(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910290268.6
(22)申请日 2019.04.11
(71)申请人 中国农业大学
地址 100083 北京市海淀区清华东路17号
中国农业大学(东区)
(72)发明人 许文涛 罗云波 黄昆仑 张超
杜再慧 马玉婷
(51)Int.Cl.
C12Q 1/6888(2018.01)
C12Q 1/6844(2018.01)
C12Q 1/6804(2018.01)
C12N 15/11(2006.01)
(54)发明名称
盒
(57)摘要
本发明提供一种食品中马源成分快速检测
试剂盒，涉及生物物种鉴定技术领域。本发明首
LOC106782588，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所
示，其位于第25染体上，在马物种中拷贝数恒
定，不存在等位基因变异，可作为鉴定马源的靶
基因。以该基因为靶序列设计了LAMP扩增引物，
与LAMP反应液一起进行恒温扩增，LAMP反应产物
金核酸试纸条检测构成快速检测试剂盒，可快
速、灵敏地检测食品中的马源成分，检测灵敏度
可达0.2％(w/w)。本发明试剂盒使用方法简单、
成本低廉，反应结果易于观察，特异性好，非常适
用于现场实时检测。
权利要求书1页 说明书5页序列表2页 附图2页CN 109852705 A 2019.06.07
C N 109852705
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109852705 A
1.一种用于检测食品中马源成分的基因，其为内标准基因，具有SEQ ID NO.1所示的序列。
2.权利要求1所述的基因在检测马源成分中的应用。
3.权利要求1所述的基因在食品马成分鉴定中的应用。
4.用于检测权利要求1所述基因的特异性LAMP引物组合，包括序列如SEQ ID NO.2-5所示的以下4条引物：
F3：5’-TGGATCTGAGGAGATGAGG-3’；
B3：5’-TTGAGGAGCATAGTCTTGAA-3’；
FIP：5’-ATAGCTCCATCAGATCCTGGGCCAGGGTGCAGTAAAAGC-3’；
BIP：5’-CAAGGGAAGGTAGAGTCAGAGGGGAGGATGTCAGTATGAGAG-3’。
5.权利要求4所述的特异性LAMP引物组合在马源成分鉴定中的应用。
6.权利要求4所述的特异性LAMP引物组合在制备马源成分检测试剂盒或检测试剂中的应用。
7.一种检测食品中马源成分的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)待测样品提取DNA；
(2)以提取DNA为模板，采用权利要求4所述特异性LAMP引物组合进行LAMP检测；
(3)结果判断：采用胶体金核酸试纸条进行结果判断，检测T线和质控C线均有红条带，含有目的基因；质控C线有红条带，而检测T线无条带，不含有目的基因。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述LAMP检测，其25μL LAMP检测体系的具体配置为：1x Thermopol buffer，0.4mM dNTP，3mM MgSO4，1.0M甜菜碱，1.6μM引物FIP，1.6μM引物BIP，0.2μM引物F3，0.2μM引物B3，8U Bst DNA聚合酶大片段。
9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于，LAMP检测反应条件为：60-65℃恒温20min，85℃5min，然后终止反应。
10.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的胶体金核酸试纸条包含胶体金核酸试纸条测试线与质控线，测试线标记有FITC抗体，质控线标记有生物素二抗，结合垫有胶体金-生物素抗体标记物。
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