(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611252893.4
(22)申请日 2016.12.30
(71)申请人 湖南味菇坊生物科技有限公司
地址 417000 湖南省娄底市娄星区氐星路
38号
(72)发明人 李剑伟
(74)专利代理机构 长沙智嵘专利代理事务所
43211
代理人 李杰
(51)Int.Cl.
A01G 1/04(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种银耳菌种提取方法，该方
置于55～65％的湿度条件下4～5小时风干，对耳
～4毫米的浓白菌丝。将浓白菌丝转管培养，至形
成白毛团，得到银耳菌种。上述银耳菌种提取方
法，通过控制湿度对耳片的香灰菌丝灭活，同时
以组织分离法进行银耳菌种提取，仅需进行一次
转管，提纯时间短，操作简便；同时菌种性状遗传
亲本，
质量稳定。权利要求书1页 说明书5页 附图1页CN 106613358 A 2017.05.10
C N 106613358
A
1.一种银耳菌种提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
选取耳片消毒、漂洗、擦干后，置于55～65％的湿度条件下4～5小时风干，对所述耳片上的香灰菌丝灭活；
在风干的耳片生长点切取薄耳片，并接种到培养基中，培养至接种点出现2～4毫米的浓白菌丝；
将所述浓白菌丝转管培养，至形成白毛团，得到银耳菌种。
2.根据权利要求1所述的银耳菌种提取方法，其特征在于，所述耳片风干的条件为：将耳片置于超净工作台，在柔风条件下放置4～5小时。
3.根据权利要求1所述的银耳菌种提取方法，其特征在于，所述培养基包括土豆、葡萄糖、琼脂和水，所述培养基由土豆200g、葡萄糖20g、琼脂24～26g加入木屑培养基香灰菌丝煮水提取液定容1000ml，杀菌、冷却得到。
4.根据权利要求3所述的银耳菌种提取方法，其特征在于，所述培养基由土豆200g、葡萄糖20g、琼脂25g加入木屑培养基香灰菌丝煮水提取液定容1000ml，杀菌、冷却得到。
5.根据权利要求1所述的银耳菌种提取方法，其特征在于，所述薄耳片的大小为0.2mm ×0.05mm，所述薄耳片的厚度为0.1～1毫米。
6.根据权利要求5所述的银耳菌种提取方法，其特征在于，所述薄耳片接种到试管内的培养基中，每根试管接种2～4块。
7.根据权利要求1所述的银耳菌种提取方法，其特征在于，所述薄耳片在22～25℃下培育15～17天，得到所述浓白菌丝。
8.根据权利要求7所述的银耳菌种提取方法，其特征在于，将所述浓白菌丝分成2mm ×3mm大小进行转管，培养7～12天得到所述白毛团。
9.根据权利要求1～8中任一项所述的银耳菌种提取方法，其特征在于，所述耳片通过73～78％酒精消毒，并用73～78％酒精漂洗4～6S，再用无菌水漂洗两次，每次4～6S。
权 利 要 求 书1/1页CN 106613358 A
银耳菌种提取方法
技术领域
[0001]本发明涉及银耳培育领域，特别地，涉及一种银耳菌种提取方法。
背景技术
[0002]银耳含丰富的胶质、多种维生素和多种氨基酸及肝糖，具有极高的食用价值。栽培银耳要获得高产、优质的菌种是关键。传统的制种分离一直没能很好的解决菌种稳定性的问题，每次出现母本菌种异常，通常都会导致整批生产不良甚至绝收，给农户或者企业造成重大损失。并且银耳菌种基质分离过于繁锁，不易获取，并且质量不稳定。如银耳菌种制作普遍使用基质分离法提取纯银耳菌种，此方法每次
分离都要30～45天风干。因为风干时间不足分离出菌种带有香灰菌丝，风干时间过长又影响银耳菌种的活性，减少银耳木屑种转接代数，因此每次转接试管的数量都要很多。
发明内容
[0003]本发明提供了一种银耳菌种提取方法，以解决现有的菌种操作复杂、质量不稳定的技术问题。
[0004]本发明采用的技术方案如下：
