(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201680055860.2
(22)申请日 2016.09.23
(30)优先权数据
10-2015-0134534 2015.09.23 KR
10-2016-0104381 2016.08.17 KR
(85)PCT国际申请进入国家阶段日
2018.03.23
(86)PCT国际申请的申请数据
PCT/KR2016/010605 2016.09.23
(87)PCT国际申请的公布数据
WO2017/052242 KO 2017.03.30
(71)申请人 株式会社爱茉莉太平洋
地址 韩国首尔
(72)发明人 崔瑞娟 崔银廷 宾范浩 黄景焕
曹恩敬 李泰龙
(74)专利代理机构 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224代理人 刘培培 黄爱娇(51)Int.Cl.A61K 8/9789(2017.01)A61Q 19/02(2006.01) (54)发明名称
物
(57)摘要
公开了一种含有人参衍生的外泌体样囊泡
的美白组合物及用于制备此人参衍生的外泌体
样囊泡的方法。人参衍生的外泌体样囊泡的直径
可为20-500nm，且可从人参根中分离而来。由于
该组合物含有人参衍生的外泌体样囊泡作为活
性成分，通过有效抑制黑素生成，所述组合物
对预防、改善或皮肤素沉着症如肝斑、斑
点、雀斑、
胎记和黑素瘤有效。权利要求书1页 说明书13页 附图5页CN 108135831 A 2018.06.08
C N 108135831
A
1.一种用于皮肤美白的组合物，其含有人参衍生的外泌体样囊泡作为活性成分。
2.根据权利要求1所述的用于皮肤美白的组合物，其特征在于，所述外泌体样囊泡由人参根中分离出来。
3.根据权利要求1所述的用于皮肤美白的组合物，其特征在于，所述外泌体样囊泡的直径为20-500nm。
4.根据权利要求1所述的用于皮肤美白的组合物，其特征在于，在100,000或更高的重力加速度倍数下对人参的胞外液进行超速离心来沉淀所述外泌体样囊泡。
5.根据权利要求1所述的用于皮肤美白的组合物，其特征在于，所述外泌体样囊泡在碘克沙醇中的浮力密度为1.00-1.20g/mL。
6.根据权利要求1所述的用于皮肤美白的组合物，其特征在于，所述活性成分抑制黑素生成。
7.根据权利要求1所述的用于皮肤美白的组合物，其特征在于，所述活性成分预防、改善或选自以下的一种或多种皮肤素沉着症：黄褐斑、斑点、雀斑、痣、黑素瘤、药物引起的素沉着、发炎后素沉着和皮肤炎引起的素沉着。
8.一种用于制备根据权利要求1至7中任一项所述的人参衍生的外泌体样囊泡的方法，其包括：
(1)通过挤压人参得到汁液的步骤；
(2)对所述汁液进行离心并通过除去残余物得到上清液的步骤；和
(3)对所述上清液进行超速离心得到外泌体样囊泡的步骤。
9.根据权利要求8所述的用于制备人参衍生的外泌体样囊泡的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的离心分离在500-3,000重力加速度倍数下进行10-30分钟。
10.根据权利要求8所述的用于制备人参衍生的外泌体样囊泡的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的超速离心使用蔗糖缓冲溶液密度梯度和碘克沙醇密度梯度进行。
11.根据权利要求8所述的用于制备人参衍生的外泌体样囊泡的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的超速离心在100,000-200,000重力加速度倍数下进行1-6小时。
12.根据权利要求8所述的用于制备人参衍生的外泌体样囊泡的方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，通过对所述上清液进行超速离心，然后分离碘克沙醇中浮力密度为1.00-1.20g/mL的分馏物得到所述外泌体样囊泡。
权 利 要 求 书1/1页CN 108135831 A
含有人参衍生的外泌体样囊泡的美白组合物
技术领域
[0001]本发明公开一种用于皮肤美白的、含有人参衍生的外泌体样囊泡的组合物及用于制备该人参衍生的外泌体样囊泡的方法。
背景技术
