商宝娣;张效平
大庆油田教育中心
【摘 要】为探明甲苯咪唑、、吡喹酮、辛硫磷和狼毒大戟5种杀虫药物对金鱼的急性毒性,为金鱼寄生虫病的防治提供参考,采用96 h静态生物测试法,进行5种杀虫药物对金鱼的急性毒性试验.结果表明:甲苯咪唑、辛硫磷、、吡喹酮和狼毒大戟乙酸乙酯提取物的96 h半数致死浓度(LC50)分别为0.29 mg/L、5.49 mg/L、27.55 mg/L、29.22 mg/L和13.65 mg/L,安全浓度(SC)分别为0.029 mg/L、0.549 mg/L、2.755 mg/L、2.922 mg/L和1.365 mg/L.根据化合物对鱼类毒性等级评价标准,甲苯咪唑对金鱼属于高毒药品,辛硫磷属于中毒药品,、吡喹酮和狼毒大戟乙酸乙酯提取物属于低毒药品.【期刊名称】《贵州农业科学》
【年(卷),期】2015(043)009
【总页数】4页(P138-141)
【关键词】金鱼;急性毒性;狼毒大戟提取物;杀虫药物
【作 者】商宝娣;张效平
【作者单位】贵州省水产研究所,贵州贵阳550025;贵州省水产研究所,贵州贵阳550025
【正文语种】中 文
【中图分类】S948
金鱼(Carmsim auratus)隶属鲤科鲫属，是我国饲养的主要观赏鱼之一，其彩绚丽鲜艳，姿态优美奇异，备受人们喜爱。金鱼具有体型较小、生命力强、饲养简便等一系列作为实验动物的优良特点，目前已广泛应用于鱼病学[1-2]、鱼类遗传学[3-4]、亲缘关系进化[5]、环境科学[6]等领域的研究。一般金鱼的养殖密度较高，容易产生病害，每年都会因为疾病爆发造成严重的经济损失[7-8]，成为制约其产业发展的一个重要因素。其中，指环虫病是金鱼养殖中高发、常见的疾病之一。据福建省金鱼协会统计，每年由指环虫病引发的病害与死亡数占金鱼总病害与死亡数的37%，已成为制约金鱼养殖业发展的瓶颈。二苯乙烯
甲苯咪唑、、吡喹酮和辛硫磷等都是农业部渔用药品手册中登记的驱虫药物[9]，已广泛应用于水产养殖过程中寄生虫病的防治，尤其是对单殖吸虫病的防治。狼毒大戟的干
燥根是中药狼毒的主流商品之一，其根提取物对多种细菌及害虫具有很好的杀灭效果[10-12]。但在鱼病防治过程中，每年都会因为药物浓度使用不合理而造成养殖鱼类的大量死亡。因此，了解这几种常用杀虫药物对养殖鱼类的安全作用范围，在实际生产中具有非常重要的意义。毒性试验可提供每种药物对宿主鱼的安全浓度、半致死浓度等重要参数。这几种药物对草鱼[13]、稀有鮈鲫[14]、异育银鲫[15]、黑脊倒刺鲃[16]、淇河鲫[17]、黄河鲤[18]和花鳗鲡[19]等的毒性试验已有报道，但到目前为止，对金鱼的毒性研究未见报道。为此，笔者于2014年9月进行了甲苯咪唑、、吡喹酮、辛硫磷和狼毒大戟乙酸乙酯提取物对金鱼的急性毒性试验，以期为金鱼寄生虫病的防治提供参考。
1.1 金鱼
试验金鱼购自贵阳市花鸟市场，重(2.27±0.72)g，于水族箱中暂养3 d后用高锰酸钾10 mg/L浸泡30 min后换水；7 d后用福尔马林溶液100 mg/L浸泡12 h，然后换水养殖30 d，期间每隔3 d选取3～5条金鱼进行检查，没有金鱼死亡且无任何体外寄生虫感染时即可用于毒性试验。试验鱼用40 L透明水族箱养殖，用充氧泵增氧，每天投喂1%鱼重的颗粒饲料，且隔天换水1/3～1/2；水温为(20.0±2.0)℃，pH为7.0±0.3，溶氧为6.0～7.8 mg/L。
1.2 药物
甲苯咪唑(有效含量>98%，南京制药厂生产)，(有效含量>90%，湖北荆州化工厂生产)，吡喹酮(有效含量>99%，陕西汉江制药厂生产)，辛硫磷(有效含量40%，武汉市中博水产生物技术有限公司生产)均为分析纯，从武汉市中博水产生物技术有限公司获得。5%狼毒大戟乙酸乙酯提取物由湖北省中医药大学提取并提供。
