(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610261524.5
(22)申请日 2016.04.25
(71)申请人 上海辉文生物技术股份有限公司
地址 201210 上海市浦东新区沔北路185号
F-2
(72)发明人 骆峰 周自华 杨海延
(74)专利代理机构 上海弼兴律师事务所 31283
代理人 薛琦 王卫彬
(51)Int.Cl.
C08B 37/00(2006.01)
A61K 8/73(2006.01)
A61K 8/9728(2017.01)
A61Q 19/00(2006.01)
A61Q 19/08(2006.01)
(54)发明名称
本发明公开了一种银耳异聚多糖及其提取
物、制备方法和应用。本发明中的银耳异聚多糖
提取物的制备方法包括以下步骤：将酸性絮凝剂
与经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液混合，絮
凝，固液分离得沉淀复合物，即可；其中，所述的
酸性絮凝剂为絮凝剂的酸水溶液，所述的絮凝剂
为壳聚糖。利用本发明的制备方法可制得高纯度
的不同分子量范围的银耳异聚多糖，收率可以达
到20％以上，纯度可以达到93％以上；采用本申
请的制备方法制得的10～20万道尔顿的银耳异
聚多糖表现出了良好的促成纤维细胞增殖效果
和促进成纤维细胞分泌透明质酸的能力，同时还
表现出了优异的皮肤渗透性。权利要求书2页 说明书10页CN 107011451 A 2017.08.04
C N 107011451
A
1.一种银耳异聚多糖提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将酸性絮凝剂与经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液混合，絮凝，固液分离得沉淀复合物，即可；其中，所述的酸性絮凝剂为絮凝剂的酸水溶液，所述的絮凝剂为壳聚糖。
2.如权利要求1所述的银耳异聚多糖提取物的制备方法，其特征在于，
所述的酸性絮凝剂中，所述的絮凝剂浓度为0.005～0.02g/mL，优选0.01g/mL； 和/或，所述的壳聚糖的规格为：脱乙酰基≥85％；且20℃下，浓度为10克/升时的粘度≥200mpa.s；
和/或，所述的酸性絮凝剂中，所述的酸水为盐酸水溶液，所述的盐酸水溶液的质量浓度优选为0.25％～1.0％；
和/或，所述的“经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液”的制备方法为：将银耳进行碱解得到银耳碱提液后，用酸调节所述的银耳碱提液至弱酸性或中性，过滤得到的滤液，即为所述的“经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液”；
和/或，所述的“经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液”中的酸为稀盐酸；所述的稀盐酸的质量浓度优选0.5％～6.0％，更优选1％～6.0％；
和/或，所述的“经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液”与所述的“酸性絮凝剂”的混合方式为将所述的酸性絮凝剂加入到所述的“经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液”中；
和/或，所述的酸性絮凝剂的用量为：每100mL所述的“经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液”中添加5～10mL所述的酸性絮凝剂；优选添加5～8mL所述的酸性絮凝剂；
和/或，所述的絮凝的温度为10～35℃；
和/或，所述的银耳为银耳子实体原料。
3.如权利要求1或2所述的银耳异聚多糖提取物的制备方法，其特征在于，在得到所述的沉淀复合物后还进一步包括以下步骤：将所述的沉淀复合物在碱性条件下解离，固液分离，得滤液A，即可。
4.如权利要求3所述的银耳异聚多糖提取物的制备方法，其特征在于，所述的解离包括以下步骤：将所述的沉淀复合物与水混合后，用碱调至PH为8.0～10.0，50～60℃下进行解离，即可。
5.如权利要求4所述的银耳异聚多糖提取物的制备方法，其特征在于，
所述的滤液A的制备中，所述水与所述的沉淀复合物的体积质量比为10～20mL/g，优选12～15mL/g；
和/或，所述的滤液A的制备中，所述的碱为氢氧化钠；所述的氢氧化钠优选为质量浓度优选为4％～10％的氢氧化钠水溶液，更优选质量浓度为5％的氢氧化钠水溶液；
和/或，所述的滤液A的制备中，所述的“调至PH为8.0～10.0”为调至PH为8.0～9.0。