[0002]大多数动物细胞具有分泌各种大小和组合物的细胞衍生胞外囊泡的能力。这些胞外囊泡存在于所有生物流体中，包括血液、尿液、唾液和细胞培养的培养基(Loyer X,Vion AC,Tedgui A,Boulanger CM.Microvesicles as cell-cell messengers in cardiovascular diseases.Circ Res 2014；114:345-53；Ohno S,Ishikawa A,Kuroda M.Roles of exosomes and microvesicles in disease pathogenesis.Adv Drug Deliv Rev 2013；65:398-401)。
[0003]胞外囊泡是直径大约20nm至5μm的膜结构囊泡。它们在大小和组合物上不同，且含有各种物种，例如外泌体(约30-100nm)、核外粒体(ectosomes)、微胞(约100-1000nm)、微粒等。
[0004]不同类型的胞外囊泡是根据其来源、直径、在蔗糖中的密度、形状、沉淀速率、脂质组合物、蛋白质标记、分泌类型(即，胞外囊泡是由信号诱导还是自然生成的)等来区分。例如，微胞是约100至1,000nm的不规则形状的膜囊泡。它们源自质膜并且已知包含整联蛋白、选择蛋白(selectins)、含有CD40配体的标志物、以及含有磷脂酰丝胺酸的脂质。而且，外泌体是约30至100nm(<200nm)的杯形最小膜囊泡。外泌体源自胞内体，并且已知含有四次跨膜蛋白(比如CD63和CD9)、包括TSG101和ESCRT
的标志物、以及包括胆固醇、神经鞘磷脂、神经酰胺和磷脂酰丝胺酸的脂质。
[0005]胞外囊泡反映分泌该胞外囊泡的细胞(供体细胞)状态，根据分泌该胞外囊泡的细胞而表现出各种生物活性，同时当它们在细胞之间传递遗传物质和蛋白质时在细胞对细胞的交互作用中扮演重要角。
[0006]在植物中，由于质膜和多泡体之间的融合，小囊泡释放到胞外空间，并且在各种植物细胞的胞外空间中观察到多泡体中的囊泡(Marchant R,Peat A,Banbury GH.The ultrastructural basis of hyphal growth.New Phytol.1967；66:623-629；Halperin W, Jensen WA.Ultrastructural changes during growth and embryogenesis in carrot cell cultures.J Ultrastruct Res.1967；18:428-443；Marchant R,Robards AW.Membrane systems associated with the plasmalemma of plant cells.Ann Bot.1968；32:457-471)。近来也报导了源自植物细胞的外泌体样纳米粒子与源于哺乳动物细胞的外泌体，在纳米尺寸囊泡结构和纳米粒子组合物上相类似(An,Q,Hückelhoven,R, Kogel,KH and van Bel,AJ(2006).Multivesicular bodies participate in a cell wall-associated defence response in barley leaves attacked by the pathogenic powdery mildew fungus.Cell Microbiol 8:1009-1019；Regente,M,Pinedo,M,Elizalde, M and de la Canal,L(2012).Apoplastic exosome-like vesicles:a new way of
protein secretion in plants？Plant Signal Behav 7:544-546)。
[0007]外泌体主要用作生物标志物。然而，还未开发出基于外泌体的内在功效将外泌体用于特定目的的
技术。尤其是对植物细胞衍生的外泌体样膜结构囊泡的具体用途了解甚少。对于人参，尽管已经报道了人参衍生的提取物或其成分的皮肤美白效果，但并没有报道过人参衍生的外泌体样膜结构囊泡的皮肤美白效果。公开号为10-2009-0130801的韩国专利中公开关于人参提取物的现有技术。
发明内容
[0008]技术问题
[0009]一方面，本发明内针对提供一种用于皮肤美白的组合物，该组合物含有人参衍生的外泌体样囊泡而不是人参提取物作为活性成分。
[0010]另一方面，本发明针对提供一种用于制备人参衍生的外泌体样囊泡的方法。[0011]技术手段
[0012]本发明提供一种用于皮肤美白的组合物，其含有人参衍生的外泌体样囊泡作为活性成分。
[0013]一方面，所述外泌体样囊泡可从人参根中分离出来。
[0014]另一方面，所述外泌体样囊泡的直径可为20nm-500nm。
[0015]另一方面，所述外泌体样囊泡可由人参胞外液在100,000x g或更高的重力加速度倍数(xg)下超速离心沉淀而来。