1.3 毒性试验
利用96 h静态生物测试法，通过预试验确定甲苯咪唑、、辛硫磷、吡喹酮和狼毒大戟乙酸乙酯提取物96 h内导致金鱼100%死亡的最低浓度分别为0.4 mg/L、30 mg/L、7 mg/L、40 mg/L和20 mg/L，不导致死亡的最高浓度分别为0.15 mg/L、18 mg/L、4.5 mg/L、15 mg/L和10 mg/L，然后在这些浓度区间内重新设定药物浓度进行毒性试验。
将各种药物溶解于盛有20 L曝气自来水的水族箱中，分别达到设计浓度，水温维持在20～22℃，pH为6.5～7.0。然后将10条金鱼分别放到水族箱中，每个药物设2个平行组，同时设1个空白对照组。试验期间停止喂食，记录金鱼在试验开始后24 h、48 h、72 h和96 h的死亡情况，并及时剔除死亡个体。在药物浸泡96 h后换水，继续观察96 h，48 h换1次水。
bootvis试验结束后运用TSK法计算金鱼在96 h的半致死浓度(LC50)，并计算安全使用浓度(SC)。
SC=0.1×LC50
2.1 急性毒性
2.1.1 辛硫磷 当浓度为5.5 mg/L时，浸泡24 h金鱼出现死亡；当浓度≥6 mg/L时，浸泡48 h的死亡率≥50%，死亡数量随浸泡时间的延长而增加(表)。
试验初期，低浓度组(≤5 mg/L)金鱼的活动与对照组相似，集于中部水层缓慢游动，48 h内死亡个体极少；高浓度组(≥5.5 mg/L)金鱼快速游动，24 h内部分个体呼吸急促并伴有浮头现象，对外界刺激反应迟钝，活力明显弱于低浓度组。金鱼主要表现为呼吸短促，鳃丝充血，鱼体上浮，继而胸鳍和腹鳍根部变红，尾鳍、腹鳍弯曲，鱼体失去平衡，最后侧躺于水箱底部直至死亡。辛硫磷对金鱼的后续毒害作用较小，换水后金鱼基本没有死亡，水质不易变坏。
2.1.2 甲苯咪唑 从表看出，低浓度组(≤0.25 mg/L)前24 h内无金鱼死亡，当浓度≥0.35 mg/L时48 h的死亡率≥50%，死亡率随着浸泡时间的增加逐渐增加。
牙周袋当浓度≥0.25 mg/L时，随着试验时间的延长金鱼停留在角落里，活动缓慢、反应迟钝。主要表现为体表黏液分泌增多，并产生一层白絮状膜覆盖体表，鳃丝肿胀、颜变暗，鳃丝上附着絮状物，水质容易变成乳白。换水后，金鱼陆续出现死亡，体表絮状物逐渐脱落，水质容易变坏。换水96 h后绝大多数金鱼死亡。
2.1.3 从表看出，低浓度组(≤24 mg/L)金鱼死亡少，且死亡出现在浸泡48 h及以后；当浓度≥26 mg/L时，24 h出现死亡但数量较少，死亡率随浸泡时间的增加而逐渐增加。
试验初期，低浓度组(≤22 mg/L)金鱼的活动与对照组类似，24 h后金鱼开始出现轻微中毒症状，部分停留在水箱底部，失去活力；当浓度≥24 mg/L时，随着浸泡时间的延长部分金鱼身体失去平衡，头朝下方或上方；有的身体侧平，行动变缓，尾柄或脊柱弯曲。换水后金鱼基本没有出现死亡。
2.1.4 吡喹酮 当浓度≥20 mg/L时，金鱼在24 h内出现死亡；当浓度为40 mg/L时，24 h内死亡率达80%。金鱼的死亡率在浸泡24 h内和最后24 h增加较多(表)。
试验初期，低浓度组(15 mg/L)金鱼的活动与对照组类似，无明显中毒症状。高浓度组(≥20 米脂的婆姨性功能
mg/L)部分金鱼沉在水底，侧躺，容易受到惊吓，侧游或旋转游；呼吸困难、弯曲变形、体表黏液增加。换水后金鱼基本没有死亡，水质不易变坏。
