(19)国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011246494.3
(22)申请日 2020.11.10
(71)申请人 中国人民解放军南部战区总医院
地址 510014 广东省广州市流花路111号
(72)发明人 肖桂珍 彭娜 苏磊 邱小文
童华生 金迪 王孜文
(74)专利代理机构 北京八月瓜知识产权代理有
限公司 11543
专利代理师 陶敏
(51)Int.Cl.
A23L 33/135(2016.01)
A23L 33/21(2016.01)
A23L 33/16(2016.01)
A23L 2/39(2006.01)
A61K 35/741(2015.01)
A61P 43/00(2006.01)A61P 29/00(2006.01)
(54)发明名称
健品中的应用
(57)摘要
本发明提供了AKK益生菌在制备防治中暑药
物、食品或保健品中的应用。本发明的AKK益生菌
障、降低血中内毒素含量来防治中暑，因此可以
用于防治中暑的药物、食品或保健品中，为防治
中暑提供了新的、
有效的生物手段。权利要求书1页 说明书8页 附图3页CN 114451557 A 2022.05.10
C N 114451557
A
1.AKK益生菌在制备防治中暑药物、食品或保健品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述AKK益生菌为AKK活菌或AKK灭活菌，优选为AKK灭活菌，更优选为AKK巴氏灭活菌。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述AKK灭活菌是通过在60-70℃下对AKK 活菌加热25-35min得到的。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述AKK益生菌是通过保护肠屏障和/或降低血中内毒素含量来防治中暑的。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述AKK益生菌的用量为1010-1012cfu。
6.一种防治中暑的固体饮料，其特征在于，包括AKK益生菌；
优选地，所述AKK益生菌为AKK活菌或AKK灭活菌，进一步优选为AKK灭活菌，更优选为AKK巴氏灭活菌；
优选地，所述固体饮料中AKK益生菌的含量为0.8-1.3g；
优选地，所述AKK益生菌的菌数为1010-1012cfu/g。
7.根据权利要求6所述的固体饮料，其特征在于，还包括益生元，所述益生元选自低聚果糖和菊粉中的至少一种；
优选地，所述固体饮料中益生元的含量为4.5-5.5g，更优选为5g。
8.根据权利要求6所述的固体饮料，其特征在于，还包括电解质，所述电解质包括钠25-75mg和钾60-180mg；
优选地，所述钠的来源为枸橼酸钠或氯化钠；
优选地，所述钾的来源为枸橼酸钾或氯化钾。
9.根据权利要求6所述的固体饮料，其特征在于，还包括调味剂，所述调味剂包括风味剂和/或甜味剂；
优选地，所述风味剂为柠檬味或苹果味的风味剂；
优选地，所述甜味剂为阿斯巴甜。
10.权利要求6-9任一所述的固体饮料的制备方法，其特征在于，包括：
将AKK益生菌制成冻干粉；
优选地，所述制备方法还包括：
将益生元、电解质和调味剂烘干、过筛后与AKK益生菌的冻干粉混合均匀，随后真空包装。
权 利 要 求 书1/1页CN 114451557 A
AKK益生菌在制备防治中暑药物、食品或保健品中的应用
技术领域
[0001]本发明涉及益生菌技术领域，尤其是涉及AKK益生菌在制备防治中暑药物、食品或保健品中的应用。
背景技术
