[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公布说明书
[11]公开号CN 101338312A
[43]公开日2009年1月7日
[21]申请号200810126071.0[22]申请日2008.07.03
[21]申请号200810126071.0
[71]申请人天根生化科技（北京）有限公司
地址100083北京市海淀区成府路35号北陆楼
[72]发明人李晓晨 [51]Int.CI.C12N 15/10 (2006.01)C07H 1/06 (2006.01)
权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 1 页
[54]发明名称
[57]摘要
本发明属于核酸提取领域的技术，尤其涉及一
种硅胶膜活化液及其应用。本发明的目的是提供一
其与核酸的结合力得到增加，且使它们的结合力具
有良好的均一性与稳定性，提高其生物利用度，更
有效地发挥其核酸提取的功能；而且通过该方法使
硅胶膜被包裹在活化剂内部，隔绝了与外界环境的
接触，因而性质更加稳定，扩大了其应用范围，以
满足不同的生产需要。
200810126071.0权 利 要 求 书第1/1页
1.一种硅胶膜活化液，其特征在于，硅胶膜活化液由50-200mM NaHCO3、
1-10％SDS和1-50mM EDTA组成。
2.根据权利要求1的硅胶膜活化液，其特征在于，使用该活化液处理后的硅胶膜与核酸的结合能力增强，且活化液使硅胶膜与核酸的结合力具有良好的均一性与稳定性。
3.根据权利要求1或2的活化液，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有100mM NaHCO3。
4.根据权利要求1或2的活化液，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有5％SDS。
5.根据权利要求1或2的活化液，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有25mM EDTA。
6.利用权利要求1或2的硅胶膜活化液提取核酸的方法，该方法包括使用硅胶膜活化液活化硅胶膜、裂解细胞、硅胶膜吸附核酸、清除硅胶膜上的杂质以及膜上的核酸洗脱的过程。
7.根据权利要求6的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有100mM NaHCO3。
8.根据权利要求6的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有5％SDS。
9.根据权利要求6的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有25mM EDTA。
10.一种对于核酸提取的硅胶膜进行处理的方法，该方法包括切割硅胶膜制备吸附柱、加入权利要求1的硅胶膜活化液至吸附柱以及离心去除活化液的过程。 11.根据权利要求10的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有100mM NaHCO3。
12.根据权利要求10的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有5％SDS。
13.根据权利要求10的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有25mM EDTA。
14.一种核酸提取试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有权利要求1的硅胶膜活化液、裂解液、洗涤液以及洗脱液。
15.根据权利要求14的试剂盒，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有100mM NaHCO3。
16.根据权利要求14的试剂盒，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有5％SDS。
17.根据权利要求14的试剂盒，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有25mM EDTA。
200810126071.0说 明 书第1/5页
硅胶膜活化液及其在核酸提取中的应用
技术领域
本发明属于核酸提取领域的技术，尤其涉及一种硅胶膜活化液及其应用。背景技术
分子生物学的研究与应用离不开核酸的提取与纯化，核酸提取的效果直接影响着后续的工作和研究，但核酸的提取与纯化一直是耗时繁琐的过程。国内外许多学者一直在探索各种核酸提取纯化的方法。
传统的核酸制备方法常用酚/氯仿等有毒的有机溶剂抽提，这些技术适用范围广，适用于大部分分子生物学研究，但是这些技术操作繁琐且耗时，而且酚和氯仿等有机溶剂易造成环境污染，有损健康。这种方法目前在国内还比较普遍，大部分学校教学经费不是很足的实验室还在使用。
1992年X.delamballerie等开始用Chelex100螯合柱提取细菌及病毒DNA 获得较好效果。该方法简单快速，避免使用酚等有害物质，但是提取的DNA纯度较低，不适用于对纯度要求较高的下游的分子生物学实验。
1992年PicardC等利用玻璃粉在高盐下吸附DNA的特性纯化DNA。此后玻璃粉吸附法提纯DNA时有报道，但是该方法操作步骤较多，提取的DNA纯度较低。
