(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910281299.5
(22)申请日 2019.04.09
(71)申请人 山西大学
地址 030006 山西省太原市小店区坞城路
92号
(72)发明人 王伟 薄涛 王俊凯 许静
(74)专利代理机构 太原市科瑞达专利代理有限
公司 14101
代理人 刘宝贤
(51)Int.Cl.
C07K 14/825(2006.01)
C07K 17/08(2006.01)
C07K 17/10(2006.01)
C07K 17/14(2006.01)
C02F 3/34(2006.01)
C02F 101/20(2006.01)
(54)发明名称一种含有金属硫蛋白的固定化小球及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了一种含有金属硫蛋白的固定化小球，制备方法为：(1)培养表达金属硫蛋白的菌；(2)将培养液或菌体用PBS缓冲液悬起，反复冻融三次以上，超声破碎得破碎菌液；(3)将破碎菌液、二氧化硅加入到海藻酸钠-聚乙烯醇水溶液中，得混合液；(4)将混合液滴加到硼酸-氯化钡水溶液中，4℃固定4h，即得。本发明的含有金属硫蛋白的固定化小球，球体中含有大量细胞碎片、蛋白质等，重金属离子吸附位点多，有利于吸附位点与重金属离子的接触与结合，具有较好的吸附性能，可用于处理含有重金属的废水；具有良好的机械强度，具有良好的重复利用性，且不会造成二次污染；本发明的技术在重金属废水处 理中具有重要的应用价值。权利要求书1页 说明书9页 附图6页CN 110028577 A 2019.07.19
C N 110028577
A
权 利 要 求 书1/1页CN 110028577 A
1.一种含有金属硫蛋白的固定化小球的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)培养表达金属硫蛋白或重组金属硫蛋白的菌，得培养液；
(2)将培养液或菌体用PBS缓冲液悬起，制备菌悬液；将菌悬液反复冻融三次以上，超声破碎菌体，得到破碎菌液；
(3)将破碎菌液、二氧化硅加入到海藻酸钠-聚乙烯醇水溶液中，混匀，得混合液；
(4)4℃条件下，将混合液滴加到硼酸-氯化钡水溶液中，4℃固定4h，取出，用水清洗，即得含有金属硫蛋白的固定化小球。
2.根据权利要求1所述的含有金属硫蛋白的固定化小球的制备方法，其特征在于：所述表达金属硫蛋白或重组金属硫蛋白的菌，选自野生菌株，或通过基因重组技术得到的工程菌。
3.根据权利要求1所述的含有金属硫蛋白的固定化小球的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中，具体培养条件如下：取重组大肠杆菌，加入含氨苄的LB液体培养基中，37℃培养8～14h；取1ml菌液，加入到100ml LB液体培养基中，37℃培养至OD600为0.6～1.0，加入终浓度为0.5mmol/ml的IPTG，诱导培养4h，得培养液，10000r/min、4℃离心得菌体。
4.根据权利要求1所述的含有金属硫蛋白的固定化小球的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，菌体湿重与PBS缓冲液体积之比为0.04～0.08g/ml。
5.根据权利要求1所述的含有金属硫蛋白的固定化小球的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述
反复冻融是指在-80℃和37℃反复冻融。
6.根据权利要求1所述的含有金属硫蛋白的固定化小球的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述混合液中，海藻酸钠的浓度为1％～3％，聚乙烯醇的浓度为1％～3％，二氧化硅的浓度为0.5％，菌体浓度为10～20mg/ml。
7.根据权利要求1所述的含有金属硫蛋白的固定化小球的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述聚乙烯醇的分子量在15～20万。
8.根据权利要求1所述的含有金属硫蛋白的固定化小球的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中，所述硼酸-氯化钡水溶液中，硼酸的浓度为1％，氯化钡的浓度为3％。
9.利用权利要求1～8中任一项所述的含有金属硫蛋白的固定化小球的制备方法制备得到的含有金属硫蛋白的固定化小球。
10.权利要求9所述的含有金属硫蛋白的固定化小球在处理含有重金属的废水中的应用。
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