(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011174233.5
(22)申请日 2020.10.28
(71)申请人 湖南省肿瘤医院
地址 410000 湖南省长沙市岳麓区桐梓路
283号
(72)发明人 吴娜怡园 王静 房超 张晓叶
朱堂元 黄玄舜 李贺 王瑛
廖前进 梅杰
(74)专利代理机构 长沙心智力知识产权代理事
务所(普通合伙) 43233
代理人 谢如意
(51)Int.Cl.
A01K 67/027(2006.01)
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠
模型，包括以下步骤：S1：选取6‑8周龄c57bl/6雌
的c57bl/6雌鼠饲育一周，并实时对饲养的雌鼠
进行观察体检；S2：剔除雌鼠单侧背部毛发，上至
上肢，下至下肢，一侧至脊柱，另一侧至腋中线，
并进行消毒麻醉；S3：选取脊柱和腋中线连线的
中点和脊柱与腋中线垂线的交点，镊子夹起部分
皮肤，剪开皮肤和肌肉，消毒止血，到卵巢和输
卵管。本发明上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型，
通过向单侧卵巢囊精准注射1×106个上皮性卵
巢癌细胞细胞，
成瘤率为100％。权利要求书1页 说明书3页CN 112262818 A 2021.01.26
C N 112262818
A
1.上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型，其特征在于，包括以下步骤：
S1：选取6-8周龄c57bl/6雌鼠，并对雌鼠进行体检，选取发育正常体检合格的c57bl/6雌鼠饲育一周，并实时对饲养的雌鼠进行观察体检；
S2：剔除雌鼠单侧背部毛发，上至上肢，下至下肢，一侧至脊柱，另一侧至腋中线，并进行消毒麻醉；
S3：选取脊柱和腋中线连线的中点和脊柱与腋中线垂线的交点，镊子夹起部分皮肤，剪开皮肤和肌肉，消毒止血，到卵巢和输卵管；
S4：向单侧卵巢囊中注射上皮性卵巢癌细胞ID8；
S5：缝合肌肉和皮肤，成功构建类上皮性卵巢癌模型。
2.根据权利要求1所述的上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型，其特征在于，所述c57bl/6雌鼠的体重为18g -22g，且饲养方式为在无特定病原体条件下的超净层流架中进行饲养，使用灭菌水和无菌饲料供c57bl/6雌鼠自由摄入。
3.根据权利要求1所述的上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型，其特征在于，所述消毒止血具体方法为：采用碘伏棉球消毒皮肤伤口，并使用无菌纱布压迫30s进行止血。
4.根据权利要求1所述的上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型，其特征在于，所述向单侧卵巢囊中注射上皮性卵巢癌细胞ID8的注射器械采用Hamilton 10ul微量进样器，且上皮性卵巢癌细胞ID8注射用量为1×106个/10ul上皮性卵巢癌细胞ID8。
5.根据权利要求1所述的上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型，其特征在于，所述缝合肌肉和皮肤，成功构建类上皮性卵巢癌模型具体包括以下步骤：
S5.1：在卵巢囊注射上皮性卵巢癌细胞ID8的破口处滴注纤维蛋白原和凝血酶；
S5.2：等待1-2分钟，等待蛋白胶凝固无出血后进行肌肉和皮肤的缝合，且缝合采用5-0外科无菌手术缝线；
S5.3：缝合完成后用70％酒精棉球进行擦拭消毒伤口两遍，且两遍伤口擦拭的方向一致。
6.根据权利要求1所述的上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型，其特征在于，所述雌鼠手术过程以及雌鼠麻醉清醒过程中均使用恒温垫维持雌鼠体温。
7.根据权利要求1所述的上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型，其特征在于，还包括术后饲养，所述术后饲养包括以下步骤：
a：待雌鼠麻醉清醒后继续在无特定病原体条件下的超净层流架中进行饲养，使用灭菌水和无菌饲料供c57bl/6雌鼠自由摄入；
