(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.11.19
C N 104155403
A (21)申请号 201410435851.9
(22)申请日 2014.08.29
G01N 30/88(2006.01)
(71)申请人福建中烟工业有限责任公司
地址361012 福建省厦门市思明区莲岳路
118号中烟工业大厦
(72)发明人张建平 谢卫 黄朝章 许寒春
吴清辉 黄华发 邓其馨 叶仲力
苏明亮 刘江生
(74)专利代理机构中国国际贸易促进委员会专
利商标事务所 11038
代理人
刘海罗
(54)发明名称
(57)摘要
霉灵农药残留含量的方法。具体地，本发明涉及一
种检测恶霉灵的方法，包括下述步骤：(1)使用液
相谱从样品中分离恶霉灵，(2)使用三重四级
杆质谱检测恶霉灵。本发明的检测恶霉灵的方法
灵敏度高、检测周期短、操作简单、基质干扰少，具
有良好的应用前景。
(51)Int.Cl.
权利要求书2页 说明书8页 附图2页
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书2页 说明书8页 附图2页(10)申请公布号CN 104155403 A
1.一种检测恶霉灵的方法，包括下述步骤：
(1)使用液相谱从样品中分离恶霉灵，
(2)使用三重四级杆质谱检测恶霉灵。
2.根据权利要求1所述的方法，所述检测为定量检测。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤(2)中，通过检测母离子m/z 99-子离子m/z 56或者母离子m/z 99-子离子m/z 43来定量检测恶霉灵。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其还包括下述步骤：
(3)使用外标法定量分析得到样品中恶霉灵的含量。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述三重四级杆质谱的操作条件选自如下的1)至4)中的任意一种：
1)雾化源：电子轰击源
检测模式：正离子化模式
气帘气：0.15－0.20MPa
雾化气：0.50－0.60MPa
碰撞气：0.03－0.06Mpa
离子源温度：500－550℃
离子化电流：2－4μA；
2)雾化源：电子轰击源
检测模式：正离子化模式
气帘气：0.16MPa
雾化气：0.55MPa
碰撞气：0.06Mpa
离子源温度：520℃
离子化电流：3μA；
3)雾化源：电子轰击源
检测模式：正离子化模式
气帘气：0.18MPa
雾化气：0.5MPa
碰撞气：0.05Mpa
离子源温度：530℃
离子化电流：4μA；
4)雾化源：电子轰击源
检测模式：正离子化模式
气帘气：0.20MPa
雾化气：0.6MPa
碰撞气：0.06Mpa
离子源温度：550℃
离子化电流：2μA。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述三重四级杆质谱的操作条件还包括：
电喷雾电压：5000V
去簇电压：40V
碰撞能20V。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，
其中，所述液相谱为高效液相谱或超高效液相谱；具体地，所述液相谱的流动相为甲醇、乙腈中的一种或两种与水形成的混合物；具体地，所述液相谱的固相为正相极性谱柱或反向非极性谱柱，优选为Agilent ZORBAX超高压快速高分离度300SB－C8，更优选地，所述谱柱的规格为2.1×100mm，1.8μm。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，高效液相谱的操作条件选自如下的1)至4)中的任意一种：
1)进样量：10、25或50μL
流速：250－400μL/min
柱温：30－50℃
洗脱程序：出峰前，乙醇和水的体积比为(5：5)－(3：7)；出峰后，乙醇和水的体积比为(8：1)－(9：1)；
2)进样量：25μL
流速：250μL/min
柱温：35℃
洗脱程序：0－3.5min乙醇：水＝3：7，3.5min－15min乙醇：水＝9：1；
3)进样量：25μL
流速：300μL/min
柱温：40℃
洗脱程序：0－3.5min乙醇：水＝5：5，3.5－15min乙醇：水＝8：1；
4)进样量：50μL
流速：400μL/min
柱温：50℃
洗脱程序：0－3.5min乙醇：水＝4：6，3.5－15min乙醇：水＝8.5：1。
9.母离子m/z 99-子离子m/z 56或母离子m/z 99-子离子m/z 43在定量检测恶霉灵中的用途。
一种测定恶霉灵农药残留含量的方法
技术领域
[0001] 本发明属于农药检测领域，涉及一种测定恶霉灵农药残留含量的方法。
背景技术
