(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010736766.1
(22)申请日 2020.07.28
国家果蔬产品及加工食品质量监督
检验中心）
地址 330003 江西省南昌市青云谱区井冈
山大道213号
(72)发明人 王栋 张威 匡佩琳 郭平
胡重怡 郭丹 兰伟
(74)专利代理机构 南昌大牛知识产权代理事务
所(普通合伙) 36135
代理人 喻莎
(51)Int.Cl.
G01N 1/28(2006.01)
G01N 1/38(2006.01)
G01N 1/34(2006.01)G01N 30/06(2006.01)G01N 30/14(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明属于残留化学物质分析检测技术领
域，公开了一种水产品中残留检测的样品
将待测样品均质后，取样，加入乙腈‑水溶液涡旋
提取，离心分离，上清液中加入无机盐混匀，溶液
分层，取上层有机相层，加入正己烷去脂，去脂后
的有机溶液过C18‑PSA柱去除杂质，氮气流吹干，
得到净化残留物。使用该方法对复杂成分的动物
源性食品进行提取净化前处理，操作简单、效率
高、成本低，适用于免疫分析技术、液相谱‑质
谱法、气相谱‑
质谱法测定残留量。权利要求书1页 说明书3页 附图1页CN 111829852 A 2020.10.27
C N 111829852
A
1.一种水产品中残留检测的样品前处理方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：将待测样品均质后，取样，加入乙腈-水溶液涡旋提取，离心分离，上清液中加入无机盐混匀，溶液分层，取上层有机相层，加入正己烷去脂，去脂后的有机溶液过C 18-PSA柱去除杂质，氮气流吹干，得到净化残留物。
2.根据权利要求1所述水产品中残留检测的样品前处理方法，其特征在于，所述乙腈-水溶液为95％的乙腈-水溶液。
3.根据权利要求1所述水产品中残留检测的样品前处理方法，其特征在于，所述取样的质量与乙腈-水溶液的体积比为2.5-3.5：10。
4.根据权利要求1所述水产品中残留检测的样品前处理方法，其特征在于，所述无机盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸钠、硫酸镁中的一种或多种；优选地，所述无机盐为氯化钠。
5.根据权利要求1所述水产品中残留检测的样品前处理方法，其特征在于，所述无机盐与取样的质量比为3：0.8-1.2。
6.根据权利要求1所述水产品中残留检测的样品前处理方法，其特征在于，所述取样的质量与正己烷的体积比为3：4-6。
7.根据权利要求1所述水产品中残留检测的样品前处理方法，其特征在于，所述去脂后的有机溶液
过C 18-PSA柱去除杂质的方法包括：
(1)用乙腈活化固相萃取柱；
(2)去脂后的有机溶液过固相萃取柱；
(3)用乙腈漂洗柱床，合并穿柱液。
8.权利要求1-7任一项所述水产品中残留检测的样品前处理方法的应用，其特征在于，所述应用为：得到净化残留物后经水相溶液或有机相溶液复溶，使用免疫分析技术、液相谱-质谱法或气相谱-质谱法测定残留量。
9.根据权利要求8所述水产品中残留检测的样品前处理方法的应用，其特征在于，所述测定残留量的技术为免疫分析技术时，复溶方法为：加入PBS溶液，涡旋，将复溶。
10.根据权利要求8所述水产品中残留检测的样品前处理方法的应用，其特征在于，所述测定残留量的技术为液相谱-质谱法或气相谱-质谱法时，复溶方法为：加入乙腈，涡旋，将复溶，过0.22μm滤膜；或者加入10％的乙腈-水溶液，涡旋，过0.22μm滤膜。
权 利 要 求 书1/1页CN 111829852 A
一种水产品中残留检测的样品前处理方法及其应用
技术领域
[0001]本发明涉及残留化学物质分析检测技术领域，具体是涉及一种水产品中残留检测的样品前处理方法及其应用。
背景技术
[0002](Diazepam)又称，是一种中枢神经系统镇静剂类药物，在临床上主要用于焦虑、失眠、癫痫、惊厥等症状，但对人体健康有一定副作用，不建议长期服用。通常而言，一般剂量或较大剂量，常有嗜睡、疲乏、头昏及共济失调、头痛、语言不清、震颤、心动过缓、低血压、视物模糊及复视等副作用，主要的成因就是镇定过度、药物持续残留。农业部公告第235号禁止使用的药品就包括，然而，水产养殖及其运输过程中常常非法使用。由于能够在动物体内积聚残留和在食物链富集，人长期食用含残留的食品副作用较多，不亚于长期服用该药物，严重危害健康，例如肝脏负担加重，记忆力受影响，同时运动神经和肌肉功能受到抑制。
[0003]为保证食品质量，在食品领域对残留量的检测研究较为重视，但目前残留量检测标准较多，主要集中在牲畜、水产品等动物源性食品方面，且大多存在缺陷。例如，GB 29697-2013《食
品安全国家标准动物性食品中和多残留的测定气相谱-质谱法》，适用于猪肌肉组织中和的检测，存在提取和净化过程实验操作复杂、前处理时间较长等缺点。又如，SN/T 3235-2012《出口动物源食品中多类禁用药物残留量检测方法液相谱-质谱/质谱法》，适用于动物肝脏、肌肉、水产品和牛奶中多类禁用药物的检测，同样存在提取和净化过程操作复杂繁琐的缺点，且该方法还存在需要内标液、添加回收率较低等缺点。然而，食品安全检验检测机构需要检测的样品繁多，工作量大，迫切需要操作简便、高效、廉价的样品前处理方法，以提高工作效率，更好地为市场监管服务。
发明内容
[0004]本发明为了克服上述背景技术的不足，提供了一种水产品中残留检测的样品前处理方法及其应用，使用该方法对复杂成分的动物源性食品进行提取净化前处理，操作简单、效率高、成本低，适用于免疫分析技术、液相谱-质谱法、气相谱-质谱法测定残留量。