b：在灭菌水中加入氨苄西林溶液供雌鼠饮用，防止雌鼠术后感染，其中，氨苄西林溶液的零度为0.0005％-0.0008％。
权 利 要 求 书1/1页CN 112262818 A
上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型
技术领域
[0001]本发明涉及卵巢癌原位成瘤技术领域，具体是上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型。
背景技术
[0002]上皮性卵巢癌主要起源于输卵管上皮，相比于卵巢癌皮下成瘤模型和尾静脉注射成瘤模型，上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型依托于上皮性卵巢癌起源输卵管学说，通过在小鼠输卵管原位注射卵巢癌细胞，模拟人类卵巢癌发生发展的微环境，使成瘤模型更贴合卵巢癌生物学性状，也更适合研究卵巢肿瘤发病，侵袭、转移及后续模式。
[0003]现有多种卵巢癌动物模型，包括小鼠皮下移植瘤、尾静脉注射种瘤、卵巢癌原位成瘤等，其中卵巢癌原位模型已经有一定的应用基础。现有的卵巢癌原位模型是将体外培养的卵巢癌细胞注射到动物卵巢表面，从而产生肿瘤，具体为将对数生长期的1×107个人卵巢黏液性腺癌3AO细胞种植于BALB/C雌性裸鼠单侧卵巢实质内，观察裸鼠一般情况及肿瘤生长、浸润转移情况，移植后3～8周解剖裸鼠，对双侧卵巢和各脏器行光镜和免疫组织化学检查，现有的卵巢癌动物模型设计简单，仅能模拟卵巢癌转移瘤，不能模拟人体卵巢癌起病过程，且裸鼠为免疫缺陷鼠，不能用于免疫抑制剂等免疫相关药物研究。
发明内容
[0004]本发明的目的在于提供上皮性卵巢癌原位成瘤野生小鼠模型，卵巢癌动物模型贴合卵巢癌发病和腹腔细节，包括肿瘤起源部位、肿瘤微环境等，且动物模型成瘤率为100％，成瘤时间短，发生腹膜和腹腔脏器转移率高，与人卵巢癌生物学行为相似，实现模拟人体卵巢癌起病过程，可用于免疫抑制剂等免疫相关药物研究，解决了上述背景技术中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型，包括以下步骤：
[0006]S1：选取6-8周龄c57bl/6雌鼠，并对雌鼠进行体检，选取发育正常体检合格的c57bl/6雌鼠饲育一周，并实时对饲养的雌鼠进行观察体检；
[0007]S2：剔除雌鼠单侧背部毛发，上至上肢，下至下肢，一侧至脊柱，另一侧至腋中线，并进行消毒麻醉；
[0008]S3：选取脊柱和腋中线连线的中点和脊柱与腋中线垂线的交点，镊子夹起部分皮肤，剪开皮肤和肌肉，消毒止血，到卵巢和输卵管；
[0009]S4：向单侧卵巢囊中注射上皮性卵巢癌细胞ID8；
[0010]S5：缝合肌肉和皮肤，成功构建类上皮性卵巢癌模型。
[0011]作为本发明进一步的方案：所述c57bl/6雌鼠的体重为18g-22g，且饲养方式为在无特定病原体条件下的超净层流架中进行饲养，使用灭菌水和无菌饲料供c57bl/6雌鼠自由摄入。
[0012]作为本发明再进一步的方案：所述消毒止血具体方法为：采用碘伏棉球消毒皮肤
伤口，并使用无菌纱布压迫30s进行止血。
[0013]作为本发明再进一步的方案：所述向单侧卵巢囊中注射上皮性卵巢癌细胞ID8的注射器械采用Hamilton 10ul微量进样器，且上皮性卵巢癌细胞ID8注射用量为1×106个/ 10ul上皮性卵巢癌细胞ID8。
[0014]作为本发明再进一步的方案：所述缝合肌肉和皮肤，成功构建类上皮性卵巢癌模型具体包括以下步骤：
[0015]S5.1：在卵巢囊注射上皮性卵巢癌细胞ID8的破口处滴注纤维蛋白原和凝血酶；[0016]S5.2：等待1-2分钟，等待蛋白胶凝固无出血后进行肌肉和皮肤的缝合，且缝合采用5-0外科无菌手术缝线；
[0017]S5.3：缝合完成后用70％酒精棉球进行擦拭消毒伤口两遍，且两遍伤口擦拭的方向一致。
[0018]作为本发明再进一步的方案：所述雌鼠手术过程以及雌鼠麻醉清醒过程中均使用恒温垫维持雌鼠体温。
[0019]作为本发明再进一步的方案：还包括术后饲养，所述术后饲养包括以下步骤：[0020]a：待雌鼠麻醉清醒后继续在无特定病原体条件下的超净层流架中进行饲养，使用灭菌水和无菌饲料供c57bl/6雌鼠自由摄入；