[0002] 恶霉灵俗称绿亨一号、土菌消、土菌克或绿佳宝，是一种高效广谱杀菌剂，对植物各类土传病害的病原菌如腐霉菌、苗腐菌、镰刀菌、丝核菌和根壳菌等均具有极强的灭杀与防治效果。其有效成分为3－羟基－5－甲基异恶唑(hymexazol)，结构式如下面的式I所示：
[0003]
[0004] 随着恶霉灵适用范围的扩大，植物中的恶霉灵农药残留和动物中恶霉灵农药残留的累积对人体的毒害作用逐渐受到关注，有资料显示恶霉灵农药残留不仅会损害人体的肠胃、肾脏器官，而且在人体代谢过程中恶霉灵转变成的亚硝基化合物容易诱发癌症发生。据此，需要对动植物中恶霉灵农药残留含量进行精确测定，以降低恶霉灵对人体健康的威胁。[0005] 目前，恶霉灵的测定方法主要有电化学分析法、气相谱法和液相谱—紫外吸收法。其中，电化学分析法主要用于恶霉灵生产工艺的定量分析，其灵敏度低、专一性差，很难达到恶霉灵农药残留检测的精度要求；气相谱法的灵敏度高、专一性强，但由于恶霉灵具有热不稳定性，需衍生化后再进行气相谱检测，衍生化不仅提高了检测的复杂度和成本，而且衍生化不完全也会降低检测的准确性；至于液相谱—紫外吸收法，由于恶霉灵的极性大，
采用该方法进行检测是合适的，但在恶霉灵的紫外吸收波长(200nm)附近存在许多杂质吸收波长，干扰了恶霉灵的检测，而且紫外检测器对恶霉灵的灵敏度较低，无法达到恶霉灵农药残留检测的精度要求。
[0006] 上述多种技术均无法精确测定恶霉灵农药残留的含量；而且，迄今为止，本领域技术人员也一直无法寻到一种可精确测定动植物中恶霉灵农药残留含量的方法。
发明内容
[0007] 本发明所要解决的一个技术问题是现有技术无法精确测定恶霉灵农药残留的含量；进而提出一种可精确测定恶霉灵农药残留含量的方法。
[0008] 为解决上述技术问题，本发明所提出的技术方案如下：
[0009] 一种精确测定恶霉灵农药残留含量的方法，包括
[0010] (1)使用液相谱从样品中分离恶霉灵；
[0011] (2)使用三重四级杆质谱检测恶霉灵。
[0012] 所述“样品”为自动物体或植物体试样中提取出来的残留有恶霉灵的样品。[0013] 上述提取方法为现有技术中的提取方法，包括但不限于下述方法：
[0014] 称取约2g(精确至0.1mg)动物体或植物体试样于50mL具盖离心管中并加入10mL 水，振荡直至试样被水充分浸润，静置10min；移取10mL丙酮到离心管中，并置于漩涡混合振荡仪上以2000r/min速率振荡2min；将离心管在冰箱冷冻室(-18℃)中冷冻保存10min 后，取出。在离心管中分别加入4g无水硫酸镁，1g氯化钠，1g柠檬酸钠，0.5g柠檬酸氢二钠，立即于漩涡混合振荡仪上以2000r/min速度振荡2min，以防止无水硫酸镁遇水反应造成局部过热并结块，然后以4000r/min离心5min。移取1.5mL提取液上层清液于2mL离心管中，加入150mg无水硫酸镁、50mg石墨化炭黑，于漩涡混合振荡仪上以2000r/min速率振荡2min，以4000r/min离心5min，收集上清液即可。
[0015] 在本发明一个实施例中，所述检测为定性或定量检测。
[0016] 在本发明一个实施例中，步骤(2)中，通过检测出母离子m/z 99-子离子m/z 56或母离子m/z 99-子离子m/z 43来定量检测恶霉灵。
[0017] 三重四级杆质谱用于对液相谱分离出的恶霉灵进行检测响应，其检测方法为：液相谱分离出的恶霉灵进入三重四级杆质谱被轰击成为带电离子，带电离子进入第一级质谱，控制第一级质谱仅允许m/z为99的母离子通过并进入第二级质谱(碰撞池)，母离子在碰撞池中碰撞为子离子，控制第三级质谱仅允许m/z为56或m/z为43的离子进入并检测出峰(参见附图2)，从而定量检测出恶霉灵。
[0018] 其中，“m/z”表示质荷比，即离子的质量与所带电荷的比值。
[0019] 在本发明另一实施例中，还包括：(3)使用外标法定量分析得到样品中恶霉灵的含量。
“外标法”是指样品和标准品分别[0020] 使用外标法定量分析得到样品中恶霉灵的含量；
按照相同方法测定，用标准品的峰面积或峰高与其对应的浓度做一条标准曲线，测出样品的峰面积或峰高，在标准曲线上查出其对应的浓度，进而求得样品中恶霉灵农药残留含量。
[0021] 在本发明另一实施例中，所述三重四级杆质谱的操作条件选自如下的1)至4)中的任意一种：
[0022] 1)
[0023] 雾化源：电子轰击源
[0024] 检测模式：正离子化模式
[0025] 气帘气：0.15－0.20MPa
[0026] 雾化气：0.50－0.60MPa
[0027] 碰撞气：0.03－0.06Mpa
[0028] 离子源温度：500－550℃
[0029] 离子化电流：2－4μA；
[0030] 2)
[0031] 雾化源：电子轰击源
[0032] 检测模式：正离子化模式
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