[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公开说明书
[11]公开号CN 1827770A
[43]公开日2006年9月6日
[21]申请号200510045965.3[22]申请日2005.03.01
[21]申请号200510045965.3
[71]申请人孙善林
地址116100辽宁省大连市甘井子区振兴路344
号
共同申请人王玉兰
[72]发明人孙善林 王玉兰 [51]Int.CI.C12P 7/40 (2006.01)C12R 1/645 (2006.01)
权利要求书 2 页 说明书 6 页
[54]发明名称
[57]摘要
发酵，连续流加化发酵后收取得到含有r－亚麻酸
的菌体并进行脱水、干燥。连续流加的糖液最好为
含有30－40％糖的糖液，连续流加40－50小时或在
40－50小时内分次间隔加入糖液，并连续发酵120－
180小时。用小克银汉霉诱变菌株并实施连续流加
发酵法，提高了生产率，增加菌体收率26.36％、
脂肪7.63％、r－亚麻酸22.24％，减少了杂菌污染
率，缩短发酵周期，降低了生产成本，宜于规模性
生产。
200510045965.3权 利 要 求 书第1/2页 1、一种微生物发酵生产r-亚麻酸的方法，菌种为小克银汉霉Cunninghamella echinulata(Thaxter)，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏菌种A S3.154为原始菌种，保藏号为C G M C C N O.0232，包括下列步骤：
(1)将筛选的菌种进行种子扩大培养
(2)用扩大培养的菌在发酵培养基发酵，其特征在于：发酵后，连续流加糖液进行充分发酵，连续流加化发酵后收取得到含有r-亚麻酸的菌体并进行脱水、干燥。
2、如权利要求1所说的微生物发酵生产r-亚麻酸的方法，其特征在于：连续流加的糖液为含有30-40％糖的糖液，连续流加40-50小时或在40-50小时内分次间隔加入糖液，并连续发酵120-180小时后，收取菌体。
3、如权利要求1所说的微生物发酵生产r-亚麻酸的方法，其特征在于：(1)50-100L种子罐中装60-70％种子培养基，灭菌后接入菌种(5-10％)，在25-30℃，通气量1∶0.2-1∶1(V、V、M)，搅拌转速100-250r p m，罐压0.03-0.06M P，发酵40-60小时，为一级种子。再在500L罐中装入60-70％种子培养基，灭菌后，接入一级种子(5-10％)，在通气量1∶0.2-1∶1(V、V、M)，搅拌转速100-250r p，；罐压0.03 -0.06M P，温度25-30℃，发酵40-60小时，为二级扩大种子；在5000L 罐中装入60-70％种子培养基，灭菌后，接入二级种子，接种量为5-10％，
200510045965.3权 利 要 求 书 第2/2页通气量1∶0.2-1∶1(V、V、M)，搅拌转速100-250r p m，罐压0.03-0.06MP；温度25-30℃，发酵40-60小时；
(2)连续流加化r-亚麻酸的发酵过程：
r-亚麻酸连续流加发酵，在30000-50000L发酵罐中装入50-60％基础发酵培养基，灭菌后，接种三级种子5-10％，通气量1∶0.2-1∶1 (V、V、M)，搅拌转速100-200r p m，罐压0.Q3-0.06M P；温度25-30℃。在上述发酵40-50小时后，连续流加一定量的糖液(30-40％)流加40-50小时，发酵120-180小时，
发酵终止后，收取菌体，脱水、烘干、粉碎，得干燥菌体，为制剂产品。
4、根据权利要求1或2或3所述的一种微生物连续流加法发酵r-亚麻酸的方法，其特征在于所述的步骤中：
(1)种子扩大培养中，种子培养基组成：2-4％蔗糖，0.1-0.5％酵母膏，0.1-0.5％蛋白胨，0.2-0.5％尿素，0.1-0.5％磷酸二氢钾，0.05 -0.1％碳酸钙，0.1-0.2％硫酸镁，0.00002-0.00004％VB1，0.0002-0.0005％硫酸锌，PH5.5-6.0。