[0005]一种银耳菌种提取方法，包括以下步骤：
[0006]选取耳片消毒、漂洗、擦干后，置于55～65％的湿度条件下4～5小时风干，对耳片上的香灰菌丝灭活。
[0007]在风干的耳片生长点切取薄耳片，并接种到培养基中，培养至接种点出现2～4毫米的浓白菌丝。
[0008]将浓白菌丝转管培养，至形成白毛团，得到银耳菌种。
[0009]进一步地，耳片风干的条件为：将耳片置于超净工作台，在柔风条件下放置4～5小时。
[0010]进一步地，培养基包括土豆、葡萄糖、琼脂和水，培养基由土豆200g、葡萄糖20g、琼脂24～26g
加入木屑培养基香灰菌丝煮水提取液定容1000ml，杀菌、冷却得到。
[0011]进一步地，培养基由土豆200g、葡萄糖20g、琼脂25g加入木屑培养基香灰菌丝煮水提取液定容1000ml，杀菌、冷却得到。
[0012]进一步地，薄耳片的大小为0.2mm×0.05mm，薄耳片的厚度为0.1～1毫米。[0013]进一步地，薄耳片接种到试管内的培养基中，每根试管接种2～4块。
[0014]进一步地，薄耳片在22～25℃下培育15～17天，得到浓白菌丝。
[0015]进一步地，将浓白菌丝分成2mm×3mm大小进行转管，培养7～12天得到白毛团。[0016]进一步地，耳片通过73～78％酒精消毒，并用73～78％酒精漂洗4～6S，再用无菌水漂洗两次，每次4～6S。
[0017]本发明具有以下有益效果：上述银耳菌种提取方法，通过控制湿度对耳片的香灰菌丝灭活，同时以组织分离法进行银耳菌种提取，仅需进行一次转管，提纯时间短，操作简
便；同时菌种性状遗传亲本，质量稳定。
[0018]除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将参照图，对本发明作进一步详细的说明。
附图说明
[0019]构成本申请的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
[0020]图1是本发明优选实施例的薄耳片接种到培养基第5天的图；
[0021]图2是本发明优选实施例的薄耳片接种到培养基第10天的图
[0022]图3是本发明优选实施例的薄耳片接种到培养基第15天的图；
[0023]图4是本发明优选实施例的浓白菌丝转管后培养第6天的图。
具体实施方式
[0024]以下结合附图对本发明的实施例进行详细说明，但是本发明可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。
[0025]本发明的优选实施例提供了一种银耳菌种提取方法，包括以下步骤：
[0026]选取耳片消毒、漂洗、擦干后，置于55～65％的湿度条件下4～5小时风干，对耳片上的香灰菌丝
灭活。
[0027]在风干的耳片生长点切取薄耳片，并接种到培养基中，培养至接种点出现2～4毫米的浓白菌丝。
[0028]将浓白菌丝转管培养，至形成白毛团，得到银耳菌种。
[0029]挑选朵形圆正，叶片展开均匀，白，生长快，直径3～5cm银耳做为分离种源，从中挑选3～5片生命力强的耳片进行银耳菌种提取。可对耳片进行常规消毒和漂洗，并擦干。擦干可采用无菌纱布。香灰菌丝为银耳的伴生菌丝，为获得纯的银耳菌种，需对其进行灭活。香灰菌丝需在较高的湿度条件下生存，当在55～65％的湿度条件下放置4～5小时风干后，香灰菌丝会干死，而银耳菌种并不会受影响。
[0030]耳片外表已风干，取下耳片在生长点切小块，尽可能地切薄点。利用薄的耳片全面吸附在培养基上，吸收培育基营养，刺激菌丝萌发。
[0031]用无菌接种钩把薄耳片快速放入试管中，把切口面紧贴在培养基表面。其中培养基可为培养银耳菌种常用的培养基，如PAD培养基。参照图1，图1为薄耳片接种至培养基第5天的实物图。
[0032]试管菌种通常培育15～17天，接种点中间为胶状体，四周长有浓白菌丝2～4mm时转管。该方法提取试管包括长出银耳菌丝与不长银耳菌丝两种情况。
