(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011567463.8
(22)申请日 2020.12.25
(71)申请人 中国医科大学附属第一医院
地址 110000 辽宁省沈阳市和平区南京北
街155号
(72)发明人 王铮 姜明燕 李凯 万龙
(74)专利代理机构 沈阳友和欣知识产权代理事
务所(普通合伙) 21254
代理人 杨
(51)Int.Cl.
A61K 31/715(2006.01)
A61K 36/481(2006.01)
A61K 9/14(2006.01)
A61K 47/36(2006.01)
A61P 37/04(2006.01)
A61P 37/02(2006.01)A61P 31/00(2006.01)A61P 35/00(2006.01)
(54)发明名称低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒及制备方法、用途(57)摘要本发明属于药品制备技术领域，具体提供一种低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒及制备方法、用途，采用喷雾干燥的方法进行制备，具体包括称取黄芪多糖，溶于乙酸溶液中，超声后，一定转速下搅拌一定时间，得到黄芪多糖‑乙酸混合液；将混合液在一定转速下离心，取上清液，称取壳聚糖加入上清液中，超声后一定转速下搅拌一定时间，得低分散度壳聚糖载黄芪多糖溶液；将低分散度壳聚糖载黄芪多糖溶液进行喷雾干燥，得到低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒。本发明提供的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒增加了黄芪多糖的吸收，并且具有免疫系统增强和免 疫系统纠正的作用。权利要求书1页 说明书5页 附图5页CN 112618565 A 2021.04.09
C N 112618565
A
1.低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒的制备方法，其特征在于，采用喷雾干燥的方法进行制备，具体包括如下步骤：
1)称取1～2.831g黄芪多糖，溶于2000～2200ml的0.5～0.65％乙酸溶液中，超声10～15min后，500～600rpm下搅拌10‑12小时，得到黄芪多糖‑乙酸混合液；
2)将混合液在4000～4500rpm下离心10～15min，取上清液，称取5～6g壳聚糖加入上清液中，超声10～15min，600～650rpm下搅拌10‑12小时，得低分散度壳聚糖载黄芪多糖溶液；
3)将步骤2)制备的低分散度壳聚糖载黄芪多糖溶液进行喷雾干燥，参数设置为入口温度：120～125℃，蠕动泵进样速度：3～4mL/min，空气压缩机的喷雾器流量：650～700L/h，吸气机功率：90～95％，得到低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒。
2.如权利要求1所述的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中，称取黄芪多糖的质量为2.831g，溶于2000ml的0.5％乙酸溶液中。
3.如权利要求1所述的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中，使用的喷雾干燥仪的喷头为0.7mm。
4.如权利要求1或2或3所述的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒的制备方法制备的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒。
5.如权利要求1或2或3所述的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒的制备方法制备的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒在免疫系统增强和免疫系统纠正上的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述免疫系统增强包括免疫缺陷疾病、慢性感染疾病和癌
症的过程中造成的免疫系统低下的增强；所述免疫系统纠正包括用于自身免疫性疾病。
权 利 要 求 书1/1页CN 112618565 A
低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒及制备方法、用途
技术领域
[0001]本发明属于药品制备技术领域，具体提供一种低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒及制备方法、用途。
背景技术