2.1.5 狼毒大戟 低浓度组(≤14 mg/L)多数金鱼死亡出现在浸泡最后24 h内。随着浓度的升高死亡出现越早，浓度为16 mg/L时死亡集中于48 h和72 h；当浓度升至18 mg/L和20 mg/L时多数金鱼在浸泡48 h死亡(表)。
狼毒大戟乙酸乙酯提取物浓度>10 mg/L时，金鱼失去活力，停留在水箱底部，对外界刺激反应迟钝。换水后，金鱼出现死亡，浓度越高组死亡越多，水质易变成灰黑。
2.2 半数致死浓度及安全浓度
经计算，甲苯咪唑、辛硫磷、、吡喹酮和狼毒大戟乙酸乙酯提取物5种药物对金鱼的96 h半数致死浓度(LC50)分别为0.29 mg/L、5.49 mg/L、27.55 mg/L、29.22 mg/L和13.65 mg/L，安全浓度(SC)分别为0.029 mg/L、0.549 mg/L、2.755 mg/L、2.922 mg/L和1.365 mg/L。
鱼的资料1) 辛硫磷是以触杀和胃毒作用为主的有机磷农药，引起鱼类中毒的机制主要是通过对鱼类
乙酰胆碱酯酶(AchE)活性中心的丝氨酸进行羟基磷酸化，抑制AchE活性，造成体内乙酰胆碱大量蓄积，运动神经传递受阻来实现[20-21]。Datta C等[20]研究表明，干扰诸如线粒体呼吸、碳水化合物代谢、蛋白质合成等一系列生化过程也是有机磷农药对鱼类诱毒的分子机制之一。试验结果表明，辛硫磷对金鱼的毒害致死过程依次为呼吸短促，鳃丝充血，继而胸鳍和腹鳍根部变红，尾鳍、腹鳍弯曲，鱼体失去平衡，最后侧躺于水箱底部直至死亡。推测金鱼的中毒过程是由辛硫磷在体内不断蓄积，致使运动神经传递受阻和生化过程受扰共同引发所致。
辛硫磷对金鱼96 h的半数致死浓度为5.49 mg/L，与草鱼[13]相当，显著高于稀有鮈鲫(24.22 μg/L)[14]和黑鲷幼鱼[21]的半数致死浓度。毒性试验结束后，存活的金鱼基本没有出现死亡，说明适当浓度的辛硫磷对金鱼的后续毒害作用不明显，可以在生产中合理使用。
2) 为低毒、残留量较少、残留时间较短的有机磷杀虫剂，在水产养殖中广泛用于鱼类体外寄生甲壳动物、单殖吸虫及肠内寄生的部分蠕虫疾病等[22-24]。作为有机磷酯类药物，经机体吸收后与胆碱酯酶很快结合，形成不易水解的磷酰化胆碱酯酶，抑
制胆碱酯酶的活性，致使体内的乙酰胆碱不能分解成乙酸及胆碱而发生积蓄引起神经症状[25-26]。试验结果表明，对金鱼的安全浓度为2.755 mg/L，低于异育银鲫[15]、黑脊倒刺鲃[16]、淇河鲫[17]、云斑鮰[27]、南方大口鲶[28]，高于鳜[29]、黄颡鱼[30]、罗氏沼虾成虾和幼虾[31]。另外，相对于池塘遍洒的常用浓度(0.3～0.7 mg/L)，金鱼对的安全浓度较高，且对金鱼的后续毒性也较小，毒性试验结束后基本没有死亡。因此，可广泛用于单殖吸虫等寄生虫的防治。
3) 甲苯咪唑属于苯并咪唑类药物，被认为是一种常见的高效、低毒、广谱的驱虫类药物。甲苯咪唑主要通过抑制寄生虫对葡萄糖的吸收，致使虫体消耗糖原，同时抑制延胡索酸还原酶系统，阻碍三磷酸腺苷(ATP)的产生，最终使寄生虫衰竭死亡[32]。在水产养殖中被广泛用于防治欧洲鳗鲡伪指环虫、红鲷多微小吸盘吸虫成虫和幼虫等[33]。试验结果表明，甲苯咪唑对金鱼的半数致死浓度为0.29 mg/L，安全浓度为0.029 mg/L，低于建鲤[34]、黄河鲤[18，35]及花鳗鲡[19]的安全浓度及半数致死浓度。在试验浓度范围内，存活金鱼绝大多数在换水后96 h内死亡。说明，金鱼对甲苯咪唑非常敏感，在用药过程中一定要掌握好使用浓度，准确用药，以免造成大量死亡。
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