[0033]参照图2和图3。图2和图3清楚表示了薄耳片萌发银耳菌丝的过程。培养第15天时，大部分薄耳片萌发银耳菌丝，小部分薄耳片仅自身生长，长大长厚，而并未萌发银耳菌丝。统计长有银耳菌丝试验管90.25％以上，因此只需从生长浓白菌丝的试管中提取菌丝转管即可。而传统基质块提纯方法菌种生长情况复杂有些试管只长香灰菌丝，有些试管长香灰菌丝与银耳菌丝，有此试管只长银耳菌丝，有些试管长有杂菌，有些试管不生长任何菌丝。因此需要在大量试管中挑选出浓白纯银耳菌丝，并且纯度不容易保证。
[0034]可从生长浓白菌丝的试管中挑选银耳菌丝生长浓密，粗壮，生长快的进行转管，切取胶质块周围菌丝体2mm×3mm左右转接到培养容器，如试管或三角瓶内，菌丝第二天长出小毛团，参照图4，转管第6天，银耳菌丝继续生长。转管7～12天后可使用，此时得到白毛团(纯银耳菌种)圆正，饱满，浓密，洁白。
[0035]本发明具有以下有益效果：上述银耳菌种提取方法，通过控制湿度对耳片的香灰菌丝灭活，同时以组织分离法进行银耳菌种提取，仅需进行一次转管，提纯时间短，操作简便；同时菌种性状遗传亲本，质量稳定。
[0036]可选地，耳片风干的条件为：将耳片置于超净工作台，在柔风条件下放置4～5小时。超净工作台中不易感染杂菌，在柔风的条件下，耳片风干速度合适，且可有效的对香灰菌丝灭活。
[0037]可选地，培养基中包括土豆、葡萄糖、琼脂和水，培养基由土豆200g、葡萄糖20g、琼脂24～26g加入木屑培养基香灰菌丝煮水提取液定容1000ml，杀菌、冷却得到。
[0038]培养基为PAD培养基，其组分和配制方法与一般的PAD培养基基本相同。区别在于，本发明中采用的水为木屑培养基香灰菌丝的煮水提取液。即在培养银耳的木屑培养基上培养香灰菌丝至布满整个培养基，将香灰菌丝连同木屑培养基共同煮水，作为配制PAD培养基定容用水。在上述量的PAD培养基中，木屑培养基香灰菌丝用量为2瓶，瓶子大小为750ml，即每瓶木屑培养基(质量百分数计，木屑68％，麦皮30％，糖1％，石膏1％，)香灰菌丝的质量为320g左右，将其加入2000ML水煮30分钟得到提取液。定容后可在121℃灭菌30分钟，摆斜面，冷却后3天使用。
[0039]银耳菌丝必须混合银耳菌丝才能萌发，申请人发现木屑培养基香灰菌丝煮水得到提取液可为银耳菌丝提供生长的营养成分。因此操作更为方便。
[0040]可选地，培养基由土豆200g、葡萄糖20g、琼脂25g加入木屑培养基香灰菌丝煮水提取液定容1000ml，杀菌、冷却得到。
[0041]可选地，薄耳片的大小为0.2mm×0.05mm，薄耳片的厚度为0.1～1毫米。
[0042]该大小和厚度的薄耳片可最大限度吸收培育基营养，刺激菌丝萌发。
[0043]可选地，薄耳片接种到试管内的培养基中，每根试管几种2～4块。该条件下，薄耳片的分布密度合适，生长速度较快。
[0044]可选地，薄耳片在22～25℃下培育15～17天，得到浓白菌丝。在该条件下，菌丝萌发和生长速度快，节省了制种时间。
[0045]可选地，将浓白菌丝分成2mm×3mm大小进行转管，培养7～12天得到白毛团。在该条件下，浓白菌丝生长速度快，节省了制种时间。
[0046]可选地，耳片通过73～78％酒精消毒，并用73～78％酒精漂洗4～6S，再用无菌水漂洗两次，每次4～6S。
[0047]采用73～78％酒精消毒可杀死其他杂菌，保证银耳菌种的纯度。优选为75％的酒精。用73～78％酒精漂洗4～6S，再用无菌水漂洗两次，每次4～6S，清除多余的酒精。[0048]实施例1
[0049]1、制作生物PDA培养基
[0050]PDA为土豆200g，葡萄糖20g，琼脂25g，另加木屑培养基香灰菌丝2瓶煮水提取液定容1000ml，121℃灭菌30分钟，摆斜面，冷却后3天使用。
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