(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202111560537.X
(22)申请日 2021.12.20
(71)申请人 复旦大学附属中山医院
地址 200032 上海市徐汇区枫林路180号
(72)发明人 葛均波 程蕾蕾 汪雪君 林瑾仪
王妍 陈佳慧 沈毅辉 张卉
许宇辰 陈怡帆
(74)专利代理机构 上海伯瑞杰知识产权代理有
限公司 31227
代理人 周一新
(51)Int.Cl.
A61K 31/519(2006.01)
A61P 9/00(2006.01)
A61P 29/00(2006.01)
(54)发明名称
巴瑞替尼在制备免疫检查点抑制剂相
(57)摘要
本发明公开了巴瑞替尼在制备免疫检
瑞替尼的分子式为C 16H 17N 7O 2S，分子量为371.42，
结构式为特别涉及巴
瑞替尼调控巨噬细胞亚型转化在免疫检查点抑制剂相关心肌炎中的应用或在制备调控免疫检查点抑制剂相关心肌炎中巨噬细胞亚型转化的药物中的应用。本发明通过构建动物模型和细胞
模型验证巴瑞替尼ICIs相关心肌炎的效果，
证明巴瑞替尼具有抑制炎症因子表达和ROS产生、以及促进M2型巨噬细胞相关标志物表达升高的作用，作为ICIs相关心肌炎潜在药物具有低毒、
分子量小和免疫原性小的优势。权利要求书1页 说明书5页 附图4页CN 114028402 A 2022.02.11
C N 114028402
A
1.巴瑞替尼在制备免疫检查点抑制剂相关心肌炎的药物中的应用，其中巴瑞替尼的分子式为C 16H 17N 7O 2S，分子量为371.42，结构式为
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物以巴瑞替尼为活性成分，其有效剂量为0.1–10mg/kg/天。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述药物剂型选自片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、针剂或缓释剂。
4.巴瑞替尼调控巨噬细胞亚型转化在免疫检查点抑制剂相关心肌炎中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述巨噬细胞由M1亚型向M2亚型转化。
6.巴瑞替尼在制备调控免疫检查点抑制剂相关心肌炎中巨噬细胞亚型转化的药物中的应用。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述巨噬细胞由M1亚型向M2亚型转化。
权 利 要 求 书1/1页CN 114028402 A
巴瑞替尼在制备免疫检查点抑制剂相关心肌炎的药物中
的应用
技术领域
[0001]本发明涉及巴瑞替尼在制备免疫检查点抑制剂相关心肌炎的药物中的应用，属于生物医药技术领域。
背景技术
[0002]过去十年，免疫疗法的应用为晚期肿瘤患者带来福音。其中，免疫检查点抑制剂(Immune Checkpoint Inhibitors，ICIs)主要通过激活免疫系统、阻止肿瘤细胞免疫逃逸，以达到抗肿瘤目的。ICIs导致的心脏毒性主要表现为使用免疫药物后出现的心肌炎，尽管ICIs相关心肌炎的理论发生率为1.14％，但目前ICIs相关心肌炎的实际发生率远远被低估。由于ICIs相关心肌炎发病后病程进展迅速，预后极为凶险，患者从症状发作到死亡的中位时间仅为32天，最终致死率甚至高达46％。目前糖皮质激
素主要用于ICIs相关心肌炎，但糖皮质激素效果欠佳并容易诱发一系列药物并发症，严重影响癌症患者的生活质量，因此迫切需要寻针对ICIs相关心肌炎更有效、更低副作用的药物。