[0005]为达到本发明的目的，本发明水产品中残留检测的样品前处理方法包括以下步骤：将待测样品均质后，取样，加入乙腈-水溶液涡旋提取，离心分离，上清液中加入无机盐混匀，溶液分层，取上层有机相层，加入正己烷去脂，去脂后的有机溶液过C18-PSA柱去除杂质，氮气流吹干，得到净化残留物。
[0006]进一步地，所述乙腈-水溶液为95％(v:v)的乙腈-水溶液。
[0007]进一步地，所述取样的质量与乙腈-水溶液的体积比为2.5-3.5：10。
[0008]本发明中样品提取后，加入无机盐，利用盐析反应，使水相和有机相分层，便可达
到分离除去水相的目的。
[0009]进一步地，所述无机盐为氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸钠、硫酸镁中的一种或多种。
[0010]优选地，在本发明的一些实施例中，所述无机盐为氯化钠。
[0011]进一步地，所述无机盐与取样的质量比为3：0.8-1.2。
[0012]本发明方法中所述去脂意为除去油脂及其它亲油性杂质，即在有机相中加入正己烷，除去提取液中的油脂及其它亲油性杂质。
[0013]进一步地，所述取样的质量与正己烷的体积比为3：4-6。
[0014]本发明中去脂后的有机溶液过C18-PSA柱可进一步地除去杂质，达到净化提取液的目的，所述去脂后的有机溶液过C18-PSA柱去除杂质的方法包括：
[0015](1)用乙腈活化固相萃取柱；
[0016](2)去脂后的有机溶液过固相萃取柱；
[0017](3)用乙腈漂洗柱床，合并穿柱液。
[0018]本发明所述水产品中残留检测的样品前处理方法适用于各类鱼肉组织中的提取、净化，所述水产品中残留检测的样品前处理方法的应用为：得到净化残留物后经水相溶液或有机相溶液复溶，使用免疫分析技术、液相谱-质谱法或气相谱-质谱法测定残留量。
[0019]进一步地，所述测定残留量的技术为免疫分析技术时，复溶方法为：加入PBS溶液，涡旋，将复溶。
[0020]进一步地，所述测定残留量的技术为液相谱-质谱法或气相谱-质谱法时，复溶方法为：加入乙腈，涡旋，将复溶，过0.22μm滤膜；或者加入乙腈-水溶液(10％，v:v)，涡旋，过0.22μm滤膜。
[0021]与现有技术相比，本发明的优点如下：
[0022](1)本发明方法中用乙腈-水溶液作为提取液，可使样品组织完全分散开，避免结团，以最大化地增大比表面积，达到充分提取残留的目的；
[0023](2)本发明所述残留检测的样品前处理方法可与免疫分析技术、气相谱-质谱、液相谱-质谱等检测方法兼容；
[0024](3)本发明所述样品前处理方法及其应用具有快速、简单、高效、低成本等优点，是一种理想的残留检测前处理方法。
附图说明
[0025]图1是本发明实施例1所述水产品中残留提取、净化方法流程图；[0026]图2是本发明实施例2提供的净化残留物复溶后检测流程图。
具体实施方式
[0027]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。应当理解，以下描述仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0028]本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
[0029]本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显只指单数形式。
[0030]此外，下面所描述的术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不是必须针对相同的实施例或示例。而且，本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
[0031]实施例1
[0032]一种水产品中残留检测的样品前处理方法，所述方法包括以下步骤：[0033](1)用均质器对样品进行均质，均质后取3g样品；
[0034](2)加入乙腈-水溶液(95％，v:v)10mL，涡旋，充分提取目标化合物；
[0035](3)离心，取上清液，加入氯化钠颗粒1g，混匀，发生盐析反应使溶液分层；[0036](4)取上层有机相，加入5mL正己烷，涡旋，溶液分层后去掉上层正己烷层，以除去油脂及其它亲油性杂质；
[0037](5)C18-PSA固相萃取柱经3mL乙腈活化后，加入步骤(4)所得提取液过柱，收集穿柱液，此过程是
为了进一步除去杂质；
[0038](6)穿柱液在50℃下氮气流吹干，得到净化残留物。
[0039]实施例2
[0040]将实施例1所述水产品中残留检测的样品前处理方法用于检测技术：得到净化残留物后经水相溶液或有机相溶液复溶，使用免疫分析技术、液相谱-质谱法或气相谱-质谱法测定残留量。
[0041]其中，所述复溶方法包括但不限于：
[0042](1)适用于免疫分析技术的复溶方法：加入PBS溶液(pH 7.4，10mM)0.3mL，涡旋30秒，将复溶；
[0043](2)适用于质谱检测的复溶方法：加入1mL乙腈，涡旋30秒，将复溶，过0.22μm滤膜；或者加入1mL乙腈-水溶液(10％，v:v)，涡旋30秒，过0.22μm滤膜。
[0044]本发明水产品中残留检测的样品前处理方法可与免疫分析技术、气相谱-质谱、液相谱-质谱等检测方法兼容：在得到净化残留物后，根据不同的检测技术选择相应的残留物复溶方法，如上述
复溶方法(1)所得复溶液可直接用于胶体金免疫层析试纸条或酶联免疫吸附检测，上述复溶方法(2)所得复溶液可直接供气相谱-质谱测定。[0045]本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议