(2)连续流加发酵中，发酵培养基：2-4％蔗糖，0.2-0.4％尿素，0.2-0.6％酵母膏，0.2-0.6％蛋白胨，0.2-0.5％磷酸二氢钾，0.1-0.15％碳酸钙，0.02-0.05％硫酸镁，0.00001-0.00003％V B1，0.0001-0.0005％硫酸铜，0.0002-0.0005％硫酸锌，0.0001-0.0005％硫酸锰，0.0001-0.0005％硫酸亚铁，PH5.5-6.0。
200510045965.3说 明 书第1/6页
微生物发酵生产r-亚麻酸的方法
技术领域：
本发明属于微生物技术领域，具体涉及了一种微生物发酵r-亚麻酸的技术。
背景技术：
r-亚麻酸是人体必需脂肪酸(维生素F)，又是高血脂、动脉硬化、心、脑血管病及糖尿病的药物，大多是从植物(月笕草种子)中提取。由于原料来源的限制和提取中化学物质残留，近年来微生物发酵r-亚麻酸是世界各国研究的热点。
微生物发酵r-亚麻酸产品，r-亚麻酸收率高，无毒副作用，富含多种氨基酸、维生素等丰富营养物质，还含有大量的S O D(超氧化物歧化酶)等抗菌衰老因子，因此被广泛应用于医药、保健功能性食品和化妆品。
微生物发酵是以糖作为主要转化r-亚麻酸的基质，而糖量的高低直接影响了r-亚麻酸的转化率。
微生物发酵中一次性投入高浓度的糖量，产生的高渗透压，影响了微生物的生长，同时也影响了r-亚麻酸高转化率。
目前微生物工业化生产存在着微生物适应期长，微生物生长慢，生物量低，r-亚麻酸收率低，发酵周期长问题，生产成本高等缺陷。 本发明所要解决的技术问题在于解决上述的问题和不足之处，设计一种便于产业化的发酵方法。
本发明提供了一种微生物在连续流加发酵r-亚麻酸的方法，该方法是，菌种为小克银汉霉Cunninghamell
a echinulata(Thaxter)，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏菌种AS3.154为原始菌种，保藏号为CGMCCNO.0232，包括下列步骤：
200510045965.3说 明 书 第2/6页
(1)将筛选的菌种进行种子扩大培养
(2)用扩大培养的菌在发酵培养基发酵，其特征在于：发酵后，连续流加糖液进行充分发酵，连续流加化发酵后收取得到含有r-亚麻酸的菌体并进行脱水、干燥。连续流加的糖液最好为含有30-40％糖的糖液，连续流加40-50小时或在40-50小时内分次间隔加入糖液，并连续发酵120-180小时后，收取菌体。这样，微生物在适宜的糖浓度下，随着糖的利用和消耗，不断连续流加一定的糖量物料使微生物在最佳的适宜的条件下发酵而获得较高的生物量和r-亚麻酸的产量。本发明的进一步优选实施方式是：
1、种子扩大培养
50-100L种子罐中装60-70％种子培养基，灭菌后接入菌种(5-10％)，在25-30℃，通气量1∶0.2-1∶1(V、V、M)，搅拌转速100 -250r p m，罐压0.03-0.06M P，发酵40-60小时，为一级种子。再在500L罐中装入60-70％种子培养基，灭菌后，接入一级种子(5-10％)，在通气量1∶0.2-1∶1(V、V、M)，搅拌转速100-250rp，；罐压0.03 -0.06M P，温度25-30℃，发酵40-60小时，为二级扩大种子。 在50
00L罐中装入60-70％种子培养基，灭菌后，接入二级种子，接种量为5-10％，通气量1∶0.2-1∶1(V、V、M)，搅拌转速100-250r p m，罐压0.03-0.06M P；温度25-30℃，发酵40-60小时。 种子培养基：2-4％蔗糖，0.1-0.5％酵母膏，0.1-0.5％蛋白胨，0.2 -0.5％尿素，0.1-0.5％磷酸二氢钾，0.05-0.1％碳酸钙，0.1-0.2％硫酸镁，0.00002-0.00004VB1，0.0002-0.0005％硫酸锌，PH5.5-6.0。
2、连续流加化r-亚麻酸的发酵过程：
r-亚麻酸连续流加发酵，在30000-50000L发酵罐中装入50-60％基础发酵培养基，灭菌后，接种三级种子5-10％，通气量1∶0.2-1∶1 (V、V、M)，搅拌转速100-200r p m，罐压0.03-0.06M P；温度25-
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