6.一种银耳异聚多糖的制备方法，其包括以下步骤：将权利要求3～5任一项所述的滤液A脱，用酸调至中性，浓缩，醇沉，收集沉淀，即可。
7.如权利要求6所述的银耳异聚多糖的制备方法，其特征在于，所述的脱为采用过氧化氢进行脱；所述的过氧化氢优选为质量分数为30％的过氧化氢水溶液；所述的质量分数为30％的过氧化氢的体积优选为所述的滤液A体积的0.5％～2.0％，更优选1.0％；
和/或，所述的银耳异聚多糖的制备方法中，所述的酸为稀盐酸；所述的稀盐酸的质量浓度优选为4％～8％，更优选6％；
和/或，所述的银耳异聚多糖的制备方法中，所述的浓缩为减压浓缩；所述的浓缩为至浓缩液与银耳的体积质量比为2～3mL/g，所述的银耳为所述的滤液A的制备过程中使用的银耳原料；
和/或，所述的醇沉淀为采用乙醇进行沉淀，所述的乙醇优选为体积百分比浓度为90％～95％的乙醇水溶液；所述的醇沉的终点优选至最终乙醇的体积百分比浓度达到60％～70％；
和/或，所述的银耳异聚多糖的制备方法中，还包括干燥所述的沉淀的步骤；所述的干燥优选真空减压干燥。
8.如权利要求6或7所述的银耳异聚多糖的制备方法，其特征在于，
当制备得到分子量小于10万道尔顿银耳异聚多糖时，所述的滤液A的制备过程中制备银耳碱提液的碱提条件为：碱为质量浓度为9％～11％的氢氧化钠水溶液，优选10％的氢氧化钠水溶液；所述的碱与所述的银耳的体积质量比为15～25mL/g，优选20mL/g；碱解的温度为90～98℃；碱解的时间为9～11h，优选10h；制备得到了所述的分子量小于10万道尔顿银耳异聚多糖；
或当制备得到分子量大于20万且小于等于100万道尔顿银耳异聚多糖时，所述的滤液A 的制备过程中制
备银耳碱提液的碱提条件优选为：碱为质量浓度为0.5％～4.5％的氢氧化钠水溶液，优选3％的氢氧化钠水溶液；所述的碱与所述的银耳的体积质量比为5～15mL/g，优选10mL/g；碱解的温度为90～98℃；碱解的时间为3～6h，优选4h；制备得到所述的分子量大于20万且小于等于100万道尔顿银耳异聚多糖；
或当制备得到分子量10～20万道尔顿银耳异聚多糖时，所述的滤液A的制备过程中制备银耳碱提液的碱提条件为：碱为质量浓度为5％～8％的氢氧化钠水溶液，优选6％氢氧化钠水溶液；所述的碱水与所述的银耳的体积质量比为15～25mL/g，优选20mL/g；碱解的温度为90～98℃；碱解的时间为3～6h，优选4h；制备得到分子量10～20万道尔顿银耳异聚多糖。
9.一种如权利要求8所述的银耳异聚多糖的制备方法制备得到的分子量为10～20万道尔顿的银耳异聚多糖。
10.一种如权利要求9所述的分子量为10～20万道尔顿的银耳异聚多糖在护肤品中的应用，所述的护肤品的功效优选包括深层补水和/或抗衰老。
银耳异聚多糖及其提取物、制备方法和应用
技术领域
[0001]本发明涉及一种银耳异聚多糖及其提取物、制备方法和应用。
背景技术
[0002]银耳异聚多糖作为一种功能性多糖，可应用于药品、保健品、食品和化妆品中，具有多种功效。专利CN100402555C公开了水溶液高温条件下提取得到的一种分子量在85～160万道尔顿的银耳杂多糖，并公开了其具有保湿润滑皮肤和粘膜、增强润滑感、抗氧化衰老、抗过敏、增稠稳定等功效。专利CN102161710A中公开了利用酸解法制备低分子量银耳异聚多糖的方法，并公开了分子量为500～10000道尔顿银耳异聚多糖在制备慢性萎缩性胃炎的药物和制备肿瘤辅助药物中的应用。专利CN1778824A中公开了碱溶液和水溶液提取的均一体银耳异聚多糖，其分子量在5万～7万道尔顿，分别具有抑制淋巴瘤、抗辐射、增强免疫力、抗病毒、抗氧化等功效。
[0003]由以上现有专利技术可以看出(1)不同分子量的银耳异聚多糖的功效是不同的；
(2)由于多糖往往以较大的分子状态存在于动植物体内，因此制备低分子量的多糖时必定需要一定的方法对糖苷键进行水解断裂。目前常见的水解糖苷键的方法有酸解、碱解和酶解。
[0004]酸解是采用一定浓度的盐酸等酸性物质进行水解，属于非专一性水解，可以很方便的将大分子多糖的糖苷键进行断裂，但酸解往往也会造成多糖的过度水解，一方面无法实现分子量的精准控制，
另一方面也会造成多糖收率的下降，影响其技术应用价值。另外，该方法由于酸的存在，对生产设备有特定的要求，不利于产品的生产转化。
[0005]碱解和酸解一样属于非专一性水解，但其水解作用温和，可以通过不同工艺条件的设置获得特定分子量的多糖。另外，其对生产设备要求不高，工艺应用不需要特定的设备。但是碱解也存在一些问题，碱解工艺容易导致产品颜加深，还可以将植物原料组织中的纤维素水解，得到碱纤维素钠及其裂解产物，这些物质作为杂质最终会和目标多糖一起被乙醇沉淀，作为杂质进入最终产品，严重影响产品的纯度和功效。因此，在进行碱液提取不同分子量多糖时，必须要考虑去除因为纤维素水解而产生的相关杂质，另外还要解决产品颜深的问题。