[0002]癌症的发病率、死亡率、复发率均高，严重威胁着人们的健康。很多病人难以早期诊断，就诊时多已经处于进展期，手术疗效欠佳或失去手术的机会，术后化学药物在癌症综合中发挥了重要作用。但现有的化疗药物在抑制和杀伤肿瘤组织的同时，大多引起其他组织细胞的破坏和损伤，局部组织细胞变性坏死，出现炎症反应。以中药联合胃癌患者，可以在保证化疗药物效果的同时减少毒副反应，改善机体免疫功能，减轻炎症反应，这已经成为目前的研究热点，并取得了显著效果。传统中药黄芪益气补虚，适用于因化疗后白细胞减少、免疫功能低下的肿瘤患者。黄芪多糖是黄芪的主要有效成分，在肿瘤中发挥了较好的作用。但黄芪多糖是否能改善癌症术后的炎性反应报道较少，药物研发
及临床应用尚不成熟。
[0003]由于黄芪多糖(Astragalus polysaccharide，APS)分子量过大，水溶性差，吸收不好，生物利用度低，容易受胃酸影响(胃溶型)等因素，从而影响效果，这也是目前限制黄芪多糖广泛应用于癌症临床的主要因素。
发明内容
[0004]为了解决上述技术问题，本发明提供了一种低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒及制备方法、用途。
[0005]本发明是这样实现的，提供一种低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒的制备方法，采用喷雾干燥的方法进行制备，具体包括如下步骤：
[0006]1)称取1～2.831g黄芪多糖，溶于2000～2200ml的0.5～0.65％乙酸溶液中，超声10～15min后，500～600rpm下搅拌10‑12小时，得到黄芪多糖‑乙酸混合液；
[0007]2)将混合液在4000～4500rpm下离心10～15min，取上清液，称取5～6g壳聚糖加入上清液中，超声10～15min，600～650rpm下搅拌10‑12小时，得低分散度壳聚糖载黄芪多糖溶液；
[0008]3)将步骤2)制备的低分散度壳聚糖载黄芪多糖溶液进行喷雾干燥，参数设置为入口温度：120～125℃，蠕动泵进样速度：3～4mL/min，空气压缩机的喷雾器流量：650～700L/ h，吸气机功率：90～95％，得到低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒。
[0009]优选地，所述步骤1)中，称取黄芪多糖的质量为2.831g，溶于2000ml的0.5％乙酸溶液中。
[0010]进一步优选，所述步骤3)中，使用的喷雾干燥仪的喷头为0.7mm。
[0011]本发明还提供一种上述的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒的制备方法制备的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒。
[0012]本发明还提供一种上述的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒的制备方法制备的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒在免疫系统增强和免疫系统纠正上的应用。
[0013]优选地，所述免疫系统增强包括免疫缺陷疾病、慢性感染疾病和癌症的过程中造成的免疫系统低下的增强；所述免疫系统纠正包括用于自身免疫性疾病。[0014]与现有技术相比，本发明的优点在于：
[0015]选取生物相容性好的壳聚糖作为黄芪多糖纳米载体，不但可以增加黄芪多糖的稳定性，而且壳聚糖作为阳离子型聚合物，其独特的生物学性质可使其可以打开肠道的紧密连接，进而增加黄芪多糖的口
服吸收。黄芪多糖的免疫调节作用能够控制Th1/Th2细胞比例的平衡，使其不但可以用于免疫系统的增强，也可以用于免疫系统亢进疾病。免疫增强作用用于免疫缺陷疾病、慢性感染和作为癌症的辅助。免疫纠正作用可用于自身免疫性疾病如鼻炎，红斑狼疮等。
附图说明
[0016]图1为采用本发明提供的喷雾干燥的方法制备的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒外观照片；
[0017]图2为图1中低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒的透射电镜照片；
[0018]图3为实施例4中按照冷冻干燥的方法制备的低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒外观照片；
[0019]图4为图3中低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒的透射电镜照片；
[0020]图5为低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒对胃癌小鼠脾指数的影响；
[0021]图6为低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒对胃癌小鼠胸腺指数的影响；
[0022]图7为低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒对胃癌小鼠T淋巴细胞百分比的影响；[0023]图8为低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒对胃癌小鼠CD4+/CD8+的比值的影响；[0024]图9为低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒对胃癌小鼠调节血浆细胞因子IFN‑γ和IL‑4水平的影响；
