放线菌介于细菌和丝状真菌的一类丝状原核生物，多为腐生，少数寄生。腐生型在自然界物质循环中起着重要作用。放线菌突出特性产生抗菌素，常以孢子或菌丝状态存在，以土壤最多，常存在肥土 农田土 中性或偏碱性土壤中。
1.拮抗放线菌的筛选方法：
待测菌株与检测病原菌通用培养基制成平板，在平板中央划线接种待测菌株，28-30℃ 3-5d，将病原菌垂直方向划线于待测菌生长线的两侧，不能与待测菌相连，在37℃ 24h取出观察。如果待测菌株对病原菌有抑制活性，病原菌靠近待测菌的一端生长会受到待测菌抑制产生抑菌带。可根据抑菌带的长短来判断待测菌活性强弱。选择抑制活性强的复筛。 1.2抑菌圈法或十字交叉法：常用的初筛方法
将待测菌接种于平板，长出成熟菌落后，用打孔器将供试病原菌苔打成直径5-6mm小菌块，
并将其移入到病原菌平板培养基中，将待测菌与病原菌呈十字交叉排列，即病原菌在中央，待测菌置于病原菌的四周，培养3-4d。若有抑菌活性在待测菌周围形成一个没有生长病原菌抑菌圈。若菌块厚度大小一致的，抑菌圈的大小可直观反应待测菌抑菌活性的强弱。
1.3纸片法或生长速率法：
主要测定发酵液的抑菌活性，即将相同灭菌后的圆形滤纸片放于待测发酵液中，取出并黏贴在接种有病原菌的平板培养基，培养后观察有无抑菌圈或抑菌圈的大小。
2.放线菌分离与筛选.
2.1培养基；
2.1.1改良高1号：可溶性淀粉20g/L KH2PO40.5g/L NaC10.5g/L MgSO40.2-0.5g/L KNO3 1g/L FeSO40.01g/L 重铬酸钾（3%）3.3mL/L PH7.2-7.4（分离保存用）每100ml培养基加入1ml0.1℅的FeSO4溶液。
2.1.2淀粉培养基和秸秆腐解物培养基
2.1.3拮抗试验培养基：高1号 牛蛋 PDA改良培养基加3g牛肉膏
2.2抑菌剂的选择：有效降低细菌真菌的数量，细菌扩散真菌蔓延速度迅速。
重铬酸钾50-75ug/ml(150ug/ml为宜)或另添加1-2ug/ml青霉素，可显著抑制细菌和真菌生长，不影响放线菌的数量和种类。
2.3靶标菌：枯草杆菌 大肠杆菌 金黄葡萄球菌 八联球菌 变形杆菌
2.4放线菌分离与筛选
2.4.1传统的分离筛选思路；
以对某些如病原菌或杂草，昆虫为靶标的抑制和杀灭效果为标准筛选产生活性物质的放线菌，即筛选拮抗放线菌。
初筛：将分离得到菌株进行真对靶标抑制活性筛选。
优点：较早知道是否筛选到拮抗菌株，筛选范围广。缺点：方法粗放，浪费很多初始条件下不显示活性的菌种。
复筛：对初筛的阳性菌株进一步改进，便于有效筛选出针对靶标的菌株。
2.4.2样品（土壤）处理：风干或加热是在杂菌抑制中较常见预处理方法。室温风干处理得到的放线菌种类和数量均高于加热处理。室温风干10d和20d放线菌数量无明显变化。
2.4.3放线菌分离与纯化
无菌条件下取1.0g风干土壤样品置于99mL/150mL三角瓶中（有时加入10-15滴10℅苯酚），振荡20-30min，然后将悬液梯度稀释至10-6，取0.1mL梯度液涂布于含重铬酸钾培养基上，28℃ 5-7d，挑选生长快的不同的菌落进行划线分离纯化（镜检）至纯培养物，转接于斜面保存（甘油法 -20℃冷冻保藏）。
附：放线菌菌落硬度大，干燥致密与基质结合紧密，不易挑取。培养箱中放置一杯水以增加湿度，平板相对厚些，避免过干涸。如将材料干燥。高温。低温处理并改变培养温度和培养基成分，得到不同放线菌。
2.4.4筛选（拮抗试验）：
2.4.4.1初筛：
牛津杯法：24h摇瓶靶细菌悬浮液均匀涂布于平板，中央放置牛津杯，在牛津杯（内径6mm，外径8mm）中分别加试验菌发酵液0.15mL和无菌发酵液0.15mL，30℃ 2-3d，观察是否有抑菌圈产生，并测抑菌圈的直径，阴性对照：无菌水。
对峙培养法（初筛）：PDA平板以圆点为中心划一条直线，中心点接放线菌培养3d后，直线的两端距中心相同距离接同一病原菌。培养一定时间，是否有抑菌圈产生，有抑菌圈的测量抑菌圈的相对半径（抑菌圈的半径—放线菌菌落半径），选择拮抗好的放线菌进入复筛。
琼脂扩散法（初筛）： 分离纯化种接种到改良黄豆粉琼脂培养基上，28℃ 7-8d，用打孔器打成直径5mm琼脂块。取指示菌0.1mL涂布于普通琼脂平板，挑取琼脂块反贴到指示菌平板上，（鳗弧菌 肠型点状气单胞菌28℃培养，大肠和金黄葡萄糖球菌37℃培养，24h后）观察抑菌圈和测量。
2.4.4.2复筛：将初筛有较强抗菌作用的放线菌株接种于改良黄豆粉液体培养基中，28℃ 140r/min 7-8d。取指示菌0.05mL涂布于普通琼脂平板上，用灭菌的打孔器在培养基上打孔，取放线菌培养液0.05mL注入孔中，培养24-48h后进行抑菌观察和测量。
2.4.5初步鉴定：
2.4.5.1菌落特征和形体特征
接种于高氏1号培养基上，插片，28℃培养3 5 7 10 15d，取出插片进行观察，气生 基内菌丝以及是否产生横隔 断裂等特征，并观察它们的生长情况，气生和基内菌丝颜，作为分类的依据。
2.4.5.2生理生化试验：
进行明胶液化 牛奶凝固和胨化 硝酸盐还原 淀粉水解 硫化氢产生等试验。
菌株 明胶液化 牛奶凝固 牛奶胨化 硝酸盐还原 淀粉水解 硫化氢产生
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