[0003]根据《2020年中国ICIs相关心肌炎检测与管理的专家共识》，ICIs相关心肌炎的心肌组织中有大量CD3+T淋巴细胞浸润，部分病例也有CD68+巨噬细胞浸润。众所周知，巨噬细胞作为单核细胞系统的一员，在免疫防御、免疫稳态和免疫监视中起着不可或缺的作用。在免疫调节过程中，巨噬细胞可以通过表现出不同的表型以根据微环境的变化分泌不同的细胞炎症因子，对微环境刺激和信号作出适应性变化，其中主要的巨噬细胞亚型包括典型激活的炎症(M1)和交替激活或抗炎(M2)的巨噬细胞。当M1型巨噬细胞激活时，相关细胞因子IL‑6、iNOS和TNF‑α等将显著升高，而当M2型巨噬细胞激活时，其表面标志物与相关细胞因子如IL‑10和CD206则显著升高。有研究表明，巨噬细胞极化在病毒性心肌炎、动脉粥样硬化等不良心血管事件中起着至关重要的作用，接受ICIs的非小细胞癌患者会通过失去肿瘤抑制基因HAI‑1来加速巨噬细胞的极化，使患者预后不良。因此，改变巨噬细胞的极化可能为疾病提供潜在的靶点。
[0004]JAK激酶是一类十分重要的药物靶点，其家族有4个成员：JAK‑1、JAK‑2、JAK‑3和TYK‑2，活化JAK激酶的磷酸化酪氨酸残基，能够激活下游信号蛋白而唤起生理功能，活化的磷酸化JAK通过与细胞质部分的酪氨酸残基作用而与STAT位点对接。因此，针对JAK‑STAT信号通路的靶向药物，有助于抑制炎症因子相关基因转录从而抑制机体炎症因子的级联反应，稳定免疫调节。针对这一靶点目前已经研发
出以巴瑞替尼和托法替布这一类代表药物，尽管两者均为JAK抑制剂，然而其效果与机制却不完全相同。有研究表明，巴瑞替尼主要抑制JAK‑1和JAK‑2，而托法替布抑制JAK‑3的效果明显大于JAK‑1和JAK‑2。目前，巴瑞替尼和托法替布主要用于风湿性关节炎等其他免疫性疾病，尽管之前有文献报道托法替布可能用于ICIs相关心肌炎，但对于其效果尚未与其他JAK激酶抑制剂进行对比。
发明内容
[0005]针对现有用于ICIs相关心肌炎的药物效果欠佳且副作用大的问题，本发明提供一种JAK抑制剂巴瑞替尼的新医药应用，即巴瑞替尼在制备免疫检查点抑制剂相关心肌炎的药物中的应用；其中，巴瑞替尼为商品化药物，CAS号：1187594‑09‑7，化学名称：{1‑(乙烷磺酰基)‑3‑[4‑(7H‑吡咯并[2,3‑d]嘧定‑4‑基)‑1H‑吡唑‑1‑基]氮杂环丁烷‑3‑
基}乙腈，分子式为C
16H
17
N
7
O
2
S，分子量为371.42，结构式为是一种
口服的JAK抑制剂，常用于成年人中度至重度活动性类风湿关节炎(RA)，用于银屑病、糖尿病肾病、特应性皮炎和系统性红斑狼疮等疾病的疗效目前均处于II期临床阶段。[0006]优选地，所述药物以巴瑞替尼为活性成分，其有效剂量为0.1–10mg/kg/天，药物剂型可选自片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、针剂或缓释剂。
[0007]本发明还提供巴瑞替尼调控巨噬细胞亚型转化在免疫检查点抑制剂相关心肌炎中的应用，特别是巨噬细胞由M1亚型向M2亚型转化。
[0008]本发明还提供巴瑞替尼在制备调控免疫检查点抑制剂相关心肌炎中巨噬细胞亚型转化的药物中的应用，特别是巨噬细胞由M1亚型向M2亚型转化。
[0009]本发明以托法替布作为阳性参照，分别在动物模型和细胞模型中验证巴瑞替尼在ICIs相关心肌炎中的效果与主要作用机制，具体如下：
[0010]一、通过构建的ICIs相关心肌炎小鼠模型实验发现，PD‑1抑制剂使小鼠心脏功能降低，心脏组织中IL‑6、IL‑1β、iNOS和TNF‑α显著升高，M2型巨噬细胞表面标志物CD206相对表达量显著降低，巨噬细胞标志物F4/80显著升高而CD206表达显著降低；经托法替布灌胃的ICIs相关心肌炎小鼠血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)和肌酸激酶同工酶(LDH)含量显著降低，心脏组织中IL‑6、IL‑1β和iNOS炎症因子表达量显著降低，而CD206表达未显著增加。与托法替布相比，经巴瑞替尼灌胃的ICIs相关心肌炎小鼠血清中CK、CKMB和LDH含量降低更为显著，且心脏组织中IL‑6、IL‑1β和iNOS炎症因子表达量也显著降低，而CD206表达显著升高。