[0002]中暑是人在气温高、湿度大的环境中进行高强度的训练或重体力劳动时，发生体温调节障碍，水、电解质平衡失调，心血管和中枢神经系统功能紊乱为主要表现的一种症候。肠粘膜屏障功能受损、通透性增加，导致细菌及内毒素血症，引起系统性炎症反应(SIRS)和多器官功能不全(MODS)。近来最新的研究分析其可能机制为：机体发热、腹泻等使肠道细菌发生变化，肠道屏障破坏，肠源性内毒素进入循环增加，产生炎症因子，成为中暑、特别是劳累型中暑发生的重要诱因，而干预此机制、保护肠屏障则可减缓和阻断中暑发生和进展。 [0003]人体肠道内栖居着大量的细菌，其总数达到1013-1014个，其基因总数约为人体基因数量的数百倍，重约1.5kg，是机体不可缺少的“微生物器官”，对人体生命活动产生重要影响。温度改变可以显著影响肠道菌，肠道微环境平衡被打破，导致菌失衡。肠道菌失调可增加中暑风险。
[0004]AKK菌是健康人中肠道存在的一种厌氧菌，在肠道中的丰度通常占1％-3％。目前，关于AKK益生菌的相关研究大部分集中在肥胖、2型糖尿病等代谢性疾病，或是精神和心理疾病上，尚未发现其与中暑相关的研究。
发明内容
[0005]本发明的目的在于提供AKK益生菌在制备防治中暑药物、食品或保健品中的应用，该AKK益生菌能够通过保护肠屏障、降低血中内毒素含量来防治中暑，因此可以用于防治中暑的药物、食品或保健品中，为防治中暑提供了新的、有效的生物手段。
[0006]本发明提供AKK益生菌在制备防治中暑药物、食品或保健品中的应用。
[0007]本发明的AKK益生菌为Akkermansia muciniphila菌(即嗜黏蛋白阿克曼氏菌，简称AKK菌，菌种编号为ATCC BAA-835)，可通过常规方式购自美国菌种保藏中心。 [0008]本发明对AKK益生菌的具体应用形式不作严格限制；具体地，所述AKK益生菌可以为AKK活菌或AKK灭活菌，优选为AKK灭活菌，更优选为AKK巴氏灭活菌。相对于AKK活菌，AKK 灭活菌的优点包括：易于保存、不受消化液影响、减少因肠屏障受损造成活菌入血的可能，因此具有更广泛的应用性。
[0009]本发明对AKK益生菌的灭活方式不作严格限制，可以采用本领域的常规灭活方式，例如巴氏灭菌等。具体地，所述AKK灭活菌可以通过在60-70℃下对AKK活菌加热25-35min灭活得到。
[0010]在本发明中，所述AKK益生菌是通过保护肠屏障和/或降低血中内毒素含量来防治中暑的；对AKK益生菌的具体用量不作严格限制，只要能够达到上述防治中暑的效果即可，
所述AKK益生菌的用量例如可以为1010-1012cfu。
[0011]本明还提供一种防治中暑的固体饮料，包括AKK益生菌；进一步地，所述AKK益生菌为AKK活菌或AKK灭活菌，优选为AKK灭活菌，更优选为AKK巴氏灭活菌。
[0012]在本发明的固体饮料中，AKK益生菌的含量可以为0.8-1.3g；进一步地，所述AKK益生菌的菌数可以为1010-1012cfu/g。更具体地，AKK活菌或其巴氏灭活菌的添加方式列举如下：1)AKK活菌1g(菌数1010-1012cfu/g)；2)AKK灭活菌1g(菌数1010-1012cfu/g)；3)AKK灭活菌1.2g(菌数1010-1012cfu/g)。
[0013]本发明的固体饮料还可以包括益生元，所述益生元可以选自低聚果糖和菊粉中的至少一种。对固体饮料中益生元的含量不作严格限制，益生元的含量可以为4.5-5.5g，优选为5g。更具体地，益生元的添加方式列举如下：1)低聚果糖3g，菊粉2g；2)低聚果糖2g，菊粉3g。
[0014]本发明的固体饮料还可以包括电解质，所述电解质包括钠25-75mg和钾60-180mg；对所述钠和钾的来源不作严格限制，其中：所述钠的来源可以为枸橼酸钠或氯化钠，所述钾的来源可以为枸橼酸钾或氯化钾。更具体地，电解质的添加方式列举如下：1)钠：25-75mg (柠檬酸钠：0.11-0.32g或氯化钠0.064-0.192g)；2)钾：60-180mg(柠檬酸钾：0.17-0.51g或氯化钾0.12-0.35g)。
