(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011411325.0
(22)申请日 2020.12.04
(71)申请人 浙江永太手心医药科技有限公司
地址 317016 浙江省台州市临海市头门港
新区东海第四大道7号
申请人 浙江永太科技股份有限公司
(72)发明人 夏海建 张峰 覃晓
(74)专利代理机构 北京精金石知识产权代理有
限公司 11470
代理人 尉月丽
(51)Int.Cl.
C07D 487/04(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种酶法制备西格列汀的后
处理方法及西格列汀游离碱，属于化工制药技术
领域。包括以下步骤：将酶法制备西格列汀的反
余反应液pH到5‑9，蒸出水，除去溶解在水中的有
机溶剂；降温，调整剩余反应液pH到11‑13，使物
料固化分散，抽滤，烘干，得西格列汀游离碱。该
方法稳定性高，操作简单，成本低，能够得到高纯
度、高产量的西格列汀游离碱固体粉末，便于废
水处理，
适用于工业化生产。权利要求书1页 说明书5页 附图2页CN 112442040 A 2021.03.05
C N 112442040
A
1.一种酶法制备西格列汀的后处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将酶法制备西格列汀的反应液酸化，除去酶、杂质和未反应的原料；
(2)调整剩余反应液pH到5-9，蒸出水，除去溶解在水中的有机溶剂；
(3)降温，调整剩余反应液pH到11-13，使物料固化分散，干燥后得西格列汀游离碱固体粉末。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶法制备西格列汀以醋酸异丙酯作为助溶剂，步骤为：
反应体系：西格列汀前体酮、醋酸异丙酯、异丙胺、磷酸吡哆醛、纯酶液，加入三乙醇胺-HCl缓冲液，反应，得酶法制备西格列汀的反应液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述除去酶、杂质和未反应的原料是指：过滤除去酶，滤液经有机溶剂萃取除去杂质和未反应的原料。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述除去酶、杂质和未反应的原料是指：加入硅藻土抽滤除去酶，滤液用二氯甲烷萃取除去杂质和未反应的原料。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)和步骤(3)中，调整剩余反应液pH 是用无机碱调节。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，调整剩余反应液pH到7。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述蒸出水的量不低于20％。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，调整剩余反应液pH到12。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述使物料固化分散通过搅拌完成，所述搅拌的时间为4-16小时。
10.根据权利要求1-9任一项所述的方法制备得到的西格列汀游离碱固体粉末。
权 利 要 求 书1/1页CN 112442040 A
一种酶法制备西格列汀的后处理方法及西格列汀游离碱
技术领域
[0001]本发明涉及属于化工制药技术领域，具体涉及一种酶法制备西格列汀的后处理方法及西格列汀游离碱。
背景技术
[0002]磷酸西格列汀(Sitagliptin phosphate)系美国Merck公司开发，于2006年10月通过FDA批准上市的第一个二肽基肽酶(DPP-IV)抑制剂，2009年11月6日在第十三届中华医药会糖尿病学会年会上，国家食品药品监督管理局已正式批准了商品名捷诺维(Januvia)在中国上市。磷酸西格列汀主要用于II型糖尿病，其单用或与二甲双胍，比格列酮合用都有明显的降血糖作用，且服用安全，耐受性好，不良反应少。磷酸西格列汀II型糖尿病药物一直处于热点用药之一，目前市售价格昂贵。
[0003]其结构如下：
[0004]
[0005]西格列汀游离碱是磷酸西格列汀成磷酸盐前的关键中间体，其结构如下：
[0006]
[0007]西格列汀及其中间体的合成既有完全化学法的合成，也有化学法和酶法相结合的合成。美国专利US6699871公开了一种西格列汀的化学合成法通过手性源来诱导出手性alpha-氨基酸，而后通过重氮化反应产生beta-氨基酸来构建手性中心合成西格列汀。该路线所需的原料成本相对较高，反应繁琐，且产业化过程中和产品质量都难以控制。[0008]专利CN110857303A中公开一种西格列汀游离碱单体的制备方法，通过先将西格列汀成磷酸盐，盐酸盐等其他的盐经提纯拿到固体西格列汀盐后，再经碱游离得到西格列汀游离碱单体。该工艺先将西格列汀游离碱与有机酸或无机酸反应生成西格列汀盐，再将西格列汀盐经碱游离得到西格列汀游离碱单体，操作复杂，收率不高。
[0009]对于化学-酶法制备西格列汀而言，关键是要获得一种ω-氨基转移酶，其能够催化西格列汀前体酮
不对称转氨生成西格列汀。酶法制备磷酸西格列汀操作简单，成本低，适用于工业化生产，具有很高的经济效益。专利CN107384887A公开了一种氨基转移酶突变体在生物催化合成西格列汀中的应用，后处理过程在酸性条件下用有机溶剂萃取除去杂质和未反应的原料的过程，再调碱用有机溶剂萃取产物，蒸干有机溶剂得到西格列汀游离碱为
