[19]
中华人民共和国国家知识产权局
[12]发明专利申请公开说明书
[11]公开号CN 1245831A [43]公开日2000年3月1日
[21]申请号99116655.8[21]申请号99116655.8[22]申请日99.9.10[71]申请人袁勤生
地址430034湖北省武汉市东西湖吴家山吴祁街
28号
共同申请人袁北海
[72]发明人袁勤生 袁北海
[74]专利代理机构武汉市专利事务所
代理人黄行军 程启祥[51]Int.CI 7C12N 9/08C12N 9/96
权利要求书 1 页 说明书 4 页
[54]发明名称
[57]摘要
本发明提供了一种超氧化物歧化酶耐高温、不
失活的制备方法，该方法是在提取的固体粉末状超
氧化物歧化酶中加入2—8%固体状保护剂，该方法是
将它们按上述比例混匀后再进行冻干处理。该技术
的稳定性，并扩充了产品开发和应用范围，相对保证
存下不易变质。
99116655.8权 利 要 求 书第1/1页 1、一种超氧化物歧化酶耐高温，不失活的制备方法，其特征是在提取的固体粉末状超氧化物歧化酶中加入2-8％固体状保护剂。
2、按照权利要求1所述超氧化物歧化酶耐高温、不失活的制备方法，其特征是所述固体状保护剂采用海藻糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、阿拉伯糖、核糖、岩藻糖、右旋糖酐、聚蔗糖、V C、V E、硫辛酸、谷胱甘肽、茶多酚中的任意一种。
3、按照权利要求1或2所述超氧化物歧化酶耐高温、不失活的制备方法，其特征是在固体粉未状超氧化物歧化酶中加入固体状保护剂的方法是将它们两种固体物质在0℃-10℃下分别制成水溶液，再将这两种水溶液混合均匀，然后冻干制成冻干粉即可。
99116655.8说 明 书第1/4页
超氧化物歧化酶耐高温不失活的制备方法
一种耐高温，不失活的超氧化物歧化酶。属于生物制品。 超氧化物歧化酶(英文速写SOD)，是人类认识的一种特殊的药用酶。其特殊性在于：1、它是迄今为止唯一能把有害于人体的超氧阴离子自由基[O2-]清除掉的活性酶。机体中的超氧自由基可以从外环境进入也可由机体本身代谢生成，它是引起人体多种疾病以及衰老的主要有害物质，因而如能清除掉体内过多的氧自由基就能达到抗衰老的目的。(中国药学杂志1989.24(7)3 87)。2、SOD是活性酶，是由蛋白质组成的。近年来，国内外大量科学实验已经证明：SDD经过口服后，机体可以吸收，并进入血液，还能部分透过细胞膜而进入细胞。(工业生化杂志 1995年第一期13面)
人类为了达到抗衰老，增智美容，延年益寿的目的正设法不断从外界向体内补充超氧化物歧化酶。但是，超氧化物歧化酶的酶活力不稳定，尤其是在水溶液中经高温工艺则更易失活。这不仅使含超氧化物歧化酶的产品开发增加了困难，限制了产品的加工工艺，而且使含超氧化物歧化酶的产品有效期大大缩短，迫使产品的储存、运输销售周期变短，增大了经营困难，根据我国国内的大多数生产条件和市场状况，水溶性制品一般要经过后灭菌处理，通常采用的方法是高温灭菌，同时产品的保质期一般都要求在6个月至2年之间。
为了开发和推广使用超氧化物歧化酶的产品，使超氧化物歧化酶更广泛的为人民健康服务，更快地造福于人类，必须解决好超氧化物歧化酶的易失活问题，尤其要解决好超氧化物歧化酶在高温工艺条件下酶活力的稳定问题。通过专利检索和查阅有关杂志，论文以及市场调查，末见超氧化物歧化酶耐
高温不失活技术的报导。
本发明的目的是要解决活性酶不失活问题，尤其要解决好超氧化物歧化酶在高温工艺条件下酶活力的稳定问题，使含超氧化物歧化酶的产品在生产工艺流程中不用顾忌＂高温＂的问题，使产品在保质期内质量稳定。从而保证人们在服用含超氧化物歧化酶的产品时，其活力能有效地为人体吸收。 为达到上述目的，本发明的任务是这样实现的。首先利用现有生物工程技术在动物中提取超氧化物歧化酶(工业生化杂志1995年第1期第55面)，然后在超氧化物歧化酶中加入2-8％的保护剂，方法是将它们两种固体物质在0℃-10℃下分别制成水溶液，再将这两种水溶液混合均匀，然后冻干制成冻干粉即可。其保护剂是：海藻糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、阿拉伯糖、核糖、右旋糖酐、聚蔗糖、V C、V E、硫辛酸、谷胱甘肽、茶多酚中的任意一种。上述物质均能起到稳定酶活力的作用。这是因为超氧化物歧化酶是生物大分子、其中的金属辅基Cu、Zn对酶的稳定性起着重要作用，它们是超氧化物歧化酶的重要活性中心，上述保护剂实际上巩固了金属辅基使其不易解离，故能大大增强酶活力的稳定性。
本发明与现有技术相比，解决了超氧化物歧化酶在高温工艺条件下酶活力相对稳定的问题，在该技术领域填补了国内空白，它的实用意义是：不仅大大拓宽了超氧化物歧化酶产品开发的范围，必将有力的促进其系列产品的开发和应用。还增强了超氧化物歧化酶产品(尤其是水溶性产品)的酶活力稳定性，延长了产品保质期，增大了实用价值。
总之，此项技术成果，就超氧化物歧化酶的开发应用而言，为使科学技术转化成现实的生产力成功的克服了一道难关。
实施例1：
取超氧化物歧化酶100克(含酶活动100万国标单位)加入4克的海藻糖，
制成特殊的超氧化物歧化酶待用；在糖酸钙水溶液制品灌装前40分钟，将上述特殊的超氧化物歧化酶缓缓溶入糖酸钙水溶液中，同时用搅拌机搅拌20分钟，调整转速为60转/分钟，制成超氧化物歧化酶酸钙产品。(以下称实验组I)
上述同样办法，只是用未经特殊加工的普通的超氧化物歧化酶也制成＂超氧化物歧酶酸钙＂产品。(以下称对照组)
用国际通用的＂连苯三酚自氧化法；测定超氧化物歧化酶的活性，结果如下：
组别 原始酶活性U 85℃以上0.5h活性U
实验组I 1500 1301
对照组 1500 360
加速实验一个月以后 对照组 酶活力等于0
加速实验六个月以后 实验组I 酶活力 1033
实施例2：
取超氧化物歧化酶100克(含酶活力100万国际单位)加入2克的半乳糖，制成特殊的超氧化物歧化酶，待用。在糖酸钙水溶液制品灌装前60分钟，将上述特殊的超氧化物歧化酶缓缓溶入糖酸钙水溶液中，同时用搅拌机搅拌15分钟，调整转速为50转/分钟，制成＂超氧化物歧化酶酸钙＂产品。(以下称实验组II)
＂对照组＂同实施例1一样。
用国际通用的＂连苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶的活性，结果如下：
组别 原始酶活性U 85℃以上0.5h活性U
实验组II 1500 860
对照组 1500 360
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