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CFSE细胞增殖检测方法

CFSE细胞增殖检测试剂盒

产品组成：

产品编号BB-4211-1 BB-4211-2 组份编号

规格500-5000 assays 1000-10000 assays

试剂A：CFSE荧光探针1瓶2瓶42110A

试剂B：CFSE溶解液1ml 1ml*2 42110B

试剂C：CFSE细胞标记液10X 50ml 100ml 42110C

注意：

CFSE须-20℃避光保存，注意防潮。

储存条件：

-20℃避光保存。

预防职务犯罪论文

有效期：

六个月。

注意事项：

● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或。

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管

底，避免开盖时试剂损失。

● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。op07

● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清

洗并彻底清除残留清洁剂。

● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

湖南中医药大学校报● 需长时间保存可-20℃避光保存。

● CFSE标记细胞仅需5-15分钟即可完成。对于不同细胞，最佳标记时间需自行摸索。

正式实验前，建议先做几个孔摸索染浓度和加入CFSE试剂后的培养时间。

● 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

产品简介：

荧光染料CFSE(CFDA-SE)，是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。CFSE是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。CFSE 在结构上将酚羟基部位改造成AM体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，进入细胞内的CFSE的AM部位能被细胞内酯酶水解发出绿荧光。CFSE的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合，固定在细胞内，不会漏出细胞外。CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光最强。

在细胞分裂增殖过程中，CFSE的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。CFSE标记细胞的荧光非常均一，优于以前使用的其他细胞示踪荧光

探针如PKH26，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均

一。在细胞分裂增殖过程中，CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪（FL1通道）根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次（1/2的荧光强度），二次（1/4的荧光强度），三次（1/8的荧光强度），以及更多分裂次数的细胞。CFSE可检测分裂次数多达八次甚至更多。经CFSE标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染的功能。

CFSE标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。CFSE毒性小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。

CFSE标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。最常用于淋巴细胞的增殖检测，也可以用于成纤维细胞、NK细胞等其它细胞的增殖检测。

CFSE标记细胞呈绿荧光，荧光波长：λex=496 nm, λem=516 nm。流式检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为516nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。CFSE标记的细胞除了流式细胞仪检测细胞增殖外，还可用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染的细胞示踪观察。

试剂盒以外自备试剂和仪器

● PBS ● 纯水 ● 移液器及吸头 ● 96孔培养板

● CO2培养箱 ● 流式细胞仪或荧光显微镜

使用方法：

使用注意事项：

●旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

●染浓度根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。

●配制的CFSE母液极易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，最后

和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。

●CFSE工作液应现配现用，不能提前配制，因为CFSE吸水会分解，影响染效果。

●CFSE配制成储存母液后宜在一个月内使用完毕，最长不宜超过2个月。CFSE易被水解，在水溶

液中会很快变质。母液请在使用过程中避免接触水。工作液在标记细胞的过程中和水接触是在

许可的时间范围内的。

●CFSE溶解液在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以37

℃水浴片刻至全部融解后使用。

试剂配制：

1、从冰箱中取出CFSE试剂，静置几分钟至室温。盛放CFSE的管子开盖前请轻弹管壁

几次，再离心几分钟让粉末充分落入管底后才能开盖。

2、取0.9 ml CFSE溶解液加到CFSE管中溶解，配制成CFSE母液。加入溶解液后请先盖上盖子，反复颠倒把盖子和管壁上的试剂洗到底部，并用移液器反复吹打使溶解完全。冬天气温较低时CFSE溶解液会凝固，请先在37℃水浴至溶解液完全融解后再进行配制，配制过程中注意避免溶液凝固，保持温度至CFSE溶解完全。

细胞测定

1、用纯水10倍稀释CFSE细胞标记液。

2、根据需要检测的细胞样品数，用细胞标记液将CFSE母液100-500倍稀释，再用PBS

2-8倍稀释，配制成染工作液，终浓度相当于将CFSE母液200-4000倍稀释。不

同的细胞需要根据预实验结果确定最佳染浓度。如果荧光强度弱，可以适当提高

CFSE的终浓度。如果背景太高，可以适当降低CFSE的终浓度，请摸索条件到

最佳浓度。

3、将待测细胞用染工作液重悬，至细胞浓度大约107/ml。

散血莲

4、在37℃培养箱中孵育15-30分钟。

5、离心后去上清，收集细胞，用PBS或无血清培养基洗涤细胞1-2次，最后加入PBS

或无血清培养基重悬细胞。

6、取500ul细胞悬液，用流式细胞仪或荧光显微镜检测。

7、随后还可按照细胞的正常培养方法进行培养。可以在荧光显微镜下直接观察标记效

果，也可以在培养适当时间后再用流式细胞仪检测细胞增殖，或用于其他特定实验

目的的细胞荧光示踪。标记的细胞也可以用于活体动物的移植，并用荧光进行示踪。

标记的细胞呈绿荧光。