的SARS-CoV-2中和抗体并进行鉴定的方法综述
该方法的优点是使用了经过体细胞高突变的原生抗体序列，并保留了原生VH/VL配对。此外，发现过程是高通量的，可以进一步对高免疫抗体库进行评估。
针对SARS-CoV-2病毒的中和抗体
女人的决策为了评估单B细胞筛选在分离针对SARS-CoV-2病毒的中和抗体的有效性，研究人员在HEK293T细胞中制备了一种重组形式的SARS-CoV-2受体结合域(receptor-binding domain，RBD)，并对其进行蛋白纯化。
接着对BALB/c小鼠进行免疫后，通过单细胞分选从脾脏材料中分离antiRBD IgG1+B细胞，并处理VH /VL基因。将得到的VH/VL基因对克隆到哺乳动物表达质粒(含人IgG1恒定区和用于嵌合抗体表达的kappa轻链区)中，瞬时转染到HEK 293-6E细胞中。 抗体鉴定包括Protein A磁珠的纯化、抗原结合能力、中和活性等性能的评估。
亲和性分析
在重组抗体被生产出来后，必需对其的亲和力进行分析，以便进行下游的相关应用。抗体亲和力的检测方法包括生物膜干涉技术（BLI）、固相放射免疫法（SP-RIA）、平衡透析法、结合抗原沉淀法、放射免疫法（RIA）、ELISA法、表面等离子共振法（SPR）。
该方法使用了结合抗原沉淀法进行亲和力的分析，将链霉亲和素-磁珠与包被有生物素化RBD一起孵育后，洗涤去除掉未结合的抗体。接着使用Alexa Fluor®647荧光二抗（山羊来源，抗人IgG，Fc片段特异性亲和纯化二抗，Jackson ImmunoResearch）进行孵育并通过流式细胞术进行分析。结果显示，两个克隆体(12H2和13I1)对RBD具有较低的pM EC50值，其值与先前报道的一种有效中和抗体CB6相当（图3）。
刘谦2010
图3. 分离出的抗体与SARS-CoV-2受体结合区域具有高度亲和力。典当行管理办法
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