1999年R Caldarelli-Stefano等运用磁珠分别从福尔马林固定、石蜡包埋和冰冻组织中提取DNA，整个过程不到两个小时。与传统方法比较，磁珠法是一种可行、简单、敏感和快速的方法。
1997年Adriab R Geksthorpe等利用抗DNA单克隆抗体与磁珠结合的方法从小样本、陈旧样本及含PCR抑制的样本中提取核酸获得很好的效果。但是目前应用此方法生产的商品化DNA试剂盒还没有。
硅胶膜吸附柱法是采用特制的硅胶膜吸附柱来选择性吸附裂解细胞释放的DNA，再经过洗涤和洗脱等简单程序，就可获得高纯度的DNA。但是直接使用硅胶膜方法用于核酸分离存在硅胶膜不稳定、不均一以及与核酸结合能力下降等缺点，用我们特制的活化工艺可以克服以上缺陷。
发明内容
我们采用活化硅胶膜表面基团的工艺使硅胶膜与核酸结合能力得到明显改善，从而达到从生物体的裂解液中分离提取核酸的目的。
直接使用硅胶膜方法用于核酸分离存在硅胶膜不稳定、不均一以及与核酸结合能力下降等缺点，用我们特制的活化工艺可以克服以上缺陷。活化工艺采
用化学方法特殊处理，活化液组成为：50-200mM NaHCO3，1-10％(w/v)SDS，1-50mM EDTA。
本发明的目的是提供一种对硅胶膜进行处理的方法，采用活化工艺可以使其与核酸的结合力得到增加，且使它们的结合力具有良好的均一性与稳定性，提高其生物利用度，更有效地发挥其核酸提取的功能；而且通过该方法使硅胶膜被包裹在活化剂内部，隔绝了与外界环境的接触，因而性质更加稳定，扩大了其应用范围，以满足不同的生产需要。
本发明的硅胶膜活化液，其特征在于，硅胶膜活化液中含有50-200m M NaHCO3、1-10％SDS和1-50mM EDTA。
根据本发明的硅胶膜活化液，其特征在于，使用该活化液处理后的硅胶膜与核酸的结合能力增强，且活化液使硅胶膜与核酸的结合力具有良好的均一性与稳定性。
根据本发明的的活化液，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有100mM NaHCO3。
根据本发明的的活化液，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有5％SDS。 根据本发明的的活化液，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有25mM EDTA。 本发明包括利用硅胶膜活化液提取核酸的方法，该方法包括使用活化液活化硅胶膜、裂解细胞、硅胶膜吸附核酸、清除硅胶膜上的杂质以及膜上的核酸洗脱的过程。
根据本发明的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有100mM NaHCO3。 根据本发明的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有5％SDS。根据权 根据本发明的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有25mM EDTA。 本发明还包括一种对于核酸提取的硅胶膜进行处理的方法，该方法包括切割硅胶膜制备吸附柱、加入硅胶膜活化液至吸附柱以及离心去除活化液的过程。 根据本发明的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有100mM NaHCO3。 根据本发明的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有5％S D S。 根据本发明的方法，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有25mM EDTA。 本发明进一步包括一种核酸提取试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有硅胶膜活化液、裂解液、洗涤液以及洗脱液。
根据本发明的试剂盒，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有100mM NaHCO3。 根据本发明的试剂盒，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有5％SDS。
根据本发明的试剂盒，其特征在于，所述硅胶膜活化液中含有25mM EDTA。附图说明
图1.不同体积的活化液对硅胶膜活化效果的影响
1.500μl
2.600μl
3.700μl
4.不加活化液
图2.不同活化时间对硅胶膜活化效果的影响
1.0
2.5分钟
3.10分钟
4.20分钟
5.40分钟
6.80分钟
7.160分钟
8.不加活化液
图3.活化液对不同温度放置的硅胶膜活化效果的影响
1.4℃，加活化液
2.4℃，不加活化液
3.25℃，加活化液
4.25℃，不加活化液
5.37℃，加活化液
6.37℃，不加活化液
具体实施方式
实施例1
1.硅胶膜活化工艺
将厚度大约为0.3mm用于空气过滤的硅胶膜切割成适当大小后连同过滤垫片置于塑料吸附柱CB3中，向吸附柱CB3(吸附柱放入2ml收集管中)加入500μl 的硅胶膜活化液，12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。(用活化液处理过的柱子最好立即使用)。
活化液组成为：100m M N a H C O3，5％(w/v)S D S，25m M E D T A。
2.用活化后的硅胶膜提取质粒pcDNA
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