[0006]另外，采用酶解方法时酶种类的选择比较难，因为不同的多糖其糖苷键链接方式差异较大，且同一种多糖中也往往存在多种糖苷键，但是酶的专一性又比较强，一种酶只能水解一种糖苷键，所以对于酶的筛选存在较大难度，目前多采用酵母菌等不同微生物发酵方法以获得某种特定的酶进行多糖的酶解，开发周期长，费用高；银耳异聚多糖大分子结构主要以α-1,3糖苷键的链接方式存在，而目前尚无专一性的酶可应用于银耳异聚多糖大分子结构的酶解。
发明内容
[0007]本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中碱解糖苷键获取银耳异聚多
糖的方法纯度较低、颜深的问题，而提供了一种银耳异聚多糖及其提取物、制备方法和应用。利用本发明的制备方法可制得不同分子量范围的高纯度的银耳异聚多糖，收率可以达到20％以上，纯度可以达到93％以上；采用本申请的制备方法制得的10～20万道尔顿的银耳异聚多糖表现出了良好的促成纤维细胞增殖效果和促进成纤维细胞分泌透明质酸的能力，同时还表现出了优异的皮肤渗透性。
[0008]本发明提供了一种银耳异聚多糖提取物的制备方法，其包括以下步骤：将酸性絮凝剂与经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液混合，絮凝，固液分离得沉淀复合物，即可；其中，所述的酸性絮凝剂为絮凝剂的酸水溶液，所述的絮凝剂为壳聚糖。
[0009]本发明所述的酸性絮凝剂一般通过将所述的壳聚糖溶解于酸水中得到。其中，所述的酸水一般为本领域常规的可以将壳聚糖溶解的酸水，本发明优选盐酸水溶液；所述的盐酸水溶液的质量浓度优选0.25％～1.0％。所述的壳聚糖可以参照本领域常规进行选择，本发明优选壳聚糖的规格为：脱乙酰基≥85％；且20℃下，浓度为10克/升时的粘度≥200mpa.s。所述的酸性絮凝剂中，所述的絮凝剂的浓度优选0.005～0.02g/mL，更优选0.01g/mL。
[0010]本发明所述的银耳异聚多糖提取物的制备方法中，所述的“经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液”中酸的种类可为本领域该类操作中常规使用的酸的种类，本发明优选稀盐酸；所述的稀盐酸的质量浓度优选0.5％～6.0％，更优选1％～6.0％；所述的弱酸性一般指4≤PH＜7，优选6≤PH＜7；所述的
中性一般指PH＝7。所述的银耳一般指银耳子实体原料；所述的银耳子实体原料可为将银耳子实体原料利用纯水浸泡清洗得到的银耳子实体原料。[0011]本发明所述的银耳异聚多糖提取物的制备方法中，本发明所述的“经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液”制备方法可以参照本领域常规进行选择，一般为：将银耳进行碱解得到银耳碱提液后，用酸调节所述的银耳碱提液至弱酸性或中性，过滤得到的滤液即为所述的“经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液”。其中，所述的银耳可以直接进行碱解得到“所述的银耳碱提液”，也可以将所述的银耳匀浆后再进行碱解得到所述的银耳碱提液。所述的过滤优选减压精过滤。所述的碱解的条件可以根据不同分子量范围的银耳异聚多糖进行选择，不同的碱解条件(包括碱的种类、浓度与用量，碱解的时间和温度等)可以得到不同分子量范围的银耳异聚多糖，本发明中的碱解条件优选如下：碱优选氢氧化钠；所述的碱可以以碱水溶液的形式参与反应，所述的碱水溶液的质量浓度优选1～15％(例如3％、5％、6％、8％或10％)；所述的碱水溶液与所述的银耳的体积质量比优选10～30mL/g(例如15mL/g、20mL/g或25mL/g)；所述的碱解的时间优选2～10h(例如3h、4h、6h或8h)；所述的碱解温度优选90～98℃。
[0012]本发明所述的银耳异聚多糖提取物的制备方法中，所述的酸性絮凝剂的用量一般为可以将所述的“经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液”中的银耳异聚多糖絮凝完全，即可；本发明中，每100mL所述的“经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液”优选添加5～10mL所述的酸性絮凝剂；更优选添加5～8mL所述的酸性絮凝剂。所述的絮凝的温度优选10～35℃；所述的絮凝优选在搅拌下进行。所述的固液分离可以参照本领域的常规进行选择，本发明优选过滤。
[0013]本发明所述的银耳异聚多糖提取物的制备方法中，所述的“经酸调至弱酸性或中性的银耳碱提液”与所述的“酸性絮凝剂”的混合方式没有特殊限定，一般为将所述的酸性
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