[0011]二、为验证药物对细胞是否有毒性作用，分别采用不同浓度处理，发现巴瑞替尼对细胞存活率无影响，而托法替布增加细胞存活率，由此推测托法替布可能不能促进M2型巨噬细胞极化。进一步通过细胞实验发现，PD‑1抑制剂促进M1型巨噬细胞相关炎症因子表达增加，促进活性氧(ROS)产生；虽然经托法替布处理后ROS产生显著减少，而巴瑞替尼处理后减少ROS产生的效果更明显。不仅如此，巴瑞替尼还能够促进M2型巨噬细胞相关炎症因子1L‑10和CD206表达显著增加，由此证明巴瑞替尼具有抑制炎症因子表达和ROS产生、以及促
进M2型巨噬细胞相关标志物表达升高的作用，作为ICIs相关心肌炎潜在药物具有低毒、分子量小和免疫原性小的优势。
附图说明
[0012]图1为实施例中各试验组的A)CK、B)CKMB和C)LDH的含量表达水平。
[0013]图2为实施例中各试验组的小鼠急性心肌炎炎症期心脏组织HE染。
[0014]图3为实施例中各试验组的小鼠急性心肌炎炎症期心脏组织Masson染。[0015]图4为实施例中各试验组的小鼠心脏组织免疫荧光染。
[0016]图5为实施例中各试验组的小鼠心脏组织qPCR炎症因子A)IL‑1β、B)IL‑6、C)iNOS 和D)CD206的表达情况。
[0017]图6为实施例中不同浓度的巴瑞替尼在巨噬细胞中处理24h后对细胞活力的影响。[0018]图7为实施例中各试验组对巨噬细胞ROS生成的影响。
[0019]图8为实施例中各试验组对巨噬细胞qPCR炎症因子A)IL‑6、B)IL‑10、C)IL‑1β、D) iNOS、E)CD206和F)TNF‑α的表达情况。
具体实施方式
[0020]为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例的附图，对本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是
全部的实施例。基于所描述的本发明的实施例，本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。[0021]除非另作定义，此处使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。本发明专利申请说明书以及权利要求书中使用的“第一”、“第二”以及类似的词语并不表示任何顺序、数量或者重要性，而只是用来区分不同的组成部分。同样，“一个”或者“一”等类似词语也不表示数量限制，而是表示存在至少一个。[0022]以下实施例中采用的完全氟式试剂购自美国Sigma公司，TnI肽段序列为HARVDKV DEERYDVEAKVTKNITEIADLTQKIYDLRGKFKRPTLRRVRIS，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。
[0023]实施例1动物实验
[0024]1、实验方法
[0025]将小鼠分为对照组、ICIs相关心肌炎模型组、托法替布组和巴瑞替尼组；其中：
[0026](1)对照组为：对8周龄Balb/c雄性小鼠分别于第0天和第7天皮下注射生理盐水0.1ml，自第7天起，每2天给予小鼠腹腔注射生理盐水0.1ml，共注射生理盐水5次。[0027](2)ICIs相关心肌炎模型组为：对8周龄Balb/c雄性小鼠分别于第0天和第7天给予小鼠皮下注射0.1ml含有0.25mg小鼠心肌肌钙蛋白I肽段的完全弗氏佐剂。自第7天起，每2天给予小鼠腹腔注射PD‑1抑制剂，剂量为5mg/kg/次，共注射PD‑1抑制
剂5次，获得ICIs相关心肌炎小鼠模型。
[0028](3)托法替布组为：连续给8周龄Balb/c雄性小鼠灌胃5mg/kg托法替布14天后，给小鼠皮下注射0.1ml含有0.25mg小鼠心肌肌钙蛋白I肽段的完全弗氏佐剂，7天后再次
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议