[0021]b：在灭菌水中加入氨苄西林溶液供雌鼠饮用，防止雌鼠术后感染，其中，氨苄西林溶液的零度为0.0005％-0.0008％。
[0022]与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明公开了上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型，通过向单侧卵巢囊精准注射1×106个上皮性卵巢癌细胞细胞，成瘤率为100％，其次，选用c57bl/6为野生型小鼠，更符合人类实际情况，可用于免疫控制剂和免疫相关研究，并且该上皮性卵巢癌模型小鼠起病于卵巢和输卵管，向盆腹腔转移，产生腹水，发病过程与人卵巢癌贴近，实现模拟人体卵巢癌起病过程。
具体实施方式
[0023]下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0024]上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型，包括以下步骤：
[0025]S1：选取6-8周龄c57bl/6雌鼠，并对雌鼠进行体检，选取发育正常体检合格的c57bl/6雌鼠饲育一周，并实时对饲养的雌鼠进行观察体检；
[0026]S2：剔除雌鼠单侧背部毛发，上至上肢，下至下肢，一侧至脊柱，另一侧至腋中线，并进行消毒麻醉；
[0027]S3：选取脊柱和腋中线连线的中点和脊柱与腋中线垂线的交点，镊子夹起部分皮肤，剪开皮肤和肌肉，消毒止血，到卵巢和输卵管；
[0028]S4：向单侧卵巢囊中注射上皮性卵巢癌细胞ID8；
[0029]S5：缝合肌肉和皮肤，成功构建类上皮性卵巢癌模型。
[0030]c57bl/6雌鼠的体重为18g-22g，且饲养方式为在无特定病原体条件下的超净层流
架中进行饲养，使用灭菌水和无菌饲料供c57bl/6雌鼠自由摄入。
[0031]消毒止血具体方法为：采用碘伏棉球消毒皮肤伤口，并使用无菌纱布压迫30s进行止血。
[0032]向单侧卵巢囊中注射上皮性卵巢癌细胞ID8的注射器械采用Hamilton 10ul微量进样器，且上皮性卵
巢癌细胞ID8注射用量为1×106个/10ul上皮性卵巢癌细胞ID8。[0033]缝合肌肉和皮肤，成功构建类上皮性卵巢癌模型具体包括以下步骤：
[0034]S5.1：在卵巢囊注射上皮性卵巢癌细胞ID8的破口处滴注纤维蛋白原和凝血酶；[0035]S5.2：等待1-2分钟，等待蛋白胶凝固无出血后进行肌肉和皮肤的缝合，且缝合采用5-0外科无菌手术缝线；
[0036]S5.3：缝合完成后用70％酒精棉球进行擦拭消毒伤口两遍，且两遍伤口擦拭的方向一致。
[0037]雌鼠手术过程以及雌鼠麻醉清醒过程中均使用恒温垫维持雌鼠体温。
[0038]还包括术后饲养，术后饲养具体包括以下步骤：
[0039]a：待雌鼠麻醉清醒后继续在无特定病原体条件下的超净层流架中进行饲养，使用灭菌水和无菌饲料供c57bl/6雌鼠自由摄入；
[0040]b：在灭菌水中加入氨苄西林溶液供雌鼠饮用，防止雌鼠术后感染，其中，氨苄西林溶液的零度为0.0005％-0.0008％。
[0041]进一步的，在术后饲养的前3-5天，在无菌饲料中加入唑吡坦粉末进行混合供雌鼠摄入，降低小鼠术后应激反应，抗焦虑，防止动物机体由于受到伤口刺激长期处理持续的紧张状态，导致雌鼠出现焦虑不安和出现应急反应，导致伤口二次出血。
[0042]该上皮性卵巢癌原位成瘤小鼠模型，在饲养一周使用0.01mg每天雌激素缓释片粉末混合无菌饲料进行喂养，降低雌鼠免疫力缩短成肿瘤时间，通过向单侧卵巢囊精准注射1×106个上皮性卵巢癌细胞细胞，成瘤率为100％，其次，选用c57bl/6为野生型小鼠，更符合人类实际情况，并且该上皮性卵巢癌模型小鼠起病与输卵和输卵管，向盆腹腔转移，产生腹水，发病过程与人卵巢癌贴近，实现模拟人体卵巢癌起病过程，同时在术后培养时，通过添加唑吡坦粉末降低小鼠术后应激反应，便于术后恢复，防止伤口二次出血。
[0043]对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
[0044]此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
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