[0016]另一方面，所述外泌体样囊泡在碘克沙醇中的浮力密度可为1.00-1.20g/mL。[0017]另一方面，所述活性成分可抑制黑素生成。
[0018]另一方面，所述活性成分可预防、改善或一种或多种皮肤素沉着症，该一种或多种皮肤素沉着症选自：黄褐斑、斑点、雀斑、痣、黑素瘤、药物引起的素沉着、发炎后素沉着和皮肤炎引起的素沉着。
[0019]本发明还提供了一种用于制备人参衍生的外泌体样囊泡的方法，该方法包括：(1)通过挤压人参得到汁液的步骤；(2)对所述汁液进行离心并除去残余物得到上清液的步骤；和(3)将所述上清液超速离心得到外泌体样囊泡的步骤。
[0020]一方面，所述步骤(2)中的离心可在500-3,000重力加速度倍数下进行10-30分钟。[0021]另一方面，所述步骤(3)中的超速离心可用蔗糖缓冲液密度梯度和碘克沙醇密度梯度来进行。
[0022]另一方面，所述步骤(3)中的超速离心可在100,000-200,000重力加速度倍数下进行1-6小时。
[0023]另一方面，在所述步骤(3)中，外泌体样囊泡可以通过将上清液超速离心并分离碘克沙醇中浮力密度为1.00-1.20g/mL的分馏物而得到。
[0024]有益效果
[0025]在一方面，本发明提供了一种供应用于皮肤美白的组合物的效果，该组合物含有人参衍生的外泌体样囊泡作为活性成分。
[0026]另一方面，本发明提供了一种供应用于制备人参衍生的外泌体样囊泡方法的效果。
附图说明
[0027]图1显示从根据本发明的示例性实施例的人参根汁液中分离出外泌体样囊泡的过程。
[0028]图2显示根据本发明的示例性实施例的人参衍生的外泌体样囊泡的穿透式电子显微镜图像。
[0029]图3显示用根据本发明的示例性实施例的人参衍生的外泌体样囊泡处理过的MNT-1细胞的黑素生成。
[0030]图4比较了用根据本发明的示例性实施例的人参衍生的外泌体样囊泡处理或阳性对照物质(麝香草酚三甲氧基肉桂酸酯(Melasolv)(爱茉莉太平洋(AmorePacific)的代表性皮肤美白物质)、化合物K和发酵皂苷)处理的人类黑素细胞的黑素生成。
[0031]图5比较了用根据本发明的示例性实施例的人参衍生的外泌体样囊泡处理或用人参汁液处理的人类黑素细胞的活力。
[0032]图6比较了用根据本发明的示例性实施例的人参衍生的外泌体样囊泡处理或用人参汁液处理的人类黑素细胞的黑素生成。
具体实施方式
[0033]本发明详细描述于下文中。
[0034]本发明提供一种用于皮肤美白的组合物，其含有人参衍生的外泌体样囊泡作为活性成分。本发明提供一种用于皮肤美白的组合物，其含有人参衍生的外泌体样囊泡，特别是衍生自人参的胞外液的外泌体样囊泡，而不是人参衍生的提取物作为活性成分。
[0035]在一个示例性实施例中，所述人参可以是选自人参属植物的种子、根、茎、叶和果实中的一种或多种。具体地，人参属中的植物可以是高丽参(Korean ginseng)(人参(Panax ginseng))、美国人参(American ginseng)(西洋参(Panax quinquefolium))、三七(Panax notoginseng)、日本人参(Japanese ginseng)(竹节参(Panax japonicum))、矮人参(dwarf ginseng)(三叶参(Panax trifolium))、喜马拉雅人参(Himalayan ginseng)(假人参(Panax pseudoginseng))、越南人参(Vietnamese ginseng)(越南人参(Panax vietnamensis))等。其物种、类型、加工、生长环境等不受限制，并且可以包括红参(red ginseng)；新鲜参(fresh ginseng)；白参(white ginseng)；养殖人参；或野生人参，野生人参包括林下参、山生人参和野山参培养根。
[0036]在本发明中，“外泌体样囊泡”是指由细胞分泌到胞外空间的纳米尺寸的胞外囊泡。所述囊泡包括外泌体并以最广泛的概念使用，包括在纳米尺寸泡状结构和组合物中与外泌体相似的囊泡。
[0037]由于质膜和多胞体间融合(fusion)的结果，所述外泌体样囊泡由胞吐作用分泌到胞外空间。所述外泌体样囊泡被脂质双层分为内部和外部，并且由于其含有膜脂质、膜蛋白、遗传物质和细胞质组分，间接地反映出细胞的性质和状态。同时，所述外泌体样囊泡作为介导细胞与细胞之间通讯的胞外转运蛋白，通过结合至其他细胞和组织，将膜组分、mRNAs、miRNAs、蛋白质(生长激素、细胞因子)等转移至受体细胞。
[0038]在本发明中，“人参衍生的外泌体样囊泡”是指由人参细胞所分泌的纳米尺寸外泌
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