苯酚硫酸法测定多糖

苯酚—硫酸法测定党参总糖
1.材料与方法
1.1 材料与试剂,仪器
1.1.1 材料、试剂
电镀铜党参(肉党、普通纹党、产于中寨的纹党);95%乙醇;苯酚;浓硫酸均为分析纯。
1.1.2 仪器与设备
2400分析天平,101A型电热鼓风干燥箱,型可调式电热板,电热恒温水浴锅,5200H超声清洗器,9100紫外-可见分光光度
1.2 方法
1.2.2 供试品溶液的制备
取党参粉末2g,置圆底烧瓶中,加95%乙醇3次(20.20.20)每次2h,过滤,蒸干乙醇,残渣用水溶解,在电热板上加热,提取3次(50.50.50),每次2h,过滤,滤液置于50容量瓶中,加蒸馏水至刻
度摇匀。
1.2.3 标准溶液的配制
精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖10置于100 容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度摇匀,得0.1/的储备溶液,备用。
1.2.3 5%苯酚溶液的制备
2012年中央电视台中秋晚会
精确量取6.3 80%的苯酚溶液转移至100容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀后置于棕试剂瓶中,备用。(实验室苯酚为师配好的80%的溶液,避光密封保存于冰箱中,用时水浴加热使其成为透亮的溶液)
1.2.4 标准曲线的制备
精确吸取葡萄糖标准液0、1、2、3、4、5、6 ,分别置于10 容量瓶中,以蒸馏水补至 10 摇匀,依次吸取2加入试管中,加入苯酚液1.0 和浓硫酸5.0 ,混匀,在室温放置30 后,于波长490 处测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标,葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。(10*10-2*1/10=10*10-3110μ.20.30.40.50.60)
1.2.5 样品的测定
准确吸取供试品溶液0.1 加水定容至10,精确吸取此稀释液2于试管中,按标准曲线制备的方法测定吸光度值,并根据回归方程,求得其浓度,计算样品中总糖的含量。(党参溶液的浓度=2/50*0.1/10=1/25001=1/2.5 1=400μ1)
2  结果与分析
2.1 标准曲线
标准曲线回归方程建立用紫外分光光度计,在4 9 0 n m 的波
长处测定吸光度,以试剂空白参比实验。结果见表1
标液体积() 0    2    4    6 8
标液多糖含
0    4 8 12 16
量(μg)
吸光度0 0.171 0.379 0.666 0.992
0.0620.0542,r2=0.9826,以吸光度为纵坐标葡萄糖浓度为横坐标绘
制标准曲线见图
荧光发射光谱2.2 样品中多糖含量测定结果
按上述多糖含量测定方法测的样品的吸光度,并按标准曲线测得
的多糖含量占药材总量如下表。
肉党1 肉党2 纹党1 纹党2 中寨纹党1 中寨纹党2 吸光度0.362 0.487 0.622 0.579 0.874 0.624
占药材含量百分比
0.84    1.09    1.36    1.25    1.37    1.35
(%)
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上图所得的标准曲线,线性不好,按此曲线药材中所得糖含量也
不高,并且当标准溶液液为10时,测不出吸光度,所以改变标液浓
度浓度,取葡萄糖标准液0、1、2、3、4、5、6 按上述方法重做,
所得的吸光如
标液体积callerloc
0    1    2    3    4    5    6
()
电镀铜
标液多糖
0    2    4    6 8 10 12
含量(μg)
吸光度0 0.198 0.567 0.802    1.002 1.391    1.579
0.1350.0185,r2=0.9937,以吸光度为纵坐标葡萄糖浓度为横坐标绘
制标准曲线见图
样品中多糖含量测定结果
按上述多糖含量测定方法测的样品的吸光度,并按标准曲线测得
吸光度0.783 0.680 0.942 0.809 0.874    1.047
占药材含量百分比
(%)7.42    6.5 8.9 7.66 8.5 9.87

本文发布于:2024-09-22 10:37:10,感谢您对本站的认可!

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