[0015]本发明的固体饮料还可以包括调味剂，所述调味剂可以包括风味剂和/或甜味剂；其中，所述风味剂可以为柠檬味或苹果味的风味剂，所述甜味剂可以为阿斯巴甜。[0016]本发明的固体饮料以AKK活菌或其巴氏灭活菌作为主要原料，其对中暑的肠屏障有保护作用，可以降低内毒素血症，起到防治中暑的作用；以低聚果糖和/或菊粉作为益生元，其几乎不能被消化，在结肠被有益微生物利用生成短链脂肪酸等，可被AKK菌利用并促进增殖；钠和钾可提供机体丢失的电解质。在本发明的固体饮料，AKK活菌或其灭活菌能够在固体饮料中稳定存在，在用温水溶解时为均匀液体，形成一种奶油状结构，提供光滑的口感和风味。
[0017]本发明还提供上述固体饮料的制备方法，包括：将AKK益生菌制成冻干粉。[0018]进一步地，本发明的制备方法还包括：
[0019]将益生元、电解质和调味剂烘干、过筛后与AKK益生菌的冻干粉混合均匀，随后真空包装。
[0020]本发明的AKK益生菌能够通过保护肠屏障、降低血中内毒素含量来防治中暑，因此可以用于防
治中暑的药物、食品或保健品中，为防治中暑提供了新的、有效的生物手段。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0022]图1为实施例2粪便细菌测序工作流程图；
[0023]图2为实施例2中暑组和健康对照组肠道AKK含量水平的差异；其中，Control为健
康对照组，Heat为中暑组，与对照组相比，**p<0.01；
[0024]图3为实施例2中暑组和健康对照组血浆D-乳酸含量水平的差异；其中，C为健康对照组，H为中暑组，与对照组相比，*p<0.05；
[0025]图4为实施例2中暑组和健康对照组血清FABP2含量水平的差异；其中，C为健康对照组，H为中暑组，与对照组相比，**p<0.01；
[0026]图5为实施例3中不同组大鼠血液中D-乳酸含量的比较；其中：C为正常对照组；H为中暑组；A为AKK活菌+中暑组；U为AKK灭活菌+中暑；与正常对照组相比，*P<0.05，**P<0.01；与中暑组相比，#P<0.05，##P<0.01；
[0027]图6为实施例3中各组大鼠结肠的病理结构改变(HE染)×400；其中：control为正常对照组；heat为中暑组；AKK为AKK活菌+中暑组；Amuc为AKK灭活菌+中暑组；ileums为回肠；colons为结肠；
[0028]图7为实施例3中各组大鼠紧密连接超微结构×20000；其中，C为正常对照组；H为中暑组；A为AKK活菌+中暑组；U为AKK灭活菌+中暑组；
[0029]图8为实施例4中不同组大鼠血液中内毒素含量的比较；其中：C为常温对照组；H为中暑组；A为AKK活菌+中暑组；U为AKK灭活菌+中暑组；与正常对照组相比，*P<0.05，**P< 0.01；与中暑组相比，#P<0.05，##P<0.01。
具体实施方式
[0030]应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0031]需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
[0032]下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0033]实施例1AKK活菌及其灭活菌的制备
[0034]一、AKK菌培养
[0035]将AKK标准菌(ATTC BAA-835)进行复苏，加入含5％去纤维羊血的MRS肉汤培养基(BD 211825)中，培养于密封培养罐，于37℃下培养18-24小时，得到AKK菌培养液。[0036]二、离心
[0037]取上述培养得到的AKK菌培养液，于6000g下离心10min，弃去上清，收集AKK菌体沉淀。
[0038]三、获得AKK活菌
[0039]将上述AKK菌体沉淀用PBS稀释，反复离心，至其中无红细胞残留，菌液即为AKK活菌；用比法测量细菌浓度，计算个数。
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