钟岩;初丽伟
【摘 要】采用蒽酮-硫酸法测定了灵芝多糖的含量,并对灵芝多糖含量的不确定进行了评定.分析了测量不确定度分量的主要来源,对各不确定度分量进行了评定和计算.结果表明,灵芝多糖含量在10～60 mg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系,线性方程为A=8.7721c+0.0187,相关系数为0.9981.当灵芝多糖含量为1.13%时,其测量结果的扩展不确定度U=0.05%(k=2). 【期刊名称】《化学分析计量》
【年(卷),期】丞相长史2009(018)005
【总页数】4页(P7-10)
【关键词】灵芝多糖;蒽酮-硫酸法;不确定度;评定
【作 者】钟岩;初丽伟
【作者单位】吉林农业大学测试中心,农业部参茸产品质量监督检验测试中心,长春,130118;吉林农业大学测试中心,农业部参茸产品质量监督检验测试中心,长春,130118
【正文语种】中 文
多糖广泛分布于多种生物体中，是由醛糖或酮糖通过糖苷链连接而成的天然高分子多聚物，是构成生命的4大基本物质之一[1]。多糖在抗肿瘤、抗炎、抗病毒、降血糖、抗衰老、抗凝血、提高免疫等方面都发挥着重要生物活性[2]。因此对多糖的研究和开发已越来越引起人们的关注。
老年法笔者采用《中华人民共和国药典》2005年版第2部[3]中蒽酮-硫酸法测定灵芝多糖的含量。分析化学传统上以准确度和精密度来表征测定的结果，随着分析化学的发展，1995年国际计量局、国际标准化组织、国际理论化学和应用化学联合会等国际组织制定和发布了《测量不确定度表示指南》[4]，我国国家质量技术监督局也在1999年批准发布了JJF 1059-1999《测量不确定度评定与表示》的计量技术规范[5]，这些文件的发布，进一步要求分析检测的结果报告不仅有测定平均值，还要包括测定结果的不确定度。已有很多分析工作者对化学分析测试中的不确定度进行了评定[6-8]。
笔者以紫外分光光度法测定灵芝多糖含量，并对其测定结果的不确定度进行了评定。该评定为实验室在该检测过程中进一步提高检测数据的可靠性和一致性提供参考。
乳化硅油1 实验部分
病因学1.1 主要仪器与试剂
紫外分光光度计:DU-7500型，美国Backman公司；
电子分析天平：1712 mp8型，德国赛多利斯公司；
灵芝粉：灵芝购于市场，实验室自制粉末；
葡萄糖：分析纯，北京化工厂；
苯酚：分析纯，北京市笃信精细制剂厂；
蒽酮：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；
乙醇：95%，分析纯，天津市化学试剂三厂；
硫酸：分析纯，北京化工厂；
蒽酮硫酸溶液：0.1%，精密称取蒽酮0.1 g，溶于100 mL 80%的硫酸溶液中。
1.2 实验方法
(1)样品处理
精密称取灵芝粉粉末2 g(精确至0.000 1 g)，置于250 mL具塞三角瓶中，加入50 mL水，置沸水浴中提取1 h，用布氏漏斗抽滤，然后加30 mL水，在沸水浴中提取40 min，再用布氏漏斗抽滤，将滤液合并，转移至100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀备用。吸取多糖提取液10 mL，加入95%乙醇150 mL，摇匀，于4℃冰箱中放置12 h，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水复溶并转移至50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
(2)葡萄糖标准溶液的配制
精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品1 g，置于100 mL容量瓶中，溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10 mg/mL的标准贮备液，吸取上述贮备液1 mL定容至100 mL，配成0.1 mg/mL的标准工作溶液。
(3)测定
以空白试剂作参比，对葡萄糖标准溶液进行扫描，测得最大吸收波长，蒽酮-硫酸法的最大吸收波长为625 nm。
2 结果与讨论
2.1 绘制工作曲线
准确吸取葡萄糖标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分别置于10 mL具塞试管中，加水至2.0 mL，加入硫酸蒽酮溶液6 mL，摇匀，置沸水浴中加热15 min，取出，放入冰浴中冷却15 min，以试剂为空白，在625 nm处测定吸光度A。用最小二乘法对吸光度A与葡萄糖浓度c(mg/mL)进行线性拟合，得到回归方程A=8.772 1c+0.018 7，相关系数r=0.998 1。
2.2 样品测定
吸取待测样品溶液2 mL，按工作曲线的测定条件进行测定，并从工作曲线上求出对应的浓度，从而计算出样品中多糖含量,结果见表1。
表1 多糖含量的测定结果(n=6)取样量/mg吸光度葡萄糖浓度/mg·mL-1多糖含量/%平均值/%RSD/%2000．42000．82000．62000．62000．32000．40．41870．42220．42570．42220．40110．39760．04560．04600．04640．04600．04360．04321．141．151．161．151．091．081．130．03
3 数学模型
灵芝多糖含量计算公式为：
(1)
式中：w——样品中灵芝多糖的含量，%;
c——样品待测液中葡萄糖的浓度，mg/mL;
V——样品定容体积，mL;
灰尘的作用
f——稀释倍数;
m——样品质量，mg。
4 测量不确定度的主要来源
依据《中华人民共和国药典》2005年版第2部[3]的方法测定灵芝中多糖含量，其不确定度来源主要有以下几个方面：①样品称量引入的不确定度；②样品定容体积引入的不确定度；③标准溶液稀释引入的不确定度；④重复测量引入的不确定度；⑤标准曲线的非线性引入的不确定度。 5 测量不确定度的评定
5.1 样品称量引入的不确定度u(m)
样品称量引入的不确定度包括天平校准引入的不确定度和称量变动性引入的不确定度。
5.1.1 天平校准引入的不确定度
天平检定给出分析天平的误差为0.1 mg，按矩形分布则由天平校准引入的不确定度为：
5.1.2 称量变动性引入的不确定度
按《化学分析中不确定度的评估指南》[9]得到分析天平的变动性约为0.5乘以最后一位有效数字。该实验室分析天平的最后一位有效数字为0.1 mg，所以称量变动性引入的不确定度分量为：
u2(m)=0.1×0.5=0.05 (mg)
称量采用差量法，应计2次不确定度，所以天平称量引入的不确定度为:
称量样品m=2 000 mg，则样品称量引入的相对标准不确定度为：
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