粘稠的油状物，不利于保存和运输。
[0010]专利CN110904066A公开了一种重组R-ω-转氨酶及突变体以及其在不对称合成西他列汀中的应用。该发明提供了具有更高活性(582.4U/g)和立体选择性(e.e.值99.9％)的R-ω-TA突变体，可催化500mM底物转化为西他列汀，转化率高达99％。该专利未公开后处理工序，直接得到的西格列汀溶液纯度不高，不便储运，现有技术未提供较好的后处理方法。[0011]有鉴于此，本申请提供一种酶法制备西格列汀的后处理方法，所得西格列汀游离碱为固体粉末，便于储存运输，稳定性高，该方法操作简单，成本低，省去DMSO的使用，便于废水的处理，更适用于工业化生产。
发明内容
[0012]本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种酶法制备西格列汀的后处理方法及西格列汀游离碱，该方法稳定性高，操作简单，成本低，能够得到高纯度、高产量的西格列汀游离碱，工艺中省去DMSO便于废水的处理，适用于工业化生产，具有很高的经济效益。所得西格列汀游离碱为固体粉末，
便于储存运输以及商业化生产和销售。
[0013]为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
[0014]一方面，本申请提供一种酶法制备西格列汀的后处理方法，包括以下步骤：[0015](1)将酶法制备西格列汀的反应液酸化，除去酶、杂质和未反应的原料；
[0016](2)调整剩余反应液pH到5-9，蒸出水，除去溶解在水中的有机溶剂；
[0017](3)降温，调整剩余反应液pH到11-13，使物料固化分散，干燥后得西格列汀游离碱固体粉末。
[0018]优选的，所述酶法制备西格列汀参照浙江工业大学专利CN110904066A进行，以醋酸异丙酯作为助溶剂，步骤为：
[0019]反应体系：西格列汀前体酮、醋酸异丙酯、异丙胺、磷酸吡哆醛(PLP)、纯酶液，加入三乙醇胺-HCl缓冲液(pH9.0)，反应得酶法制备西格列汀的反应液。
[0020]进一步的，所述酶法制备西格列汀步骤具体为：
[0021]反应体系：50mM西格列汀前体酮、醋酸异丙酯100g、240mM异丙胺、2mM PLP、1mL纯酶液，
加入pH为9.0的三乙醇胺-HCl缓冲液至总体系200mL，在45℃和400r/min条件下反应，得酶法制备西格列汀的反应液。
[0022]优选的，步骤(1)中，所述酸化为用酸调整pH至1-2，进一步优选为用盐酸调整pH至1-2。
[0023]优选的，步骤(1)中，所述除去酶、杂质和未反应的原料是指：过滤除去酶，滤液经有机溶剂萃取除去杂质和未反应的原料；进一步优选的，加入硅藻土抽滤除去酶，滤液用二氯甲烷萃取除去杂质和未反应的原料。
[0024]步骤(1)经过酸化处理，因为在酸性条件下，西格列汀成盐溶解在水中，未反应的原料和杂质经有机溶剂萃取后可以除去，有效的提高西格列汀纯度，有利于得到高纯度的磷酸西格列汀。
[0025]优选的，步骤(2)中，调整剩余反应液pH是用无机碱调节，进一步优选为液碱。[0026]优选的，步骤(2)中，调整剩余反应液pH到7。
[0027]优选的，步骤(2)中，所述蒸出水的方法为蒸馏，可选自减压蒸馏或长压蒸馏。
[0028]优选的，步骤(2)中，所述蒸出水的量不低于20％。
[0029]步骤(2)调pH至5-9左右，可防止部分西格列汀会水解成以下两种化合物：
[0030]
[0031]用有机溶剂萃取杂质和未反应的原料后，会有部分有机溶剂溶解在水中，增加了西格列汀在水中的溶解度，部分西格列汀溶解在水中，使西格列汀游离碱的收率偏低。在接近中性的条件下，升温减压蒸馏或长压蒸馏，蒸出部分水，可以将水中溶解的有机溶剂尽可能的除去。
[0032]优选的，步骤(3)中，所述降温为降至室温。
[0033]优选的，步骤(3)中，调整剩余反应液pH到12。
[0034]优选的，步骤(3)中，所述使物料固化分散通过搅拌完成，所述搅拌的时间为4-16小时。
[0035]优选的，步骤(3)中，所述干燥包括抽滤后烘干的步骤，所述烘干的温度为50-90℃，进一步优选为60-70℃。
[0036]另一方面，本申请还提供根据上述制备方法制备得到的西格列汀游离碱固体粉末。
[0037]与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0038](1)本发明的制备方法稳定性高，操作简单，成本低，能够得到高产量的西格列汀游离碱固体粉末，工艺中省去DMSO的使用，便于废水的处理，适用于工业化生产，具有很高的经济效益。
[0039](2)所得西格列汀游离碱为固体粉末，便于储存运输以及商业化生产和销售。
附图说明
[0040]图1为本发明制备的西格列汀游离碱的液相谱图；
[0041]图2为本发明制备的磷酸西格列汀的液相谱图。
具体实施方式
[0042]为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，
进一步阐明本发明，但下述实施例仅为本发明的优选实施例，并非全部。为了清楚，不描述实际实施例的全部特征。在下列描述中，不详细描述公知的功能和结构，因为它们会使本发明由于不必要的细节而混乱。应当认为在任何实际实施例的开发中，必须做出大量实施细节以实现开发者的特定目标。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。[0043]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
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