[0025]图10为低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒对胃癌小鼠IFN‑γ/IL‑4的比值的影响。
具体实施方式
[0026]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。
[0027]实施例1、
[0028]1)称取1g黄芪多糖，溶于2000ml的0.5％乙酸溶液中，超声10min后，500rpm下搅拌10‑12小时，得到黄芪多糖‑乙酸混合液；
[0029]2)将黄芪多糖‑乙酸混合液在4000rpm下离心10min取上清液，沉淀弃去，称取5g壳聚糖加入上清液中，超声10min，600rpm下搅拌10‑12小时，得低分散度壳聚糖载黄芪多糖溶液；
[0030]3)将低分散度壳聚糖载黄芪多糖溶液转移至喷雾干燥仪B‑290的样品台上，备用，
喷嘴选最小的喷头(0.7mm)。仪器参数设置为入口温度(inlet temperature)：120℃，蠕动泵进样速度(feed rate)：3mL/min(12.4％)，空气压缩机的喷雾器流量(spray air flow)：调至4cm高(约667L/h)，吸气机功率(aspirator flow)设为90％，得低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒粉末。
[0031]4)精密称取干燥恒重的黄芪多糖50mg，置100mL容量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液(每1mL含黄芪多糖0.50mg)。应用蒽酮‑硫酸法测定总糖含量，取供试液0.5mL，加入0.5mL水，将试管置于冰水浴中加入蒽酮试剂4.0mL，摇匀。沸水浴15min，静置10min至室温，以空白管调零测定吸光度，将吸光度带入D‑葡萄糖对照品标准曲线回归方程计算总糖含量。可得黄芪多糖的百分含量即载药量为50％。
[0032]实施例2、
[0033]1)称取1.5g黄芪多糖，溶于2000ml的0.5％乙酸溶液中，超声10min后，500rpm下搅拌10‑12小时。
[0034]2)将黄芪多糖‑乙酸混合液在4000rpm下离心10min取上清液，沉淀弃去，称取5g壳聚糖加入上清液中，超声10min，600rpm下搅拌10‑12小时，得低分散度壳聚糖载黄芪多糖溶液。
[0035]3)将低分散度壳聚糖载黄芪多糖溶液转移至喷雾干燥仪B‑290的样品台上，备用。喷嘴选最小的喷头(0.7mm)。仪器参数设置为入口温度(inlet temperature)：120℃，蠕动泵进样速度(feed rate)：3mL/min(12.4％)，空气压缩机的喷雾器流量(spray air flow)：调至4cm高(约667L/h)，吸气机功率(aspirator flow)设为90％。得低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒粉末。
[0036]4)精密称取干燥恒重的黄芪多糖50mg，置100mL容量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液(每1mL含黄芪多糖0.50mg)。应用蒽酮‑硫酸法测定总糖含量，取供试液0.5mL，加入0.5mL水，将试管置于冰水浴中加入蒽酮试剂4.0mL，摇匀。沸水浴15min，静置10min至室温，以空白管调零测定吸光度，将吸光度带入D‑葡萄糖对照品标准曲线回归方程计算总糖含量。可得黄芪多糖的百分含量即载药量为60％。
[0037]实施例3、
[0038]1)称取2.831g黄芪多糖，溶于2000ml的0.5％乙酸溶液中，超声10min后，500rpm下搅拌10‑12小时。
[0039]2)将低分散度壳聚糖载黄芪多糖溶液在4000rpm下离心10min取上清液，沉淀弃去。称取5g壳聚糖加入上清液中，超声10min，600rpm下搅拌过夜，得低分散度壳聚糖载黄芪多糖溶液。
[0040]3)将低分散度壳聚糖载黄芪多糖溶液转移至喷雾干燥仪B‑290的样品台上，备用。喷嘴选最小的喷头(0.7mm)。仪器参数设置为入口温度(inlet temperature)：120℃，蠕动泵进样速度(feed rate)：3mL/min(12.4％)，空气压缩机的喷雾器流量(spray air flow)：调至4cm高(约667L/h)，吸气机功率(aspirator flow)设为90％。得低分散度壳聚糖载黄芪多糖纳米粒粉末。
[0041]4)精密称取干燥恒重的黄芪多糖50mg，置100mL容量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液(每1mL含黄芪多糖0.50mg)。应用蒽酮‑硫酸法测定总糖含量，取供试液0.5mL，加入0.5mL水，将试管置于冰水浴中加入蒽酮试剂4.0mL，摇匀。沸水浴15min，
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